李雯雯
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 副溶血性弧菌致病性标志基因tdh的实时荧光定量聚合酶链式反应的建立被引量：2
- 2008年
- 目的:建立一个用于副溶血性弧菌致病性定量测定的检测体系.方法:以多组tdh基因的保守序列为基础,设计实时荧光定量PCR扩增适用的引物和TaqMan探针.以定量方式提取副溶血性弧菌基因组DNA,以tdh+菌株为阳性对照,建立实时荧光定量PCR方法.以tdh荧光定量结果与绝对菌数浓度作参比,以确定tdh基因在菌群中的拷贝水平.结果:使用正向序列5′-CGAAG ATGTT TATGG TCAAT C-3′(位置在467～487bp处),反向序列5′-ACCGC TGCCA TTG-TA TAGTC T-3′(位置在571～551bp处),TaqMan探针5′-FAM-TGACA TCCTA CATGA CTGTG AAC-ECLIPSE-3′(位置在517～539bp处)建立一个实时荧光定量PCR反应,目的片段长度105bp.建立反应的DNA拷贝数对数值与Ct值线性关系为y=-3.144logx+43.229(r=0.997,P<0.001).建立了菌液A值与显微镜下绝对菌数浓度的相关关系为y=2.0452x+6.2845(r=0.7828,P<0.01).根据tdh基因拷贝数与绝对菌数相比可计算tdh基因的单菌体拷贝量.结论:建立了一个定量副溶血性弧菌tdh基因拷贝水平的实时荧光定量PCR检测方法,可应用于副溶血性弧菌致病性的标准化定量测定体系.
- 王宏萍周晓明张继伦姜婷李雯雯鲍依稀
- 关键词：弧菌副溶血性聚合酶链反应
