王亮 作品数:20 被引量:33 H指数:4 供职机构: 新乡医学院第一附属医院 更多>> 发文基金: 河南省医学科技攻关计划项目 河南省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
二甲双胍对肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机制 被引量:1 2024年 目的探讨二甲双胍对肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法30只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注组+二甲双胍组(I/R+MET组)。I/R组和I/R+MET组小鼠建立肝脏缺血再灌注损伤模型,Sham组小鼠不建模。I/R+MET组小鼠术前每日二甲双胍200 mg/kg腹腔注射,术前24 h停止给药。Sham组和I/R组小鼠术前每日腹腔注射等体积生理盐水。3组小鼠在术后6 h,取静脉血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度。原位缺口末端标记法(TUNEL)染色试剂盒分析3组肝脏组织细胞凋亡。放射免疫法检测3组小鼠氧化应激反应。酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组小鼠肝脏炎性因子水平变化。蛋白质免疫印迹分析3组小鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、UNC-51样激酶(ULK1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、自噬底物p62蛋白表达水平。组间计量数据比较采用单因素方差分析。结果I/R+MET组小鼠血清ALT和AST水平[(62.37±8.07)、(121.51±20.45)U/L]明显低于I/R组[(140.53±13.07)、(187.19±18.73)U/L],差异有统计学意义(t=18.150、7.489,P<0.05)。I/R+MET组小鼠肝脏组织炎性因子[(55.70±6.36)、(39.62±6.66)、(64.12±5.33)pg/g]低于I/R组[(99.15±7.45)、(82.73±8.90)、(102.40±13.17)pg/g],差异有统计学意义(t=18.580、14.030、9.630,P<0.05)。I/R+MET组小鼠血清MDA水平[(1.03±0.05)μmol/ml]明显低于I/R组[(1.73±0.14)μmol/ml],差异有统计学意义(t=14.970,P<0.05)。I/R+MET组小鼠血清SOD水平[(129.70±7.12)U/ml]明显高于I/R组[(99.50±10.66)U/ml],差异有统计学意义(t=14.970,P<0.05)。I/R+MET组小鼠肝脏组织TUNEL染色阳性率[(13.57±2.01)%]明显低于I/R组[(26.40±4.05)%],差异有统计学意义(t=8.967,P<0.05)。I/R+MET组小鼠肝脏组织AMPK磷酸化和ULK1磷酸化水平(1.25±0.06、1.37±0.09)明显高于I/R组(0.65±0.07、0.96±0.06),差异有统计学意义(t=19.480、11.670,P<0.05)。I/R+M 王亮 王建国 王迎关键词:二甲双胍 肝脏缺血再灌注 炎性反应 氧化应激 自噬 沉默NCOA4表达对胆管癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响 2024年 目的 探讨沉默核受体共激活因子(NCOA)4对胆管癌细胞RBE和HCCC-9810细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。方法 实验分为阴性对照(NC)组(转染无序siRNA)、实验(siRNA)组(转染NCOA4 siRNA)。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胆管癌组织和癌旁组织中NCOA4表达;小干扰RNA沉默细胞NCOA4表达,qRT-PCR和Western印迹检测NCOA4 mRNA及蛋白表达水平;Western印迹检测沉默NCOA4对谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4蛋白表达的影响;CCK-8和克隆形成检测细胞增殖、克隆形成能力;划痕愈合和Transwell检测细胞迁移、侵袭能力;癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析NCOA4表达水平对患者生存预后的影响。结果 胆管癌组织中NCOA4相对表达量明显低于癌旁组织(P<0.001);与NC组相比,实验组NCOA4 mRNA及蛋白表达水平均显著降低,GPX4蛋白表达明显升高,细胞克隆形成能力明显提高,细胞迁移及侵袭能力明显提高(均P<0.05);NCOA4低表达患者5年生存率显著降低(P<0.05)。结论 沉默NCOA4基因表达可促进胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并上调GPX4蛋白水平;提示NCOA4可能通过NCOA4/GPX4铁死亡通路起到促癌作用,并且与临床预后紧密相关。 申文龙 李世朋 李泽信 王迎 王亮 王建国关键词:胆管癌 增殖 敲除NOR1基因对人肝癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制 被引量:2 2020年 目的 探究敲除NOR1基因后对人肝癌裸鼠移植瘤生长、存活率及器官损伤的影响。 方法 SPF级雄性BALB/C裸鼠30 只随机分为Control组(n=10)、Scramble组(n=10)、siNOR1组(n=10),构建阴性对照质粒 (Scramble)和 siNOR1质粒转染至HepG2细胞并接种至裸鼠构建移植瘤裸鼠模型。连续30 d每5 d检测裸鼠移植瘤组织体积;检测移植瘤重量;免疫组化检测Ki-67、Caspase-3、Notch、NOR1表达情况;Western Blot检测Survivin、Notch1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达量情况,HE染色观察肝、肾、肺、脑病理损伤程度。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;生存分析采用Kaplan-Meier法,生存率的比较采用log-rank检验法。结果 从建模第20天开始,与Control组相比,siNOR1组第20、25、30 天移植瘤体积显著减小[(418.71±78.24)mm3 vs (149.6.16±60.05)mm3、(864.22±125.66)mm3 vs (239.83±100.51)mm3、(1468.45±199.78) mm3 vs (446.54±147.09) mm3,P值均<0.05];第30天时取出移植瘤,与Control组相比,siNOR1组移植瘤质量显著减小[(0.45±0.07)g vs (0.12±0.04)g,P<0.05];与Control组相比,siNOR1组移植瘤组织中Ki-67、Notch、NOR1阳性表达率显著降低[Ki-67:(48.98±9.75)% vs (11.51±5.09)%, Notch: (62.51±9.26)% vs (18.75±4.61)%,NOR1:(76.33±8.31)% vs (16.57±3.76)%, P值均<0.05],Caspase-3阳性表达率显著升高[(6.39±4.67)% vs (38.03±9.28)%, P<0.05];siNOR1组模型裸鼠30 d内生存率显著高于Control组[(77.66±6.75)% vs (25.32±4.63)%,χ^2=6.897,P<0.05];Western Blot检测结果显示,与Control组相比,siNOR1组Survivin、Notch1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达水平均显著降低(Survivin: 0.34±0.06 vs 0.02±0.01;Notch1:0.16±0.03 vs 0.03±0.01;NICD:0.26±0.05 vs 0.04±0.02;Hes1:0.35±0.04 vs 0.06±0.02;Hey: 0.29±0.06 vs 0.05±0.02,P值均<0.05),且siNOR1组裸鼠各组织器官损伤情况均得到有效缓解。结论 敲除NOR1基因抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,提高模型裸鼠生存率,并缓解模型裸 游焜 王大军 王亮 王建国关键词:肝肿瘤 乙酰肝素酶与CD34在乳腺癌组织中的表达及意义 李泽信 王建国 游焜 王迎 李建 王亮 翁昆仑 张鹏二甲双胍通过微小RNA-19a对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用 2024年 目的:探讨二甲双胍通过微小RNA(miRNA,miR)-19a对肝脏缺血再灌注损伤的保护机制。方法:30只C57BL/6小鼠随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组、二甲双胍组,每组10只。缺血再灌注组和二甲双胍组小鼠建立肝脏缺血再灌注损伤模型,假手术组小鼠不建模。二甲双胍组小鼠术前3 d每日尾静脉注射二甲双胍200 mg/kg,术前24 h停止给药。假手术组和缺血再灌注组小鼠术前尾静脉注射等体积生理盐水。3组小鼠在术后6 h采用放免法检测血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶浓度。取肝脏组织,采用转录组筛选差异miRNA;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析差异miRNA表达水平;生物信息学分析miR-19a的靶基因;采用酶联免疫吸附实验分析分析3组小鼠肝脏炎性因子水平变化;采用蛋白质免疫分析miR-19a的靶蛋白沉默调节蛋白1(SIRT1)及其靶蛋白下游分子核转录因子(NF-κB)表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:二甲双胍组小鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平[(120.16±14.67)、(111.30±20.45) U/L]低于缺血再灌注组[(120.16±14.67)、(202.45±18.74) U/L],差异有统计学意义( t=9.492、10.390, P<0.05)。二甲双胍组小鼠肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6水平[(67.94±8.16)、(50.46±4.95)、(75.06±6.63) pg/g]低于假手术组[(111.29±8.75)、(93.37±10.79)、(117.94±13.94) pg/g],差异有统计学意义( t=11.460、11.420、8.782, P<0.05)。转录组分析结果显示miR-19a为差异最为显著的miRNA。二甲双胍组小鼠miR-19a表达水平(0.78±0.09)低于假手术组(0.95±0.13),差异有统计学意义( t=5.992, P<0.05)。生物信息学研究显示SIRT1是miR-19a的靶基因。二甲双胍组小鼠SIRT1蛋白表达水平(0.98±0.10)低于假手术组(1.56±0.12),差异有统计学意义( t=11.680, P<0.05)。二甲双胍组小鼠NF-κB p65乙酰化水平(0.72±0.06)高于假手术组(0.35±0.08),差异有统计学意义( t=11.480, P<0 王亮 王建国 王迎关键词:二甲双胍 肝脏缺血再灌注损伤 核转录因子 骨髓增生异常综合征合并门静脉海绵样变巨脾切除一例 王建国 李泽信 徐红伟 王迎 王亮长链非编码RNA胃癌相关转录本3在肝癌组织的表达及其对肝癌HepG2细胞生物学特性的影响 被引量:4 2019年 目的探讨长链非编码RNA胃癌相关转录本3(lncRNA GACAT3)在肝癌组织的表达和对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测新乡医学院第一附属医院收治并手术治疗的73例肝癌患者的癌组织、癌旁组织,PLC/PRF/5、Hep3B、HepG2肝癌细胞,以及正常肝细胞THLE-3中lncRNA GACAT3表达水平;阴性对照小干扰RNA(siRNA)和lncRNA GACAT3 siRNA转染HepG2肝癌细胞,Real-time PCR检测转染48 h后细胞lncRNA GACAT3表达,噻唑蓝(MTT)检测转染24、48、72 h各组细胞增殖能力,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达.应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,两组数据采用配对t检验或独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组数据两组间比较采用LSD-t检验.结果肝癌组织lncRNA GACAT3表达水平(3.10±1.93)显著高于癌旁组织(1.02±0.59,t=8.086,P<0.01);肝癌细胞PLC/PRF/5(1.92±0.21,t=7.074,P<0.01)、Hep3B(2.42±0.25,t=9.327,P<0.01)和HepG2(2.96±0.31,t=10.582,P<0.01)中lncRNA GACAT3表达水平均显著高于正常肝细胞(0.97±0.10).沉默GACAT3组细胞lncRNAGACAT3表达(0.16±0.02)显著低于沉默对照组(1.03±0.11,t=13.478,P<0.01),48 h和72 h细胞增殖能力显著降低(P<0.01),划痕愈合率、细胞迁移侵袭能力显著降低(P<0.01).细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin(0.15±0.02)及其下游蛋白骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)(0.22±0.02)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)(0.21±0.02)表达较沉默对照组(0.81±0.08,t=13.863;0.65±0.07,t=9.731;0.78±0.08,t=10.230;P均<0.01)显著降低,p-β-catenin蛋白表达(0.75±0.08)显著高于沉默对照组(0.27±0.03,t=11.972,P<0.01).结论lncRNA GACAT3在肝癌中高表达,沉默lncRNA GACAT3能够抑制肝癌细胞增殖迁移侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信� 徐红伟 罗雨田 王大军 王亮 王建国关键词:肝癌 三维适形放疗与手术分别联合TACE治疗PHC对患者血清肿瘤标志物水平的影响 被引量:5 2021年 目的探讨三维适形放射治疗、外科手术分别联合肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗原发性肝癌(PHC)对患者血清肿瘤标志物水平的影响。方法 2016年4月—2018年3月新乡医学院第一附属医院收治的98例PHC患者临床资料,根据使用治疗方法分为研究组(三维适形放射治疗联合TACE治疗,n=51)与对照组(外科手术联合TACE治疗,n=47)。观察治疗前与治疗后1个月两组患者血清肿瘤标志物[甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19可溶性片段(CYFRA21-1)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)],比较治疗后1年及治疗后2年两组患者生存率及复发率,并分析治疗后1个月内两组患者不良事件发生情况差异。结果治疗后2个月,两组患者血清AFP、CYFRA21-1及AFU水平均较治疗前显著降低,且研究组明显低于对照组(P<0.05);治疗后1年及治疗后2年,研究组患者生存率(96.08%,88.24%)均明显高于对照组(80.85%,68.09%),差异有统计学意义(P<0.05),研究组患者复发率均明显低于对照组(P<0.05);治疗后1个月内,两组患者各项化疗不良反应、急性放射损伤及术后并发症发生率比较均差异无统计学意义(P>0.05),但研究组患者不良事件总发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论三维适形放射治疗联合TACE治疗可有效治疗PHC,提高患者生存率、减少复发,且安全性良好。 游焜 王亮 蔡日 王建国关键词:三维适形放射治疗 肝动脉栓塞化疗 肿瘤标志物 环状RNA_101237调控肝癌细胞进展的分子机制 被引量:2 2023年 目的探讨环状RNA(circRNA,Circ)_101237调控肝癌细胞进展的分子机制。方法将新乡医学院第一附属医院2019年7月至2021年7月行手术切除的肝癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肝癌组织Circ_101237表达水平。采用sh-Con和sh-Circ_101237慢病毒感染人肝癌细胞系MHCC97H,建立sh-Con组和sh-Circ_101237组细胞系,细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分析Circ_101237对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。双荧光素酶报告实验分析Circ_101237的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果癌旁组织中Circ_101237表达水平(1.01±0.18)明显低于肝癌组织Circ_101237表达水平(2.09±0.26),差异有统计学意义(t=30.560,P<0.05)。sh-Con组细胞吸光度值(A)、细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.97±0.09),(164.67±14.40)个,(62.50±5.51)%,(130.83±25.18)个]明显高于sh-Circ_101237组细胞A值\细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.33±0.18),(111.33±9.07)个;(28.63±6.84)%,(92.33±14.05)个],差异有统计学意义(t=7.782、7.675、9.444、3.270,P<0.05)。Circ_101237与miR-490-3p存在连续互补结合位点。sh-Con组细胞miR-490-3p表达水平(0.99±0.14)明显低于sh-Circ_101237组细胞miR-490-3p表达水平(2.17±0.24),差异有统计学意义(t=10.280,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞A值(1.01±0.13)明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞A值(1.60±0.09),差异有统计学意义(t=9.143,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞划痕愈合率[(27.41±5.15)%]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组划痕愈合率[(49.19±7.81)%],差异有统计学意义(t=5.703,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(90.83±9.87)个]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(122.33±11.09)个],差异有统计学意义(t=5.197,P<0.05)。结论Circ_101237在肝癌组织中呈高表达,通过miR-490-3p调节� 王迎 王亮 徐红伟 李泽信关键词:肝癌 微小RNA 骨髓增生异常综合征合并门静脉海绵样变巨脾切除一例 本例患者最终诊断为门静脉海绵样变性合并骨髓增生异常综合征,但两种疾病之间是什么关系尚不清楚,骨髓增生异常综合症是病因还是伴发疾病或是危险因素,仍需进一步探讨。骨髓增生异常综合征合并脾大患者行脾切至今仍有争议。因此,临床上... 王建国 李泽信 徐红伟 王迎 王亮关键词:骨髓增生异常综合征 门静脉海绵样变性 病理诊断 脾切除手术