安建平 作品数:31 被引量:75 H指数:5 供职机构: 山东农业大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 长江学者和创新团队发展计划 现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
苹果MdMYB2基因的克隆及功能鉴定 被引量:4 2017年 以‘嘎拉’苹果为材料,采用同源克隆和PCR技术分离了苹果基因MdMYB2(基因序列号:MDP0000823458)。MdMYB2的开放阅读框(ORF)长度为873 bp,编码含有290个氨基酸的蛋白,预测其蛋白质分子量为32.92 kD,等电点为4.91。系统进化树分析显示,苹果MYB2与梨MYBL2亲缘关系最近,同源性最高。组织表达分析表明,MdMYB2在苹果的各个组织均有表达,在茎和果实中表达相对较高。MdMYB2的表达明显受盐胁迫的诱导。构建了MdMYB2的表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化得到了转基因苹果愈伤和转基因拟南芥植株。抗性试验表明,过量表达MdMYB2明显提高了转基因苹果愈伤对盐胁迫的抗性。此外,异位表达MdMYB2也能提高拟南芥对盐胁迫的抗性,以上试验结果表明MdMYB2在植物盐胁迫响应中发挥重要作用。 曲丰佳 安建平 姚继芳 李浩浩 李媛媛 由春香 王小非 郝玉金关键词:苹果 基因克隆 盐胁迫 苹果乙烯响应因子MdERF3促进花青苷和原花青苷积累 被引量:11 2019年 以’嘎拉’苹果(Malus×domestica’Royal Gala’)为材料,克隆乙烯响应因子(Ethylene Response Factor 3)基因MdERF3。构建酵母载体pGBKT7-MdERF3和原核表达载体PET32a-MdERF3,酵母转化试验表明,MdERF3转录因子具有转录激活活性。电泳迁移率试验分析显示,MdERF3-HIS原核诱导蛋白能够直接结合GCC和DRE序列。构建pCAMBIA1300-MdERF3超表达载体,转化苹果愈伤组织和拟南芥植株,并瞬时转化苹果叶片,转基因材料花青苷和原花青苷积累显著高于野生型。以上结果表明MdERF3转录因子具有转录激活活性以及对GCC和DRE序列的结合能力;MdERF3在调控花青苷和原花青苷积累过程中发挥重要作用。 毕思琦 安建平 王小非 郝玉金 芮麟 李彤 韩月彭 由春香关键词:苹果 ERF 花青苷 苹果生长素响应因子MdARF5的克隆与功能鉴定 被引量:10 2018年 【目的】分离苹果生长素响应因子Md ARF5(Auxin Response Factor 5),分析其对生长素的响应,鉴定其在调节花青苷合成过程中的作用,揭示Md ARF5的生物学功能,为进一步研究生长素对花青苷的调节提供理论依据。【方法】以‘嘎拉’苹果(Malus×domestica‘Royal Gala’)为材料,利用同源克隆技术,克隆得到一个ARF(Auxin Response Factor)转录因子,并将其命名为Md ARF5。利用MEGA5.0软件构建多物种间系统进化树。通过农杆菌介导的遗传转化获得转基因苹果愈伤组织。比较野生型和转基因苹果愈伤组织花青苷积累的差异。利用烟草叶片瞬时转化试验,分析Md ARF5对Md MYB1的转录调控。【结果】克隆获得苹果生长素响应因子Md ARF5(序列号:MDP0000143749),该基因CDS为2 691 bp,编码含有896个氨基酸的蛋白。系统进化树分析表明,苹果Md ARF5与梨Pb ARF5同源性最高。基因表达分析显示,该基因响应生长素处理,并且与花青苷合成相关基因表现出相反的表达模式。在苹果愈伤组织中超表达Md ARF5,其花青苷积累较野生型显著降低,表明Md ARF5在调控花青苷积累过程中发挥重要作用。对苹果Md MYB1启动子序列进行分析,发现其序列包含一个Md ARF5的结合位点。烟草瞬时表达试验显示,Md ARF5能够抑制Md MYB1的表达。【结论】推测苹果Md ARF5可能通过直接抑制Md MYB1的表达负调节花青苷的积累。 安建平 宋来庆 赵玲玲 由春香 王小非 郝玉金关键词:苹果 生长素 花青苷 一种用于得到对盐胁迫高敏感的植物的质粒载体及方法 本发明属于植物育种技术领域,具体涉及一种用于得到对盐胁迫高敏感的植物的质粒载体及方法。该质粒载体包含MdMAX1基因表达框和筛选标记,所述MdMAX1基因表达框由包含在植物中组成型表达的强启动子和由所述强启动子控制表达的... 郝玉金 王小非 安建平 由春香苹果BTB蛋白MdBT2通过降解MdMYB9抑制花青苷和原花青苷积累 MdMYB9能够促进苹果中花青苷和原花青苷的合成.目前,对其转录后调节缺乏了解.本文中.我们发现苹果BTB蛋白MdBT2抑制花青苷和原花青苷生物合成.进一步研究表明,MdBT2能够与MdMYB9互作,并且可以通过26S-... 安建平 李睿 曲丰佳 由春香 王小非 郝玉金关键词:泛素化 苹果 过表达MdCBF1基因提高植物抗冷性 被引量:1 2020年 本试验将从‘嘎啦’苹果中克隆的MdCBF1转化到‘王林’苹果愈伤组织和野生型拟南芥幼苗中,进行低温冷处理,观察并比较分析野生型与转MdCBF1材料在成活率和表达量间的差异,以研究MdCBF1基因对植株抗冷性的影响。结果显示,低温处理后,与野生型植株相比,转基因苹果愈伤组织抗冷性更高,转基因拟南芥成活率更高,抗冷性相关基因表达水平更高。可以看出,MdCBF1过表达能够显著提高植株的抗冷性,表明其在植物的冷胁迫响应过程中发挥着重要作用。 毕思琦 安建平 郝玉金 芮麟 李彤 韩月彭 由春香关键词:苹果 冷胁迫 抗冷性 苹果MdRCD1基因的表达分析以及功能的初步鉴定 2017年 【目的】分离克隆苹果MdRCD1基因,分析其蛋白结构和逆境响应,并初步鉴定MdRCD1在苹果愈伤中的功能。【方法】同源克隆MdRCD1并测序,用DNAman和MEGA5相关软件分析MdRCD1氨基酸序列以及进化关系,不同逆境处理‘嘎拉’苹果组培苗,qRT-PCR分析MdRCD1在逆境条件下的表达量。农杆菌介导的遗传转化方法获得过量表达MdRCD1的转基因愈伤,不同盐浓度处理野生型和转基因愈伤,观察愈伤的长势,检测愈伤的鲜质量、脯氨酸和丙二醛含量,鉴定MdRCD1的初步功能。【结果】从‘嘎拉’苹果中克隆了MdRCD1(MDP0000234325)基因。该基因ORF为1 803 bp。通过进化树和蛋白同源性分析,表明苹果MdRCD1和中国白梨PbRCD1进化亲缘关系最近。在MdRCD1的N端有1个保守的WWE结构域,1个PARP催化中心,在C端有1个RST结构域。qRT-PCR实验表明MdRCD1在苹果各个组织器官中都有表达,在茎中的表达量高于其他组织;同时MdRCD1的表达受Na Cl、ABA、渗透胁迫等逆境胁迫的诱导。通过农杆菌侵染获得过量表达MdRCD1转基因苹果愈伤。盐胁迫处理条件下,过量表达MdRCD1的抗性明显提高。【结论】MdRCD1在进化过程中比较保守,苹果不同组织中都有表达,过量表达MdRCD1苹果愈伤的抗盐性得到提高。 李浩浩 曲丰佳 安建平 李睿 郝玉金 王小非 由春香关键词:苹果 基因克隆 盐胁迫 过表达苹果多肽激素基因MdCEP1促进花青苷积累 被引量:5 2018年 以‘王林’苹果(Malus×domestica‘Orin’)愈伤组织为试材,初步探讨苹果多肽激素Md CEP1(C-TERMINALLY ENCODED PEPTIDE1)在调控花青苷合成方面的作用。分析显示Md CEP1位于苹果第15号染色体,只有1个外显子。蛋白序列比对显示不同物种中CEP结构域非常保守。启动子分析表明,Md CEP1启动子序列包含多个顺式作用元件,包括与分生组织有关的CAT-box元件、赤霉素响应元件(P-box)、光响应元件(MNF1)和与类黄酮合成相关的MYB类蛋白结合位点(MBSI)。通过农杆菌介导的遗传转化获得Md CEP1转基因苹果愈伤组织,进一步分析发现过表达Md CEP1能够明显促进愈伤组织花青苷积累,并且促进花青苷合成相关基因的表达。Md CEP1在拟南芥中异位表达,同样能够促进拟南芥中花青苷的积累,并且促进拟南芥花青苷合成相关基因的表达。研究结果表明,Md CEP1能够正调控苹果花青苷的合成。 李睿 安建平 由春香 王小非 郝玉金关键词:苹果 多肽激素 花青苷 苹果6–磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因Md6PGDH1的克隆和功能分析 被引量:3 2016年 以‘嘎拉’苹果为材料,克隆了6–磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因Md6PGDH1(序列号:MDP0000279299)全长。序列分析显示,该基因包含一个长为1 047 bp完整的开放阅读框,编码347个氨基酸,分子量为36.430 k D,预测等电点为9.24。同源性分析表明Md6PGDH1还有另外3个同源基因;功能域分析表明Md6PGDH蛋白含有两个保守的绑定域;亚细胞预测表明Md6PGDH定位存在差异。分析Md6PGDH1启动子发现存在多个响应非生物胁迫的顺式作用元件。定量分析显示,Md6PGDH1在苹果的不同组织中都有表达,且受非生物胁迫诱导。原核诱导Md6PGDH1蛋白并进行蛋白酶活的测定,为后续蛋白功能鉴定奠定了基础。Md6PGDH1在苹果愈伤组织中过量表达,提高其抗盐胁迫的能力。 苏玲 刘鑫 安建平 李浩浩 赵锦 郝玉金 王小非 由春香关键词:苹果 愈伤组织 一种苹果抗逆基因MdoCKX7及其应用 一种苹果MdoCKX7基因及其应用,所述MdoCKX7基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示,利用强启动子驱动原理的转基因技术,将MdoCKX7基因的超量表达载体转入拟南芥中,获得转基因拟南芥。本发明首次通过植物基... 郝玉金 王小非 安建平文献传递