刘辉
- 作品数：26 被引量：80H指数：6
- 供职机构：武汉大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国科学院“百人计划”更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 一个东亚钳蝎蝎毒素BmTXKβ基因的克隆及其基因表达调控被引量：2
- 2002年
- 从东亚钳蝎 (ButhusmartensiiKarsch ,BmK)毒腺组织cDNA文库中分离的长链钾通道毒素BmTXKβcDNA序列 ,克隆了BmTXKβ基因组序列 .BmTXKβ基因含有一个长度为 886bp的内含子 ,定位于BmTXKβ成熟肽中 ,与其它蝎毒素基因内含子定位于信号肽的基因结构不同 .并且 ,BmTXKβ基因的内含子特征也与其它蝎毒素基因不同 .研究结果从基因水平上证实了BmTXKβ是一个新的蝎毒素样肽 .以BmTXKβcDNA序列为探针与蝎基因组DNASouthern杂交出现 2条特异性杂交带 .杂交结果为蝎毒素基因可能通过DNA重排、多拷贝或多基因家族来调控基因表达提供了证据 .
- 曹志贱肖帆毛歆刘辉李文鑫
- 关键词：东亚钳蝎蝎毒素克隆基因表达调控
- P53及其相关蛋白对X射线照射肝癌细胞周期的调节被引量：4
- 2007年
- X射线照射人肝癌细胞HepG2,照射后细胞存活随照射剂量增大明显下降。流式细胞术分析,不同剂量组照射后24h均发生G2期阻滞。照射后不同时间组的细胞周期分布也有不同,照射后12h,有显著的S期延迟。Western Blot显示照射后24hP53,MDM2,P21蛋白表达上升,并有时间效应:P53在照射后24h之内始终维持较高表达,MDM2和P21分别在照射后6和12h的表达最高。X射线照射通过影响P53及其相关蛋白的表达影响细胞周期。
- 刘辉张红刘兵王小虎郝冀芳段昕
- 关键词：X射线照射HEPG2细胞周期P53
- 复制缺陷型人泡沫逆转录病毒载体构建和外源基因表达被引量：3
- 2002年
- 在人泡沫逆转录病毒 (humanfoamyvirus ,HFV)原病毒全长克隆pHRSV13的基础上 ,缺失病毒基因组的env基因和bel基因 ,构建了一个表达标记基因neo和报道基因 gfp的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI GFP。在与辅助质粒 p△GP共转染情况下 ,得到复制缺陷型的重组病毒颗粒GPSNI GFP。该病毒颗粒可以感染多种宿主细胞 。
- 李治杨频刘辉李文鑫
- 关键词：病毒复制外源基因表达
- 足叶乙甙诱导的鼻咽癌细胞亚系共表达多药耐药相关蛋白和P-gp被引量：9
- 2000年
- 杨红枚李文鑫章小平刘辉
- 关键词：鼻咽癌多药耐药
- 生物专业高年级本科生科研创新能力培养被引量：8
- 2009年
- 科研创新能力和素质,是大学本科高年级生应该具备的重要学术能力。国家大学生创新性实验计划,旨在通过以国家级重点实验室为平台,提高高年级本科生科研创新能力和素质。武汉大学该项目资助的人泡沫逆转录病毒介导IL-24对肿瘤细胞的抑制作用研究课题,让2名本科生进入实验室,抓住科研实践机遇,对其进行系统的培训,提高了他们的科研创新能力和素质,文中对如何培养生物专业高年级本科生科研创新能力及素质的过程作初步探讨。
- 刘辉
- 人补体调节蛋白DAF、MCP在哺乳动物细胞中的共表达及协同作用研究被引量：3
- 2008年
- 利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异源细胞的染色体上。RT-PCR和Western blot印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子DAF和MCP在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP结果表明人DAF和MCP基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明,pcDNA3-DAFMCP-DP转染细胞系由于DAF和MCP的共表达获得较DAF或MCP单一表达时更强的保护能力,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明,DAF和MCP双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,为获得表达多种人补体调节蛋白的理想供体提供了有效策略。而且共表达的DAF和MCP具有协同效应,能更有效地阻止补体激活造成的细胞损伤,在克服超急性排斥反应的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。
- 徐莉赵舟宙刘辉蒋达和李文鑫
- 关键词：共表达超急性排斥反应
- 人补体调节蛋白MCP、CD59共表达体系的构建及其功能研究被引量：1
- 2007年
- 利用双启动子构建含人补体调节蛋白MCP和CD59 cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-MCPCD59-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP转化细胞。PCR实验结果显示人MCP和CD59整合在转化的NIH3T3细胞的染色体上,RT-PCR和Western blot实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人MCP和CD59在转化细胞中的共表达。检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体溶破实验表明,pcDNA3-MCPCD59-DP转染细胞由于人MCP和CD59的共表达获得了较MCP或CD59单一表达时更好的保护功效,能有效地保护NIH3T3细胞免受人补体的攻击,从而抑制补体依赖的细胞毒反应的发生。以上结果表明所构建的双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值。
- 徐莉赵舟宙刘辉李文鑫
- 关键词：共表达超急性排斥反应
- 东亚钳蝎氯毒素BmKCT的表达和功能鉴定(英文)被引量：11
- 2005年
- 从中国东亚钳蝎ButhusmartensiiKarsch的毒腺cDNA文库中分离得到了一个编码毒素蛋白多肽 (命名为BmKCT)前体的全长cDNA序列 .该毒素多肽与已报道的氯毒素 (chlorotoxin)高度同源 ,其蛋白质一级序列有 6 8%的同源性 .为了鉴定BmKCT的生物学功能 ,通过pGEX系统成功地表达了BmKCT ,并用GST亲和层析和凝胶过滤的方法获得了纯化的重组BmKCT毒素蛋白 (rBmKCT) .通过膜片钳实验 ,记录了rBmKCT对人脑星型胶质瘤细胞 (gliomascell)表面的氯离子通道电流的作用 .结果显示 ,BmKCT可以显著抑制人脑星型胶质瘤细胞表面的氯离子通道电流 ,并且这种抑制作用在一定程度上是可逆的 .实验证明 ,在细胞水平上 ,BmKCT是一种新的短链氯离子通道抑制剂 .
- 杨锐彭方刘辉曹志贱李文鑫毛歆蒋达和
- 关键词：胶质瘤细胞氯离子通道膜片钳GST东亚钳蝎毒腺
- 同源异形框基因Quox-1在人口腔鳞癌中的表达研究
- 2004年
- 朱帆毛歆刘忠纯李健刘辉李文鑫
- 关键词：口腔鳞癌基因表达
- 人衰变加速因子DAF基因真核表达系统的构建
- 2008年
- 目的:构建含人补体调节蛋白衰变加速因子DAF分子的cDNA编码区的真核重组表达载体pcDNA3-DAF,转染NIH3T3细胞,建立稳定表达人DAF的NIH3T3细胞模型。方法:将人DAF分子的cDNA编码区克隆到真核表达载体pcDNA3,经酶切和测序鉴定后用磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的NIH3T3细胞株。用PCR检测人DAF基因在NIH3T3细胞基因组中的整合;用RT-PCR、Westernblot实验和间接免疫荧光技术分别从RNA水平和蛋白质水平检测人补体调节蛋白分子DAF在细胞株中的表达。结果:成功构建了pcDNA3-DAF重组真核表达载体,并建立了稳定转染的NIH3T3细胞株,成功地表达了目的基因。PCR检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-DAF细胞,结果显示人DAF基因仍稳定整合在异源细胞的染色体上,并未随着传代而丢失,为稳定的转染细胞株。结论:真核表达载体构建和稳定转染NIH3T3细胞株的建立为进一步研究人DAF功能和多种补体调节蛋白的协同作用奠定基础。
- 徐莉赵舟宙刘辉李文鑫
- 关键词：衰变加速因子NIH3T3细胞稳定转染真核表达
