李刚
- 作品数：55 被引量：98H指数：6
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学金属学及工艺医药卫生生物学更多>>
- 一种制备副猪嗜血杆菌病菌影疫苗的方法及其产品和应用
- 本发明公开了一种制备副猪嗜血杆菌病菌影疫苗的方法及其产品和应用。本发明将突变的噬菌体裂解E基因Eprom（SEQ ID NO：1所示）与pBV220连接后得到高效裂解质粒载体pBV-Eprom。将pBV-Eprom转化到...
- 王春来张艳禾李刚谢芳
- 氨基酸饥饿状态下(p)ppGpp调节猪传染性胸膜肺炎放线杆生物学特性研究
- 李刚谢芳王春来
- 含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建被引量：6
- 2003年
- 采用PCR方法 ,以传染性贫血病毒 (CIAV)DNA为模板 ,扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因 ,并进行了序列分析。经基因修饰 ,将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术 ,将目的基因插入到火鸡疱疹病毒 (HVT)gC基因区 ,构建了一株含CIAVVP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2_rHVT)。体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southernblot杂交检测 ,证实了CIAVVP1、VP2基因的插入。
- 刘长军王端秦运安鄢明华王笑梅代春铭李刚赵晓岩
- 关键词：鸡传染性贫血病毒重组火鸡疱疹病毒
- 一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原CdtB
- 本发明涉及一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原的鉴定、蛋白基因的分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗中的应用。本发明从副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)(菌种保藏编号：CVCC3361)中分离得到一个...
- 王春来李刚张艳禾谢芳
- SS-HPS-APP三联亚单位疫苗对小鼠保护效果的评价被引量：1
- 2021年
- 为评价猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病-猪传染性胸膜肺炎三联亚单位疫苗(下称三联苗)对小鼠的保护效果,本研究将猪链球菌(SS)保护性抗原EF和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)保护性抗原OMP、ApxI、ApxII序列分别克隆至pET-28a和pCold-sumo载体,再转化至E.coli BL21(DE3)中构建重组菌,经过诱导表达纯化获得重组蛋白r EF、rOMP、rApxI和rApxII。利用本研究室前期构建的pET-28a-sly/BL21、pET-28a-mrp/BL21、pET-28aoppa/BL21、pET-28a-oppa2/BL21、pET-28a-afua/BL21、pET-22b-cdtb/BL216株重组表达菌株,表达纯化SS的rSLY、rMRP和副猪嗜血杆菌(HPS)的r OPPA、rOPPA2、rAfuA、rCdtB。将上述重组蛋白等量混匀,使每一剂疫苗中各蛋白的含量均为20μg,再与ISA 201佐剂乳化制成三联苗。将血清2型SS(SS2)464株和SS9 GZ2株按照不同比例稀释后感染C57小鼠;将血清5型HPS(HPS5)HN10株、HPS13 ZD12株、血清5型APP(APP5)MD株和APP7 S-8株按照不同比例稀释后感染BALB/c小鼠,统计上述6个菌株对小鼠的最小致死剂量(MLD)。将20只C57小鼠和40只BALB/c小鼠均分成2组(每组含10只C57小鼠和20只BALB/c小鼠),间隔14 d分别皮下免疫2次300μL PBS+ISA 201佐剂和三联苗。二免后14 d采集小鼠血清,通过间接ELISA检测各组小鼠的EF、MRP、SLY、OPPA、OPPA2、CdtB、AfuA、OMP、ApxI和ApxII的抗体水平。首免后28 d,将C57小鼠再按照免疫组别平均分为2组,分别以MLD的SS2和SS9攻菌;同理,将BALB/c小鼠再平均分为4组,分别以MLD的HPS5、HPS13、APP5和APP7攻菌。结果显示:SS2和SS9对C57小鼠的MLD均为5×10^(7)cfu/只,HPS5、HPS13、APP5和APP7对BALB/c小鼠的MLD分别为1.5×10^(8)cfu/只、5×10^(7)cfu/只、1.5×10^(8)cfu/只和7.5×10^(8)cfu/只。与免疫前相比,二免后14 d实验组小鼠体内对EF、SLY、MRP、OPPA、OPPA2、CdtB、AfuA、OMP、ApxI和ApxII的抗体水平显著升高(p<0.0001),对照组小鼠体内对10种抗原的抗体水平均无差异;实验组与对照组二免后抗体水�
- 龚俊栾慧栾天赵谦乔宏李刚刘思国王春来
- 关键词：猪链球菌病副猪嗜血杆菌病猪传染性胸膜肺炎亚单位疫苗
- 新Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1和3D蛋白的原核表达及鉴定
- 2012年
- 为表达新I型亚肝炎病毒(DHV-1C)的VP1和3D重组蛋白,本研究根据GenBank中的DHV-1C N株全基因序列,设计合成两对引物扩增其VP1和3D基因,构建重组表达载体并进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot分析表明,VP1和3D重组蛋白分别在诱导3 h和4 h后表达量达到峰值,其大小分别为37.68 ku和65.80 ku,并且能够与抗DHV-1C阳性血清产生特异性免疫反应。
- 孟凡依殷秀辰李刚陈玉环张云刘明冯新畅
- 关键词：VP1克隆表达
- 一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原OppA2
- 本发明涉及一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原的鉴定、蛋白基因的分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗中的应用。本发明从副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)(菌种保藏编号：CVCC3361)中分离得到一个...
- 王春来李刚张艳禾谢芳
- 一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原OppA
- 本发明涉及一种副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原的鉴定、蛋白基因的分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗中的应用。本发明从副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，Hps)(菌种保藏编号：CVCC3361)中分离得到一个...
- 王春来李刚张艳禾谢芳
- 鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达被引量：2
- 2003年
- 将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1_2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中 ;SDS_PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。
- 鄢明华赵晓岩刘长军王笑梅王端李刚秦运安邓国华
- 关键词：鸡传染性贫血病毒重组杆状病毒
- 车床碎屑回收处理装置、方法及螺旋输送和碎屑存储机构
- 本发明车床碎屑回收处理装置、方法及螺旋输送和碎屑存储机构属于机械加工技术领域；该车床碎屑回收处理装置包括：筒体、支撑脚、筒门、观察窗、铰链、门锁、螺旋输送机构、接屑罩、碎屑存储机构、第一电机、搅拌叶片和载架；所述螺旋输送...
- 董晓威王明朱春艳李庆达张浩周欣宇邢含雷李刚
