黄清玲
- 作品数：42 被引量：106H指数：7
- 供职机构：福建医科大学基础医学院分子医学研究中心更多>>
- 发文基金：福建省重大科技项目福建省教育厅资助项目福建省高等学校科技创新团队培育计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白致HepG2细胞凋亡的蛋白质组学分析被引量：2
- 2010年
- 目的 研究乙型肝炎病毒（hepatitits B virus,HBV）表面抗原大蛋白（large envelope protein,LHB）对HepG2细胞凋亡的影响,并以蛋白质组学方法探讨其机制.方法 以腺病毒表达载体pShuttle-IRES-hrGFP-1克隆HBV LHB基因,经重组、包装后获得重组腺病毒Ad-LHB,与空载体重组腺病毒Ad-GFP分别感染HepG2细胞,采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、JC-1细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡情况.Ad-LHB及Ad-GFP分别感染HepG2细胞,提取细胞总蛋白,各取600μg蛋白样品进行双相电泳,R350染色,以双相电泳图像分析软件ImageMaster 2D Platinum确定差异蛋白点,Ettan斑点自动挖胶系统切取差异蛋白,脱色酶解后进行MALDI-TOF-TOF MS鉴定并分析.结果 Ad-LHB感染导致HepG2细胞凋亡明显增加.双向电泳及扫描分析显示Ad-LHB与Ad-GFP感染的HepG2细胞共有39个蛋白差异.质谱分析并确定其中的33种共36个蛋白,这些差异蛋白质有9种与细胞凋亡密切相关,其中,CAPN2、eIF3K和PPP2CB在Ad-LHB感染HepG2细胞表达增高,SERPINH1、LASP1、PRDX1、DHRS2、LDHA和PSMA4在Ad-LHB感染HepG2细胞表达降低.结论 HBV LHB可致HepG2细胞凋亡,多种细胞凋亡相关蛋白参与此过程.
- 郑大利黄清玲吴云丽林建银林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒蛋白质组学双向凝胶电泳肝细胞细胞凋亡
- 67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响
- 为探讨细胞膜表面67kD层粘连蛋白受体(67kD laminin receptor,67LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用,从肝癌细胞中提取RNA,通过RT-PCR扩增67LR的前体37kD laminin recepto...
- 郑大利黄清玲蒋雪梅彭碧文林建银
- 关键词：层粘连蛋白受体细胞侵袭能力肝癌细胞
- 肝细胞癌患者B和C基因型乙型肝炎病毒X蛋白的变异特点被引量：8
- 2004年
- 背景与目的X蛋白是乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)最重要的致病因子之一,它在HBV相关性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生发展中起着重要作用。目前已知B、C基因型HBV相关性HCC的临床及病理表现不尽相同,但目前尚不清楚这种差别是否与B、C基因型HBVX基因之间的差别有关。因此本实验拟研究B、C基因型间HBVX蛋白氨基酸差异及其在HCC患者中的变异及特点,初步探讨其与HCC发生、发展的关系。方法PCR扩增22份乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性HCC患者血清HBVX基因,克隆、测序并以VectorNTI6.0软件分析其基因型。以DNAMAN软件对标准HBV及HCC来源的HBVX蛋白进行氨基酸同源分析。结果检测的22个HBVX基因片段均属于B或C基因型。B、C基因型HBVX蛋白之间存在14个氨基酸的差异,HCC患者来源的B、C型HBVX蛋白存在4个氨基酸的共有变异,C型HBVX蛋白尚有6个型特异性变异。这些差异或变异氨基酸均位于X蛋白B、T细胞表位或反式激活区及调节区内。结论B、C基因型HBVX蛋白之间存在氨基酸差异,且在HCC中发生基因型特异性变异,这些差异或变异氨基酸可能导致X蛋白免疫学功能及反式激活功能的不同。
- 徐晓陈婉南郑大利黄清玲林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因基因型肝细胞癌
- 晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列腺素合成的影响及可能机制被引量：1
- 2006年
- 目的探讨晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列环素、前列腺素E2合成的影响及可能机制。方法不同浓度的晚期糖基化终末产物作用内皮细胞,酶联免疫吸附法测定前列环素的稳定代谢产物6-酮—前列腺素F1α和前列腺素E2的表达。逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学测定环氧合酶2 mRNA和蛋白表达的改变。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA对晚期糖基化终末产物刺激内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2的影响。结果晚期糖基化终末产物引起内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2增加(P<0.01),具有剂量依赖关系。晚期糖基化终末产物引起内皮细胞环氧合酶2的mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA可减轻晚期糖基化终末产物刺激的内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2(P<0.05或0.01),双基因的抑制效果更明显(P<0.05)。结论晚期糖基化终末产物可能通过晚期糖基化终末产物受体、核因子κB途径使内皮细胞的环氧合酶2表达增加,从而引起前列环素、前列腺素E2合成增加,这个机制可能参与了晚期糖基化终末产物所致的血管炎症损伤。
- 游捷黄清玲林旭刘礼斌林建银
- 关键词：病理学与病理生理学晚期糖基化终末产物环氧合酶2前列腺素合成反义RNA基因转染
- 一氧化氮与肿瘤微循环被引量：2
- 2001年
- 一氧化氮 (NO)生物学活性广泛 ,参与肿瘤有发生、发展、转移等过程 ,与肿瘤微循环关系密切。它能调控血管的形成 ,参与血管张力、血管通透以及白细胞与内皮细胞之间相互作用的调节 ,了解NO的作用机制 ,人工调控肿瘤血管内NO的水平有助于改变肿瘤的血液动力学 ,从而对肿瘤进行治疗。
- 黄清玲
- 关键词：一氧化氮肿瘤微循环血管通透性血管生成
- 乙型肝炎病毒在HepG2细胞中的稳定复制及表达
- 2007年
- 目的建立HBV HepG2肝细胞株,使HBV能长期稳定地表达抗原并复制。方法将含完整转录单位的1.2倍体HBV DNA经Sal (?)位点克隆入真核表达载体pREP10,构建的重组载体pREP-HBV以Lipofectamine2000转染HepG2细胞,250μg/mL潮霉素筛选抗性细胞克隆。ELISA检测细胞上清液中的HBsAg和HBeAg。电子显微镜下观察细胞上清液HBV颗粒。制备HBV特异性探针,以Southern印迹法检测细胞株内HBV核心颗粒DNA。结果获得含1.2倍体HBV DNA的重组载体,即pREP-HBV,该重组载体转染HepG2细胞后,获得5株潮霉素抗性细胞RHBV1～RHBV5,均能表达HBsAg和HBeAg。Southern印迹结果显示各株细胞均可见明显的杂交拖带,即存在HBV DNA复制中间体。细胞培养上清液浓缩后在电子显微镜下可见成簇的、直径约42 nm的HBV颗粒及直径为22～26 nm的球形颗粒。结论成功建立了HBV稳定复制及表达的HepG2细胞株,目前细胞已传代50次,每3天1次。
- 黄清玲柏世玉王林陈婉南林建银林旭
- 关键词：转染病毒复制
- 乙型肝炎病毒全基因水平对HepG2细胞的影响及其机制的初步研究
- 乙型肝炎病毒/(hepatitis B virus, HBV/)是一种部分双链环状嗜肝DNA病毒,是迄今为止已发现的最小的DNA病毒,约3.2Kb,含4个开放读码框/(ORF/)。HBV主要宿主是人类,具有高度种属和组织...
- 黄清玲
- 关键词：乙型肝炎病毒转染病毒复制蛋白质组学
- 提高医学生物化学教学质量的实践与体会被引量：3
- 2009年
- 生物化学是一门重要的医学基础课，也是一门较难掌握的课程。该文总结了在生物化学教学实践中，如何采用先进的教学手段以及多种教学方法来活跃课堂氛围，提高学生的学习兴趣，从而提高教学质量，培养学生的综合素质。
- 黄清玲何艳郑大利
- 关键词：生物化学教学方法教学质量
- 67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响被引量：7
- 2004年
- 探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1 myc His(- )A ,采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中 ,通过G4 1 8筛选和RT PCR、流式细胞术鉴定 ,获得了细胞膜表面 6 7LR高表达 (阳性率为 6 9.2 % )和低表达 (阳性率为 1 1 .7% )的细胞克隆 ,采用体外细胞侵袭实验测定不同细胞的侵袭能力 ,发现膜表面 6 7LR高表达的细胞侵袭能力明显高于低表达及不表达细胞 ,说明 6
- 郑大利黄清玲蒋雪梅彭碧文林建银
- 关键词：层粘连蛋白受体肝癌细胞克隆
- 蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16细胞蛋白质表达谱的影响被引量：5
- 2011年
- 目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体的对照细胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白表达谱的差别,筛选鉴定差异表达蛋白;用实时定量PCR和Western blot进一步确定实验结果;对蛋白组数据和前期基因组数据进行比较分析。结果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1细胞总蛋白的双向电泳图谱上共有匹配蛋白点(412±20)个,其中有11个蛋白的表达差异在2倍以上,5个上调,6个下调。这11个蛋白和1个仅在B16F1/cystatin中表达的蛋白经MALDI-TOF-MS分析,其中10个蛋白得到了鉴定,它们分属于代谢酶系、小G蛋白Ran调控分子、真核翻译因子、核苷酸激酶等。Western blot显示NM23和RhoGDI-beta的蛋白表达分别上调了(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;实时定量PCR结果显示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA表达上调,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1表达下调;与蛋白质组学研究结果一致。基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于细胞外周、质膜和细胞核,与转录、半胱氨酸蛋白酶活性、细胞凋亡等过程有关。结论 sv-cystatin可能通过调控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白质发挥其抗肿瘤作用。sv-cystatin的主要靶分子可能是转录因子、分泌蛋白和质膜受体。
- 齐元麟纪明开谢群黄清玲林建银
- 关键词：蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂黑色素瘤
