易永芬
- 作品数：90 被引量：274H指数：9
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- shRNA沉默P115基因对胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响及机制
- 2013年
- 目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1(cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制。方法采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用;ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平。结果与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低;P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用。结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关。P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点。
- 邓玮易永芬屈玉玲闫田静文雪
- 关键词：短发夹RNA胃癌细胞周期素D1细胞增殖
- 高尔基体基质蛋白130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢上皮恶性肿瘤、30例卵巢上皮良性肿瘤和23例正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测卵巢上皮恶性肿瘤、卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达。结果:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织,差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130与14-3-3ζ的表达、14-3-3ζ与整合素β3的表达和GM130与整合素β3的表达均呈正相关(r=0.517,P<0.05;r=0.415,P<0.05;r=0.384,P<0.05)。GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达与卵巢上皮恶性肿瘤患者的临床分期和组织分化程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小和病理类型无关(P>0.05)。卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达水平明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织(P<0.05)。结论:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤中的高表达可能在其恶性进程中发挥重要作用,GM130有望成为判断卵巢癌患者预后的指标及治疗靶点。
- 牟玲陈婕罗祎易永芬
- 关键词：卵巢肿瘤基因表达整合素Β3
- 反义核苷酸技术在胃癌中的应用研究进展
- 2005年
- 张晓艳易永芬
- 关键词：胃肿瘤反义核苷酸
- 高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ和E-钙黏素在正常肝组织及肝癌组织中的表达及其意义被引量：2
- 2011年
- 目的探讨高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)和E-钙黏素(E-cadherin)在正常肝组织及不同分化的肝癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测GMⅡ和E-cadherin mRNA在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织中的表达;免疫组化SP法及Western blot法检测GMⅡ和E-cadherin蛋白在3种肝组织中的表达,并对GMⅡ和E-cadherin的差异表达进行相关性分析。结果 RT-PCR及Western blot分析显示,GMⅡmRNA和蛋白在正常肝组织中表达水平最低,在中低分化肝癌组织中表达水平最高,在高分化肝癌组织中表达居中,E-cadherin的表达则相反,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);免疫组化SP法检测显示,GMⅡ主要表达于正常肝组织及肝癌组织的胞浆,在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织的表达阳性率分别为40%、64%和86%,E-cadherin在正常肝组织的胞膜、胞浆中均有表达,而在肝癌组织中则主要表达于胞浆,其表达阳性率分别为70%、33%和9%,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);GMⅡ和E-cadherin表达的Pearson相关系数r值为-0.415,P值为0.01。结论 GMⅡ和E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关,GMⅡ对肝癌的发生发展可能发挥一定的作用。
- 闫田静易永芬邓玮文雪屈玉玲
- 关键词：E-钙黏素肝肿瘤
- 大肠粘液腺癌浸润机理的研究被引量：14
- 1994年
- 对６４例大肠癌标本的统计结果表明，粘液腺癌易于浸润肠壁和伴淋巴结转移，并发现其芳香硫酸酯酶和溶菌酶（ＬＺＭ）活性高于乳头状癌和管状腺癌。电镜观察粘液腺癌间质钉红颗粒明显减少。以上结果提示粘液腺癌分泌了芳香硫酸酯酶和ＬＺＭ，它们能够水解硫酸肝素上的硫酸基团和蛋白多糖分子结构中的Ｎ一乙酰氨基葡萄糖的连接，使这类蛋白多糖的硫酸化程度降低和降解，导致蛋白多糖的屏障结构破坏，使粘液腺癌易于浸润和转移。
- 楼善贤苗德林易永芬
- 关键词：肠肿瘤肿瘤转移酶类腺癌
- α-甘露糖苷酶Ⅱ基因沉默对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因的表达对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法根据GenBank中登录的人GMⅡ基因mRNA序列及siRNA设计原则,设计了4条siRNA,并构建4个针对靶点的重组表达质粒pGPU6/GFP/Neo-1140、pGPU6/GFP/Neo-1303、pGPU6/GFP/Neo-1406和pGPU6/GFP/Neo-1817,同时合成阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC,经Lipofectamine 2000分别转染BGC-823细胞,通过RT-PCR及Western blot检测转染细胞中GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达,筛选沉默效果最佳的质粒;经MTT试验、细胞周期分布分析、Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI双染试验分别检测沉默GMⅡ基因对人BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。结果 pGPU6/GFP/Neo-1303组GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),表明pGPU6/GFP/Neo-1303组沉默效果最好;与空白对照组和阴性对照组相比,pGPU6/GFP/Neo-1303组BGC-823细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01),G1期细胞比例明显上升(P<0.05),S期细胞比例明显下降(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论已成功沉默BGC-823细胞中GMⅡ基因的表达,从而抑制BGC-823细胞的增殖并促进其凋亡,GMⅡ可能成为防治胃癌的新靶点。
- 杨雅莹易永芬
- 关键词：RNA干扰高尔基体胃癌基因沉默细胞增殖
- 黏液基因2反义寡核苷酸对胃癌细胞黏附功能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察应用反义脱氧寡核苷酸（ASODN）体外抑制MUC2对人胃癌细胞株SGC7901黏附活性的影响。方法应用人工合成的MUC2 ASODN经阳离子脂质体包裹后转染人胃癌细胞株SGC7901，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学、玫瑰红法检测与内皮细胞黏附能力、噻唑蓝（MTT）法检测其与基质的黏附能力等方法体外观测对胃癌细胞黏附作用的影响。结果RT-PCR结果显示SGC7901细胞转染MUC2 ASODN 48h后，MUC2的mRNA（1．2380±0．1019）和蛋白（1．20±0．00）表达与对照组（1．8130±0．1651，6．50±0．45）比较均明显降低（P〈0．01、P〈0．05）；癌细胞与基质（0．7335±0．0679）及内皮细胞（0．0350±0．0224）的黏附能力与对照组（0．9072±0．1057，0．1262±0．0660）比较都有明显下降（P〈0．01）；CD44V6表达明显降低（1．50±0．09，对照组5．50±0．25），而E-钙黏蛋白表达增高（5．50±0．23，对照组3．50±0．28）（P〈0．05）。结论使用人工合成MUC2 ASODN能有效抑制胃癌细胞株SGC7901的黏附作用，降低肿瘤细胞的侵袭转移潜能。
- 罗文军张晓艳易永芬
- 关键词：胃癌反义寡核苷酸
- 孕鼠肝内胆汁淤积症:胎鼠心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43、Cx45表达及意义
- 2009年
- 目的:探讨肝内胆汁淤积症(ICP)孕鼠的胎鼠心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)和缝隙连接蛋白45(Cx45)的表达。方法:应用雌、孕激素建立妊娠肝内胆汁淤积大鼠模型,透射电镜观察胎鼠心肌细胞闰盘超微结构,免疫组化、RT-PCR和Western Blot检测胎鼠心肌细胞Cx43和Cx45的表达。结果:(1)ICP组胎鼠心肌细胞闰盘结构部分模糊,缝隙连接消失;(2)免疫组化、RT-PCR和Western blot实验均发现,ICP组胎鼠心肌细胞Cx43蛋白表达显著下调,与正常组胎鼠比较,差异有极显著性,均P<0.01。(3)免疫组化、RT-PCR和Western blot实验均发现,ICP组胎鼠心肌细胞Cx45蛋白表达与正常组胎鼠比较差异无显著性,P>0.05。结论:ICP孕鼠的胎鼠心肌细胞缝隙连接超微结构发生改变,Cx43蛋白表达下调,缝隙连接通讯受到明显抑制,可能导致胎鼠发生心律失常和猝死。
- 邵勇姚珍薇罗红霞吴味辛易永芬丁敏
- 关键词：肝内胆汁淤积症猝死
- 多药耐药相关蛋白和肺耐药蛋白在胃癌组织中的表达被引量：19
- 2003年
- 目的 探讨多药耐药相关蛋白 (MRP)和肺耐药蛋白 (LRP)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化S -P法检测 90例胃癌组织和 3 0例正常胃黏膜中MRP和LRP的表达情况。结果 90例胃癌组织中的MRP、LRP阳性表达率分别为 92 .2 %和 93 .3 % ,均高于正常胃黏膜的阳性表达率 (P <0 .0 5 ) ,在高中分化腺癌中的阳性表达率高于低分化腺癌和黏液癌 (P <0 .0 5 ) ,不同浸润程度及是否有淋巴结转移者的阳性表达率相互比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 MRP、LRP在胃癌组织中均呈高表达 。
- 于冬青易永芬
- 关键词：胃肿瘤药物耐受性多药耐药相关蛋白肺耐药蛋白
- 过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对胃癌细胞株BGC-823增殖的影响
- 2012年
- 目的探讨过表达高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)对人胃癌细胞株BGC-823增殖活性的影响。方法构建真核表达载体EX-E2372-M03,通过脂质体Lipofectamine2000转染至人胃癌细胞株BGC-823,筛选稳定细胞株,用免疫荧光观察转染效率。用RT-PCR法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2 mRNA的表达,用Western blot法检测转染细胞GMⅡ、c-myc、bcl-2蛋白表达的变化,用MTT法及流式细胞仪检测过表达GMⅡ后对细胞增殖活性的影响。结果 GMⅡ真核表达质粒构建成功并成功转染,MTT结果示过表达GMⅡ后胃癌细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比较,GMⅡ过表达组胃癌细胞G1期细胞明显减少,S期细胞比例明显增加。转染后胃癌细胞GMⅡmRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),且可明显上调胃癌细胞BGC-823中c-myc的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对bcl-2的调节作用不明显。结论过表达GMⅡ能促进胃癌细胞增殖,可能与上调c-myc的表达有关。
- 杨紫汐易永芬杨雅莹
- 关键词：C-MYCBCL-2胃癌增殖
