公共文化服务平台

李红亮: 作品数：65 被引量：220H指数：11; 供职机构：中国计量大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省重点科技计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学文化科学理学更多>>

合作作者

桔小实蝇气味结合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、组织表达及配基结合特性被引量：21: 2013年; 为了研究桔小实蝇Bactrocera dorsalis气味结合蛋白(odorant-binding proteins,OBPs)参与其嗅觉识别过程中的功能及其与植物气味的结合特性,本研究克隆了桔小实蝇的一个气味结合蛋白基因,命名为BdorOBP2(GenBank登录号为KC773766),并对该基因进行了原核表达。BdorOBP2开放阅读框长447bp,编码148个氨基酸,具有典型的6个半胱氨酸位点。定量PCR结果显示,桔小实蝇BdorOBP2在不同组织中均有表达,其中头部中的表达量最高,翅中表达量最低(为头部表达量的63%±6%)。构建了BdorOBP2原核表达载体,诱导并获得了重组BdorOBP2并进行了亲和层析纯化。最后以N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)为荧光探针,利用荧光竞争结合实验测定了重组BdorOBP2与7种主要寄主水果气味物质的结合能力,发现其对多数酯类和醛类化合物亲合力较强,亲合力最强的气味物质为反-2-己烯醛和β-紫罗兰酮,结合常数KD分别为9.96和15.37μmol/L。本研究结果可为高效地开发和设计桔小实蝇的嗅觉引诱剂配方提供一定的理论依据和参考。; 陈玲李红亮周宇翔赵磊张林雅倪翠侠商晗武; 关键词：桔小实蝇气味结合蛋白组织表达谱原核表达

中华蜜蜂化学感受蛋白CSP1的功能模式分析及亚细胞定位被引量：2: 2017年; 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)重组化学感受蛋白CSP1与不同化学信息素的结合功能、模式及其亚细胞定位,明确触角特异表达的CSP1蛋白功能。【方法】将克隆的中蜂CSP1构建至p ET-32a(+)载体并转入BL21(DE3)感受态细菌中,挑取单克隆菌落接种于LB培养基,培养过夜后按1%(V/V)进行转接,继续培养至OD600≈0.4左右时,加入IPTG至终浓度为1 mmol·L^(-1)后继续诱导5 h。将诱导好的CSP1大肠杆菌菌液离心弃上清,再加入细菌裂解液超声破碎,离心后上清用镍柱对CSP1重组蛋白进行亲和层析纯化,再经PBS透析液透析后,最终获得可溶的具有生物活性的CSP1重组蛋白。设定荧光分光光度计的激发波长为281 nm,测定竞争性荧光探针1-NPN与CSP1的相互作用,用Scatchard方程计算其解离常数,再计算获得CSP1与各种候选化学信息素的亲和力。以CSPMbra A6晶体结构(PDB代码:1n8v)为模板,通过同源建模和分子对接解析CSP1蛋白与化学信息素的结合模式,根据Mol Dock Score选出最佳对接模型进行作用机理分析,获得结合时配基周围的CSP1残基分布以及氢键产生情况,以此获得信息素与CSP1的结合模式。最后将CSP1免疫注射兔子获得多克隆抗体,并对中蜂工蜂触角进行低温固定、脱水和包埋后进行超薄切片,然后对样品切片进行免疫胶体金电镜定位,以解析CSP1在触角感器中的亚细胞分布。【结果】成功诱导获得可溶性的重组中蜂CSP1蛋白,利用荧光光谱分析1-NPN与CSP1的解离常数K1-NPN为2.1μmol·L^(-1),结合位点数n为0.99,表明结合时基本以1:1结合,线性相关系数为0.9933。在9种化学信息物质中,CSP1与两种蜜蜂蜂王信息素成分对羟基苯甲酸甲酯(HOB)和9-羰基-2癸烯酸(9-ODA),和植物挥发物成分3-蒈烯均具有较强的结合能力,其中与CSP1亲和力最强的对羟基苯甲酸甲酯的[IC50]和解离常数KD分别达到10.1和7.68μmol·L^(-1)。分子�; 谭静宋欣密傅晓斌唐明珠吴帆华启云李红亮; 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白分子对接免疫细胞化学定位

中华蜜蜂化学感受蛋白cDNA克隆、定位及其表达被引量：7: 2007年; 化学感受蛋白被认为是化学通讯中广泛存在于感觉器官中的一种小分子蛋白.在中国本土蜜蜂中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂的触角中,克隆并鉴定了一种化学感受蛋白,命名为Ac-ASP3.Ac-ASP3全长cDNA由2个外显子组成,可读框长393bp,编码130个氨基酸.序列分析表明,其具有保守的4个半胱氨酸,并在N端具有19个氨基酸的信号肽.另外,Ac-ASP3与其同一家族基因意大利蜜蜂Apis mellifera的Am-ASP3具有较高的相似性,而与其他物种相似性较低.免疫定位结果显示,Ac-ASP3仅特异性地表达于机械感器,如毛形感器B和锥形感器中;而在嗅觉感器,如板形感器中几乎无分布.实时定量PCR结果表明,Ac-ASP3高丰度表达于翅和足中,而在触角中表达量却相对较低.在时间表达上,Ac-ASP3在蛹期及成虫第1～6日龄阶段大量表达,这一时期中华蜜蜂正处于幼年期,并在蜂巢进行日常清洁和哺育幼虫等活动.以上结果表明,Ac-ASP3是具有种群特异性的,不参与搜寻蜜粉源等嗅觉活动,但可能参与蜂巢内个体信息识别以及触角的机械运动.; 李红亮楼兵干程家安高其康; 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白分子克隆免疫定位基因表达

南亚果实蝇对颜色趋性及不同寄主对其生长发育的影响被引量：14: 2009年; 为研究南亚果实蝇对颜色趋性和用于防治的可能性,采用红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫7种颜色对南亚果实蝇初羽化成虫进行颜色趋性研究,发现其对绿色有较强喜好性,对红色有拒避性。将浙江省广泛种植的葫芦科、茄科和豆科等不同果实作为寄主,研究其对南亚果实蝇幼虫影响,结果表明不同寄主对南亚果实蝇的幼虫成活率、幼虫历期和蛹历期有一定的影响,但对蛹的存活率影响不大。; 周京花商晗武李红亮; 关键词：南亚果实蝇生长发育

中华蜜蜂化学感受蛋白AcerCSP3的配基结合功能分析被引量：19: 2011年; 为研究中华蜜蜂Apis cerana cerana化学感受蛋白AcerCSP3在化学感受系统中的生理功能,本实验通过对AcerCSP3进行原核表达、分离纯化后,利用荧光法研究了体外重组AcerCSP3与1-NPN以及候选化学配基的结合特征。Scatchard方程显示AcerCSP3与1-NPN的解离常数KD为8.29μmol/L,结合位点数约等于1。在候选配基竞争1-NPN与AcerCSP3结合的实验中,5种配基均能在200μmol/L浓度下使1-NPN的相对荧光强度下降至50%以下,其中β-紫罗兰酮甚至能使1-NPN的相对荧光强度下降至10%左右,表明候选配基均与AcerCSP3有较强的结合能力,而3,4-二甲基苯甲醛与中蜂AcerCSP3的结合能力最强,KD达到18.77μmol/L。本研究所用化学配基均为植物花与叶片的挥发性的次生代谢产物,表明AcerCSP3可能作为中蜂化学感受系统的一部分,在其搜寻某些植物花粉蜜源时作为气味分子运载体发挥一定的作用。; 李红亮张林雅倪翠侠商晗武; 关键词：中华蜜蜂化学感受蛋白原核表达纯化

中华蜜蜂工蜂头部cDNA文库的构建与分析被引量：3: 2007年; 以中华蜜蜂13个不同日龄的工蜂头部为材料,提取总RNA,经mRNA分离纯化,反转录合成双链cDNA,以pBluescript II SK(+)为载体,构建成中蜂头部cDNA文库。该文库的滴度为8×104pfu/mL,插入片段长500～3000bp,重组频率在90%以上,表明文库容量好、重组率高、插入片段较大,为规模化EST测序,并进一步研制基因芯片奠定了基础。; 李红亮杨渝晓沈立荣高其康程家安; 关键词：CDNA文库中华蜜蜂

中华蜜蜂对冬季设施草莓授粉活动规律和增效的初步研究被引量：7: 2016年; 中华蜜蜂(简称中蜂)是我国的本土蜂种,也是目前广泛应用于冬季草莓大棚的授粉蜂种。利用中蜂授粉是保证大棚草莓优质高产的必需条件,但在冬季低温环境下中蜂的授粉效率常常比较低,因此需要通过各种手段和措施提高中蜂的授粉效率。通过对冬季草莓大棚内中蜂的日常活动规律进行跟踪记录,获得中蜂在大棚内不同光照、时间段的访花规律;然后分别在食物饲喂和添加嗅觉活性剂等不同处理条件下研究中蜂对大棚草莓的授粉效率,结果显示,在不提供食物饲喂时,其访花频率和单花停留时间均显著高于提供食物,而施加嗅觉活性剂则与对照组无显著差异。; 唐明珠王珏方献平余红李红亮; 关键词：中华蜜蜂温室草莓

中华蜜蜂信息素结合蛋白OBP10的基因克隆、原核表达和配基结合特性分析被引量：9: 2016年; 【目的】气味结合蛋白在中华蜜蜂Apis cerana cerana嗅觉系统中起到重要作用,本实验拟研究中华蜜蜂一个新的信息素结合蛋白OBP10及其与蜜蜂信息素以及蜜源开花植物挥发物的结合特性。【方法】本实验通过RT-PCR扩增获得OBP10基因全长(Gen Bank登录号:KP717060.1),以p ET-30a构建原核表达载体,并以Ni2+琼脂糖柱进行重组蛋白表达和分离纯化,在N-苯基-1-萘胺(N-phenyl-1-naphthylamine,1-NPN)作为荧光报告子下利用荧光光谱法体外研究重组Acer OBP10与多种候选化学配基的结合特征。【结果】经多序列联配分析,发现Acer OBP10的多个同源基因均为信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)。配基结合特性分析显示,Acer OBP10对14种候选配基中的蜂王信息素成分对羟基苯甲酸甲酯(HOB)竞争力最大,相对荧光可降至6.06%,解离常数11.04μmol/L;进一步表明Acer OBP10属于一个新的中蜂PBPs。此外,Acer OBP10也能和包括工蜂信息素(香叶醇和橙花醇)、报警信息素(2-庚酮和乙酸异戊酯)等蜜蜂信息素以及蜜源开花植物挥发物之一的β-紫罗兰酮结合,表明Acer OBP10可能是一种以信息素结合为主的多功能结合蛋白。【结论】Acer OBP10是中蜂一个新的信息素结合蛋白,与此前我们鉴定的蜂王信息素结合蛋白Acer ASP1相比,Acer OBP10对蜜蜂信息素的结合谱更为广泛,这些结果将对进一步研究中华蜜蜂信息素识别和传递提供理论基础,对于深入了解中华蜜蜂嗅觉影响生理功能的行为机制具有重要意义。; 吴帆黄君君谭静唐明珠李红亮; 关键词：中华蜜蜂信息素结合蛋白信息素

一种茶尺蠖活体检测的实验方法: 本发明公开了一种茶尺蠖活体检测的方法，包括，步骤1：设置经过预处理过的装置包括收集管，吸附管，收集管由铁架台支起，吸附管由蝴蝶夹固定位置，脉冲气体发生器在收集管一侧。收集管另一侧与吸附管连接，吸附管与二个连续的锥形瓶相连...; 李红亮唐明珠郑立波

利用中华蜜蜂定向传播哈茨木霉孢子粉防控草莓灰霉病方法: 本发明公开了一种利用中华蜜蜂定向传播哈茨木霉孢子粉防控草莓灰霉病方法，包括以下工艺步骤：1）中华蜜蜂携带哈茨木霉孢子粉的最佳载粉量测试；2）中华蜜蜂携带哈茨木霉孢子粉的最佳释放时间测试；3）中华蜜蜂携带哈茨木霉孢子粉的最...; 李红亮邱一蕾张军飞王宁陈姿含

李红亮

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

李红亮

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈