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国家自然科学基金(30400218): 作品数：15 被引量：40H指数：4; 相关作者：周后德廖二元黄秋霞何玉玲谢辉更多>>; 相关机构：中南大学湘雅二医院广西医科大学第一附属医院华中科技大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2基因表达的影响: 2005年; 目的观察胰岛素对人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物-2(IRS-2)基因mRNA表达的影响。方法用胰岛素干预人成骨肉瘤MG-63细胞,半定量RT-PCR检测细胞IRS-2基因mRNA的表达量。结果10-10mol/L～10-6mol/L胰岛素上调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P<0.05),且具有剂量依赖性。胰岛素的调节还存在时效依赖性,10-8mol/L胰岛素干预12h可下调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P<0.05),干预24h～48h上调细胞IRS-2基因mRNA的表达(P<0.05)。结论胰岛素可影响人成骨肉瘤MG-63细胞IRS-2基因mRNA的表达,胰岛素可能对1型糖尿病患者骨质疏松的发生和发展起着重要的作用。; 黄秋霞周后德廖二元杜巍何玉玲刘玉华; 关键词：胰岛素胰岛素受体底物-2 人成骨肉瘤MG-63细胞 MG-63细胞人成骨肉瘤基因表达定量RT-PCR检测

核结合因子促进骨髓间质细胞MBA-1凋亡被引量：1: 2006年; 目的:研究核结合因子(core b ind ing factor alpha 1,Cbfa1)的2种亚型Cbfa1/P56和Cbfa1/P57对骨髓间质细胞MBA-1凋亡的影响,并探讨其促进MBA-1凋亡的作用机制。方法:用带有Cbfa1/P56或Cbfa1/P57全长cDNA的质粒瞬时转染到骨髓间质细胞MBA-1,72 h后用流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化,并抽提蛋白进行Cbfa1及相关凋亡蛋白Bax,Bc l-2,cytochrom e-C,caspase-3,caspase-9和TNF-α的免疫印迹检测。结果:流式细胞仪检查发现,转染Cbfa1/P56或Cbfa1/P57质粒后,MBA-1细胞的凋亡率明显增加。W estern b lot显示,Cbfa1/P56或Cbfa1/P57能增加Bax蛋白表达和Bax/Bc l-2比值,并增加cytochrom e-C,caspase-3,caspase-9,TNF-α蛋白的表达。结论:Cbfa1/P56和Cbfa1/P57能诱导骨髓间质细胞MBA-1凋亡。Cbfa1促进MBA-1凋亡的机制包括线粒体途径和膜受体途径2种,凋亡相关蛋白Bax,Bc l-2,cytochrom e-C,caspase-9和caspase-3组成的信号级联反应构成了Cbfa1促进MBA-1凋亡的信号转导通路,TNF-α也参加了该凋亡的信号转导。; 刘敏周后德何玉玲谢辉廖二元; 关键词：核结合因子信号传导通路

人成骨细胞胰岛素受体底物的表达被引量：1: 2005年; 目的观察人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞(humanosteoblast-likecellsHOB)胰岛素受体底物(insulinreceptorsubstrateIRS)的表达。方法半定量RT-PCR检测IRSmRNA表达,免疫共沉淀检测IRS蛋白表达。结果人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均有IRS-1、-2、-3、-4mRNA和蛋白质的表达,以IRS-1的表达丰度最高,IRS-4表达丰度最低。其中IRSmRNA和蛋白质在MG-63细胞中的表达丰度较在正常人成骨细胞中的表达丰度稍高。结论人成骨肉瘤MG-63细胞和正常人成骨细胞均可表达IRSmRNA和蛋白质。且IRS不同成员在同一细胞中的表达丰度不同。; 黄秋霞周后德廖二元杜巍; 关键词：胰岛素受体底物人成骨细胞 MG-63细胞定量RT-PCR检测人成骨肉瘤 IRS-1

晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病患者的成骨细胞增殖分化及基因表达谱改变被引量：3: 2005年; 目的探讨晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(SEDT PA)患者WISP3基因突变所造成的软骨及周围骨组织病变和可能的发病机制。方法从SEDT PA患者及正常同龄个体的股骨头松质骨分离成骨细胞进行体外培养,对培养的成骨细胞进行细胞增殖、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素、护骨素测定,利用cDNA表达芯片进行基因表达谱分析,并用免疫组织化学方法对基因芯片进行验证。比较SEDT PA患者及正常对照的成骨细胞在细胞增殖、分化及基因表达谱等方面的改变。同时采用Northern杂交检测成骨细胞的WISP3表达情况。结果与正常人成骨细胞相比,SEDT PA患者成骨细胞的增殖能力较强(0.86±0.04vs0.71±0.10),氚胸腺嘧啶(3H TDR)的掺入量明显较高(1363cpm±350cpmvs867cpm±128cpm)。SEDT PA患者的成骨细胞骨钙素的表达水平明显低于正常同龄人(3.62ng/μg蛋白±0.3ng/μg蛋白vs0.85ng/μg蛋白±0.06ng/μg蛋白),护骨素的表达明显低于正常同龄人(9.43pg/μg蛋白±0.41pg/μg蛋白vs1.98pg/μg蛋白±0.03pg/μg蛋白),而BAP的表达未发生明显改变;WISP3基因的表达极低。cDNA表达芯片分析结果发现,与正常对照比较,SEDT PA患者的成骨细胞有22个基因表达明显上调,16个基因表达明显下调,这些基因包括有成骨细胞的标记分子。; 周后德黄秋霞谢辉刘敏郭丽娟袁凌青隋国良翟木绪彭依群谷卫倪江东张湘生廖二元; 关键词：成骨细胞增殖分化基因表达免疫组织化学

胰岛素对人成骨细胞胰岛素受体底物-2的作用被引量：8: 2005年; 黄秋霞周后德廖二元杜巍; 关键词：胰岛素成骨细胞胰岛素酪氨酸蛋白激酶

雌激素对前成骨细胞胰岛素受体底物-1的影响: 2012年; 目的:观察前成骨样细胞(MC3T3-E1细胞)分化过程中17β-雌二醇对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的影响。方法:应用10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化成熟,分别在0,6,12,18,24,30d收集细胞。17β-雌二醇干预,用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1mRNA和蛋白的表达,比较两组细胞IRS-1表达量的变化。结果:在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,IRS-1 mRNA和蛋白的表达在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中逐渐增高。结论:IRS-1可能在17β-雌二醇诱导的骨转换过程中起着重要作用。; 何玉玲周后德隋国良谢辉廖二元; 关键词：MC3T3-E1细胞胰岛素受体底物-1 17Β-雌二醇

17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物家族的作用: 2005年; 目的观察17β-雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG-63细胞胰岛素受体底物家族 (insulin receptor substrate IRS)表达的影响。探讨雌、孕激素对骨的作用机制。方法从正常骨折病人骨组织中分离正常人成骨细胞,经纯化和培养后,用Van Gieson行Ⅰ型胶原染色、钙钴法行碱性磷酸酶染色、茜素红行钙化结节染色进行成骨细胞鉴定。用半定量RT-PCR检测细胞IRS-1、- 2、-3 mRNA表达量。结果分离和培养的细胞具有正常人成骨细胞的形态,能分泌Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶并形成钙化结节。17β-雌二醇和／或孕酮均不影响人成骨细胞和MG-63细胞IRS-1mRNA 的表达(P>0．05),可诱导人成骨细胞和MG-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调(P<0．05),IRS- 3 mRNA的表达下调(P<0．05)。二者联合干预时作用明显加强(P<0．01)。结论 17β-雌二醇和孕酮均不影响IRS-1 mRNA的表达,但可使人成骨细胞和MC-63细胞IRS-2 mRNA的表达上调, IRS-3mRNA的表达下调,二者联合干预具有正性协同效应。不同的IRS家族成员对同一细胞具有效应的多样性。; 黄秋霞周后德廖二元杜巍; 关键词：17Β-雌二醇胰岛素受体底物孕酮碱性磷酸酶染色 IRS-2 人成骨肉瘤

RANKL诱导小鼠单核细胞RAW264．7分化成成熟破骨细胞被引量：11: 2005年; 目的观察小鼠的单核／巨噬细胞RAW264．7的一般生物学特征及在RANKL诱导下形成成熟破骨细胞的特征。方法 RANKL诱导RAW264．7细胞6d后,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) 染色法观察TRAP阳性多核细胞,吖啶橙染色激光共聚焦显微镜(LCSM)观察多核细胞形态;诱导RAW264．7细胞9d后,RT-PCR检测RAW264．7细胞的破骨细胞表型和功能基因表达及其 RANKL诱导后变化;诱导RAW264．7细胞12d后,钙磷覆盖的破骨细胞活性分析板观察破骨细胞的骨吸收功能。结果 RAW264．7细胞TRAP染色阴性,单核或2个核,能表达破骨细胞表型和功能基因,无骨吸收功能。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成TRAP阳性成熟的多核破骨细胞, 上调CathepsinK、CAⅡ、integrinβ3等基因。mRNA的表达。结论 RAW264．7具有破骨细胞特征性基因表达谱,是一种较好的破骨前体细胞模型。RANKL可诱导RAW264．7细胞形成成熟破骨细胞。; 肖新华周后德王运林张红袁凌青胡平安杨雅何玉玲隋国良翟木绪王敏廖二元; 关键词：RANKL 单核细胞小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶骨吸收功能吖啶橙染色

SEDT-PA致病基因WISP3突变体的构建及在COS-7细胞中的表达定位被引量：3: 2006年; 目的通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(SEDT-PA)致病型(1000T-C,840delT)Wnt诱导分泌蛋白3(WISP3)与绿色荧光蛋白融合表达的真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,为研究WISP3突变致SEDT-PA的机理奠定基础。方法从正常人软骨细胞获得野生型WISP3基因的全长cDNA(WT-WISP3);定点突变方法构建携带WISP3基因致病型的重组真核表达质粒MUT1000T/C/pEGFP-C2和MUT840delT/pEGFP-C2;以空白载体pEGFP-C2为对照,脂质体转染法将重组质粒瞬时转染COS-7细胞,48h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达;半定量RT-PCR法检测WISP3基因的表达。结果测序和酶切鉴定证实插入片段大小和序列的正确;突变体在COS-7细胞中均高效表达;荧光显微镜观察发现,转染野生型WISP3基因的COS-7细胞中绿色荧光均匀分布在细胞浆和细胞膜,转染突变体的COS-7细胞中荧光呈斑点状染色和聚集现象。结论成功构建了SEDT-PA致病基因WISP3突变体,且发现野生型WISP3蛋白定位于细胞浆和细胞膜,而突变型的WISP3蛋白在细胞浆内异常聚集,为进一步探讨SEDT-PA的发病机制创造条件。; 王敏周后德彭依群翟木绪何玉玲谢辉隋国良罗湘杭郭丽娟黄佼杨敏崔蓉蓉廖二元; 关键词：突变体定点突变亚细胞定位

胰岛素受体底物1在前成骨细胞分化过程中的表达被引量：3: 2012年; 目的研究胰岛素受体底物1(IRS-1)在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中的表达。方法在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,分别在不同时点收集细胞及上清液。骨钙素含量用放射免疫法测定;碱性磷酸酶活性用α-磷酸奈酚法测定;Ⅰ型胶原、骨涎蛋白、骨桥素和IRS-1的mRNA表达应用半定量RT-PCR检测;免疫印迹法测定IRS-1蛋白水平。结果在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中,IRS-1的表达量逐渐增加,而且与Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎素和骨桥素呈正相关。结论 IRS-1参与MC3T3-E1细胞的增殖、成熟与矿化的全过程。; 何玉玲周后德隋国良刘敏黄秋霞廖二元; 关键词：MC3T3-E1细胞胰岛素受体底物1 分化

国家自然科学基金(30400218)

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