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北京市科技新星计划(2004B05)

作品数：1 被引量：0H指数：0
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相关领域：生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇原核
  • 1篇原核表达
  • 1篇原核表达纯化
  • 1篇生物学
  • 1篇生物学活性
  • 1篇鼠白血病病毒
  • 1篇逆转
  • 1篇逆转录
  • 1篇逆转录酶
  • 1篇转录
  • 1篇转录酶
  • 1篇酶活
  • 1篇酶活力
  • 1篇活性
  • 1篇核表达
  • 1篇白血
  • 1篇白血病
  • 1篇白血病病毒

机构

  • 1篇北京工业大学

作者

  • 1篇王贤松
  • 1篇马雪梅
  • 1篇孙一

传媒

  • 1篇生物工程学报

年份

  • 1篇2008
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶的原核表达纯化及其生物学活性
2008年
利用基因重组技术及简易的纯化方法快速制备莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)。设计带有酶切位点的引物,PCR获得MMLV-rt基因片段;再通过定点突变将目的基因的五个可溶性位点进行突变,测序正确后,插入到表达载体pET15b中构建成重组表达质粒pET15b-MMLV-rt;表达产物的纯品通过金属离子(Ni3+)配体亲和纯化系统得到。用SDS-PAGE分析所纯化产物的大小和纯度,再用RT-PCR对其活性进行鉴定。构建的重组表达质粒pET15b-MMLV-rt经IPTG诱导得到N端带有6His的RT融合蛋白,通过Ni3+的亲和层析得到纯品蛋白,SDS-PAGE分析表明其纯度可达96%,RT-PCR实验表明具有较高的生物学活性。由此得出利用原核表达及简易的纯化系统可获得纯度为96%的逆转录酶纯品,为大规模生产该酶提供了可靠的保证。
王贤松马雪梅孙一
关键词：逆转录酶定点突变酶活力
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