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国际科技合作与交流专项项目(2006DFA33740): 作品数：33 被引量：143H指数：7; 相关作者：陈创夫张辉王远志曹旭东任艳更多>>; 相关机构：石河子大学教育部安阳市中医院更多>>; 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

基于重组蛋白SP41的布鲁氏菌间接ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：6: 2010年; 对布鲁氏菌黏附素SP41蛋白进行表达、纯化,以表达重组蛋白为包被抗原,建立了检测布鲁氏菌病绵羊血清抗体的间接ELISA方法。克隆布鲁氏菌SP41基因,PRC、酶切、测序鉴定正确后,构建pET-32a(+)-SP41原核表达载体,转化表达菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达重组SP41蛋白,纯化表达产物后包被酶标反应板,方阵滴定法进行最佳血清稀释度和最侍抗原浓度的筛选,结果显示重组蛋白SP41最佳抗原包被浓度为0.6mg/L,最佳血清稀释度为1:50。交叉试验、阻断试验、重复性试验表明,该方法重复性好、特异性强。利用此方法检测217份绵羊血清样本,结果表明该方法的阳性检出率要高于虎红平板试验和试管凝集试验。; 张辉陈创夫乔军王远志曹旭东任艳; 关键词：布鲁氏菌间接ELISA

羊种布鲁氏菌的分离鉴定及其ugpB基因的原核表达被引量：5: 2009年; 对新疆某羊场流产胎儿进行布鲁氏菌病原分离、培养,采用细菌群体形态观察、PCR、生化试验进行鉴定,结果分离得到了羊种布鲁氏菌生物3型,命名为027株。应用常规分子生物学方法克隆羊种布鲁氏菌生物3型027株的ugpB基因,构建原核表达载体pET-ugpB,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白UgpB,进行SDS-PAGE和western blot分析,结果表明ugpB融合基因在大肠杆菌中得到了表达;采用Ni-NTAAgarose试剂盒进行蛋白纯化,获得了纯化的融合蛋白。; 张辉陈创夫王远志盛金良任艳郭飞; 关键词：羊种布鲁氏菌蛋白纯化

畜产品中布鲁氏菌基因组的提取方法及病原学诊断方法的探讨被引量：1: 2016年; 根据布鲁氏菌基因(omp22)设计两对引物。对肉、奶、皮毛和血液等畜产品中的布鲁氏菌分别采用不同的基因组提取方法,所得到的布鲁氏菌基因组作为模板,并以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、棒状杆菌、绿脓杆菌等常见菌群的各细菌DNA为模板,进行内、外引物PCR反应和巢式PCR反应,反应时以灭菌超纯水作为空白对照。结果显示:进行内、外引物PCR反应和巢式PCR反应时,布鲁氏菌均出现预期的扩增条带526 bp、253 bp及253bp,且巢式扩增后条带亮度明显增强,而作为验证PCR特异性或对照的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、棒状杆菌、绿脓杆菌、灭菌超纯水均无扩增带。; 唐莉娟陈创夫王远志张辉; 关键词：布鲁氏菌提取基因组巢式PCR

羊种布鲁氏菌侵染HPT-8细胞cDNA文库的构建及EST序列功能分析: 建立羊种布鲁氏菌027株侵染HPT-8细胞的cDNA文库。分别提取布鲁氏菌侵染20min、1h、2h、3h、4h后HPT-8细胞总RNA,逆转录合成cDNA,同源重组法构建布鲁氏菌侵染HPT-8细胞的cDNA文库,对文库...; 张辉陈创夫王远志盛金良曹旭东任艳; 关键词：CDNA文库 EST

羊种布鲁氏菌侵染HPT-8细胞cDNA文库的构建及EST序列分析: 2010年; 拟建立羊种布鲁氏菌侵染HPT-8细胞的cDNA文库。分别提取布鲁氏菌侵染20min、1h、2h、3h、4h后HPT-8细胞总RNA,逆转录合成cDNA,同源重组法构建布鲁氏菌侵染HPT-8细胞的cDNA文库,测定其库容量和重组率,对文库63个克隆进行测序分析,采用BLASTx和BLASTn进行序列同源性比对,并将63个基因进行了功能分类。结果得到的羊种布鲁氏菌侵染人胚胎滋养层细胞HPT-8cDNA文库的库容为1.43×106,重组率是96.92%,插入片段大小为0.2-5.0kb。在63个基因中,与转录、能量代谢、运输及细胞因子相关的基因所占比例较高。构建的羊种布鲁氏菌侵染HPT-8细胞的cDNA文库,为研究宿主细胞受体和布鲁氏菌入侵途径,进一步了解布鲁氏菌的致病机理奠定了基础。; 张辉陈创夫盛金良王远志张科郭飞黎诚耀; 关键词：羊种布鲁氏菌 CDNA文库 EST

羊种布鲁氏菌的分离鉴定及其ugpB基因的原核表达: 对新疆某羊场流产胎儿进行布鲁氏菌病原分离、培养,采用细菌群体形态观察、PCR、生化试验进行鉴定,结果分离得到了羊种布鲁氏菌生物3型,命名为027株。常规分子生物学方法克隆羊种布鲁氏菌生物3型027株的ugpB基因,构建原...; 张辉陈创夫王远志盛金良任艳郭飞; 关键词：羊种布鲁氏菌蛋白纯化

牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR检测技术的建立及初步应用被引量：5: 2010年; 以牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的保守基因5＇-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为101~106copies/μL,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.78。灵敏性比常规PCR高102倍。该方法具有良好的特异性,检测变异系数低于1%。应用本实验建立的方法检测25份不同地区采集的临床症状疑似BVDV感染的牛粪样品,阳性检出率为72%（18/25）,与病毒分离培养和电检观察相比,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,为实验室快速、准确检测BVDV奠定了基础。; 任艳陈创夫乔军王鹏雁盛金良王远志张沾李臻; 关键词：牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR

戊型肝炎病毒流行病学研究进展被引量：9: 2010年; 戊型肝炎(HE)是由肝炎病毒科(hepeviridae)肝炎病毒属(hepevirus)戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)所引起的一种人兽共患传染病,主要经粪—口途径传播。对食源性戊型肝炎病毒感染的预防与控制、异种器官移植及猪源细胞的使用有重要意义。作者就该病近年的流行病概况、传播途径、动物宿主及人工感染试验进行了综述。; 王永霞郝成武马勋; 关键词：戊型肝炎流行病学

结核分枝杆菌巢式PCR诊断技术的建立和初步评价: 2008年; 以结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110设计巢式PCR引物,对痰样本结核分枝杆菌的基因组DNA进行扩增,建立了检测结核病病原的巢式PCR诊断方法,试验验证有较好的特异性和敏感性,采用此方法扩增结核分枝杆菌可以获得244 bp的目的片段,对常见病原菌金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、李氏杆菌、布鲁氏菌等以及无结核病史的痰样本检测阴性,通过扩增不同浓度梯度稀释的模拟阳性痰样本确定了其敏感性为4个拷贝/反应。对送检的41份痰样本采用本方法进行检测,阳性率为60.98%。; 刘景陈创夫张辉曹旭东任艳唐丽燕; 关键词：结核分枝杆菌巢式PCR

布鲁氏菌bp26基因的原核表达及BP26-间接ELISA方法的初步建立被引量：15: 2009年; 为了表达并纯化布鲁氏菌BP26蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。方法:从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆bp26基因,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,纯化BP26蛋白,进行SDS-PAGE、Western-blot检测,将纯化的BP26蛋白包被ELISA板,建立检测布鲁氏菌病的间接ELISA方法,用该方法检测42份绵羊血清,结果与标准试管凝集试验(SAT)进行比较。结果显示:正确表达并纯化了BP26蛋白,布鲁氏菌标准试管凝集试验检测的阳性率为30.85%(13/42);间接ELISA方法检测的阳性率为35.71%(15/42),二者阳性符合率为86.67%(13/ 15)。结论表达、纯化的BP26蛋白能够与布鲁氏菌阳性血清特异性结合,建立的ELISA方法比SAT方法更敏感。为以后M5-90疫苗株bp26基因缺失苗的应用提供配套性血清学检测奠定基础。; 唐利燕陈创夫王远志张辉张红星; 关键词：布鲁氏菌间接ELISA

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