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国家科技支撑计划(2012BAD17B02): 作品数：17 被引量：148H指数：9; 相关作者：孙洪仁刘琳吴灶和简纪常吴雅娜更多>>; 相关机构：中国农业大学广东海洋大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

牙鲆经注射和浸泡免疫鳗弧菌灭活疫苗后7种免疫相关基因表达的变化被引量：16: 2014年; 制备鳗弧菌（Vibrio anguillarum）全菌灭活疫苗,采用腹腔注射和浸泡两种方式分别免疫牙鲆（Paralichthys olivaceus）,于免疫后0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h、7 d、14 d分别取牙鲆脾、头肾、鳃3种组织,提取mRNA,应用实时荧光定量PCR法检测3种组织中白介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）α、主要组织相容性复合体（MHC）MCHⅠ、MHCⅡ、T细胞表面受体CD4、T细胞表面受体CD8、免疫球蛋白（Ig）M 7种免疫相关基因的表达。结果显示,两种方式免疫后各基因表达量均出现显著上调。注射组3种组织中, IL-1β、TNFα基因的表达高峰出现时间在12-24 h, MHCⅠ、MHCⅡ、CD4、CD8的表达高峰出现在48-72 h, IgM的表达高峰出现在免疫后7 d,各基因表达量最高值是对照组的2-70倍；浸泡组3种组织中, IL-1β、TNFα基因的表达高峰出现在免疫后12-48 h, MHCⅠ、MHCⅡ、CD8表达高峰出现在48-96 h,但CD4在头肾和鳃中表达高峰出现在72 h,在脾中表达高峰出现在7 d, IgM在鳃中表达高峰出现在96 h,在脾和头肾中表达量在14 d内逐渐上升,各基因表达最高值是对照组的2-20倍。结果表明,注射组各组织基因的转录水平均高于浸泡组,且脾、头肾中表达量最高值出现时间早于浸泡组,但鳃中各基因峰值出现时间晚于浸泡组。研究结果为疫苗的免疫途径及免疫效果评价提供了基础数据。; 宋晓青邢婧战文斌; 关键词：牙鲆注射免疫浸泡免疫免疫相关基因

中国北方紫花苜蓿土壤有效磷丰缺指标与适宜施磷量初步研究被引量：25: 2016年; 为了初步建立我国北方紫花苜蓿土壤有效磷(Olsen-P)丰缺指标,并确定不同丰缺级别土壤的适宜施磷量,采用土壤有效养分含量与缺素处理相对产量回归方程法、土壤有效养分丰缺分级改良方案和"养分平衡—地力差减法"确定适宜施肥量新应用公式,开展了本研究。结果表明,东北平原区第1~5和6~11级土壤有效磷丰缺指标依次为>26、14~26、7~14、4~7、2~4和0~2 mg/kg;内蒙古高原区第1~11级土壤有效磷丰缺指标依次为>28、16~28、9~16、5.2~9、3.0~5.2、1.7~3.0、1.0~1.7、0.6~1.0、0.3~0.6、0.2~0.3和0~0.2 mg/kg;西北荒漠绿洲区第1~5和6~11级土壤有效磷丰缺指标依次为>20、12~20、7~12、4~7、2.4~4和0~2.4 mg/kg;黄土高原区第1~5和6~11级土壤有效磷丰缺指标依次为>29、15~29、7~15、4~7、2~4和0~2 mg/kg;黄淮海平原区第1~3和4~11级土壤有效磷丰缺指标依次为>13、4~13、1~4和0~1 mg/kg。当紫花苜蓿干草目标产量为15 t/hm^2时,第1~11级土壤的适宜施磷(P2O5)量依次为0、45、90、135、180、225、270、315、360、405和450 kg/hm^2。; 孙洪仁曹影刘琳吴雅娜杨晓洁赵雅晴; 关键词：测土施肥紫花苜蓿土壤有效磷养分丰缺指标施肥量

紫花苜蓿灌溉的理论与技术被引量：11: 2014年; 本文系统地阐述了紫花苜蓿灌溉的理论与技术,内容包括需水量、需水强度、入渗速率、灌溉需要量、灌溉定额、灌水深度、灌水定额、灌水周期、灌水次数、灌水时期、灌水强度、灌溉方法等内容。; 孙洪仁刘琳曹影杨晓洁吴雅娜赵雅晴; 关键词：紫花苜蓿

溶藻弧菌二氢硫辛酰胺脱氢酶基因克隆及其生物信息学分析被引量：9: 2014年; 根据溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)二氢硫辛酰胺脱氢酶(dihydrolipoamide dehydrogenase,DLD)的基因序列设计1对特异性引物。PCR扩增结果显示,DLD(GenBank登录号AGK62253)全长1 428 bp,共编码475个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子质量约为50.998 ku,等电点为5.51。细胞定位、SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,DLD位于细胞质中,在第29至30个氨基酸之间存在信号肽,不存在跨膜区,氨基酸序列含有1个Asn-糖基化位点、5个蛋白激酶C磷酸化位点、6个酪蛋白激酶II磷酸化位点等多个活性位点。系统进化树结果显示,溶藻弧菌DLD与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)聚为一簇。用Kyte-Doolittle亲水性参数、Karplus-Schulz柔韧性参数、Emini表面可及性参数和Jameson-Wolf抗原性参数分别预测,DLD可能的B细胞抗原优势表位分别是第5~10、106~110、120~125、158~163和175~180区段。利用SWISS-MODEL软件,模拟DLD亚基三维结构模型,结果显示其与大肠杆菌(Escherichia coli)DLD蛋白有相似构型。Kegg分析发现,其涉及糖酵解和糖异生等9条信号通路。从生物信息学角度验证了DLD作为弧菌共同抗原的可行性。; 庞欢瑛陈立明蔡佳汤菊芬王蓓吴灶和简纪常; 关键词：溶藻弧菌基因克隆生物信息学分析

溶藻弧菌dtd基因的克隆及原核表达条件优化被引量：3: 2014年; 根据NCBI数据库中已发表的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)全基因组序列合成一对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR技术)扩增溶藻弧菌HY9001菌株dtd基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a构建重组表达质粒pET-DTD,并对其进行诱导温度、诱导时间、诱导IPTG浓度等条件的优化,最后探究其纯化时最佳咪唑洗脱浓度。结果表明:DTD蛋白成功表达,且其以包涵体的形式存在,在诱导温度37℃、IPTG浓度0.1 mmol/L条件下诱导5 h表达量最高,纯化最佳咪唑洗脱浓度为150 mmol/L。; 陈立明庞欢瑛简纪常吴灶和; 关键词：溶藻弧菌 DTD 基因克隆原核表达

溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统分子伴侣护航蛋白VscO的基因克隆及其生物信息学分析被引量：12: 2014年; 克隆了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03株Ⅲ型分泌系统(T3SS)分子伴侣护航蛋白(Chaperone escort protein)vscO基因,并对其进行生物信息学分析。结果表明,vscO基因全长462 bp,编码153个氨基酸,理论分子量约为18.43 kD,pI值为9.22。细胞定位分析显示vscO基因位于外周质,不存在信号肽,无跨膜区。vscO基因具有转录起始区-35区和-10区,以及翻译识别信号SD序列(Shine-Dalgarno sequence)。该氨基酸序列含有多种活性位点,如蛋白激酶C磷酸化位点等。系统进化树发现溶藻弧菌的VscO蛋白与副溶血弧菌聚为同一亚族。VscO亚基三维结构模型显示其与副溶血弧菌T3SS的YscO蛋白有相似构型。信号通路分析推测VscO位于T3SS的针状样结构上。蛋白网络互作图谱发现VscO与10种T3SS蛋白具有相邻关系。本研究结果将为溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统护航机制的研究奠定基础。; 庞欢瑛周泽军丁燏黄郁葱吴灶和简纪常; 关键词：溶藻弧菌

“养分平衡—地力差减法”确定适宜施肥量的新应用公式被引量：72: 2014年; 为了获得一个与"土壤养分丰缺指标法"结合紧密、便于应用的确定适宜施肥量的新应用公式,以期使土壤养分丰缺指标体系建设减少试验工作量、简单易行,研究在对"养分平衡—地力差减法"确定适宜施肥量现有计算公式系统评析的基础上,选择实用性相对较强的应用公式进行改造:适宜施用养分量=(目标产量-基础产量)×单位经济产量作物吸收养分量÷养分当季利用率;改造方案为以"缺素处理产量"替代"基础产量",将"全肥处理产量"作为"目标产量",把"缺素处理相对产量"引入公式,用"单位经济产量作物移出养分量"替代"单位经济产量作物吸收养分量"。结果表明:经过推导得到一个新应用公式,适宜施用养分量=(1-缺素处理相对产量)×目标产量作物移出养分量÷养分当季利用率。利用新应用公式,在建立土壤养分丰缺指标之"常规5处理"田间试验基础上,无需再增加任何试验处理,即可直接计算出不同丰缺级别土壤的适宜施肥量。; 孙洪仁曹影刘琳吴雅娜杨晓洁赵雅晴; 关键词：测土施肥养分平衡法施肥量

适宜中国草都紫花苜蓿安全越冬的理论和技术被引量：6: 2015年; 本文系统阐述了适宜中国草都紫花苜蓿安全越冬的理论与技术,从品种选择、平整土地、基施有机肥、播种期、播种方法、越冬肥、末次刈割、越冬水、解冻水和返青水等方面进行了阐述。; 孙洪仁刘琳邵光武曾红刘江扬; 关键词：紫花苜蓿越冬春灌

红笛鲷(Lutjanus sanguineus)C型凝集素基因的克隆与组织表达分析被引量：1: 2015年; 根据已知的海水鱼类C型凝集素基因的核苷酸保守区序列设计一对简并引物,先后通过RT-PCR和RACE PCR法从红笛鲷脾脏中首次克隆获得红笛鲷C型凝集素(CTL)基因的c DNA全长(登录号:AGT37609)。该序列长828 bp,开放阅读框663 bp,编码220个氨基酸。氨基酸序列分析显示,红笛鲷CTL基因氨基酸序列与其他物种CTL的相似性在30%-68%之间。系统进化分析表明,红笛鲷C型凝集素与鳉鱼、条石鲷、斜带石斑鱼CTL蛋白亲缘关系最近,聚成一支。通过荧光定量PCR分析红笛鲷基因的组织差异表达,红笛鲷CTL基因在肝、脾以及皮肤中表达水平较高,其次是头肾、肾、胃、肠及肌肉,在心脏与脑中表达量较低。; 蔡佳张雪利吴灶和简纪常鲁义善冯东岳焦茂兴; 关键词：红笛鲷 C型凝集素基因克隆组织表达分析

红笛鲷MAPKK5基因的克隆及生物信息学分析被引量：1: 2015年; 利用本实验室构建红笛鲷头肾cDNA文库中的MAPKK5基因EST序列,通过RACE PCR技术克隆红笛鲷MAPKK5基因cDNA全长(Ls-MAPKK5,登录号为KM657202)。序列分析结果显示,Ls-MAPKK5cDNA全长2632bp,其中开放阅读框1317bp,可编码438个氨基酸,预测其编码蛋白的分子量为49.29ku,理论等电点为6.12。SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0和SoftBerry-Psite预测结果显示,Ls-MAPKK5没有信号肽和跨膜结构,含有22个磷酸化位点。氨基酸序列分析显示LsMAPKK5具有保守的PB1与S_TKc结构域。利用MEGA5.0软件,根据邻位相连法构建MAPKK5系统进化树,结果显示Ls-MAPKK5与雀鲷、吉富罗非鱼该蛋白有较近的亲缘关系。; 蔡佳黄郁葱吴灶和鲁义善简纪常冯东岳焦茂兴; 关键词：红笛鲷基因克隆生物信息学分析

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