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军队“十五”青年基金
军队“十五”青年基金
- 作品数：25 被引量：90H指数：5
- 相关作者：纪冬刘妍成军路长林白文涛更多>>
- 相关机构：第二军医大学第四军医大学解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究被引量：4
- 2005年
- 目的 应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法 以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1( )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,进行抑制性消减杂交分析。将富集的二次PCR产物与T A载体连接 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果 文库扩增后得到 3 3个阳性克隆 ,经菌落PCR分析显示其中 2 8个克隆含有大小不等的 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。测序及同源性分析显示 ,12种已知基因编码蛋白 ,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS4B反式激活靶基因。结论 成功构建了HCVNS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为进一步阐明HCVNS4B反式调节的靶基因在肝炎。
- 刘妍成军王建军白桂芹王志凌郭风劲纪冬崔玉芳
- 关键词：NS4B反式激活基因克隆化研究CDNA消减文库基因编码蛋白
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5B反式激活基因的克隆化研究
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白5B(HCV NS5B)转染细胞差异表达cDNA消减文库,克隆HCV NS5B蛋白反式激活相关基因.方法:以HCV NS5B表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5B转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交(SSH)分析.随机挑取克隆进行测序及同源性分析.结果:文库扩增后得到35个阳性克隆,经菌落PCR分析显示其中26个克隆含有大小不等的200～1000 bp插入片段.测序及同源性分析,显示16种已知基因编码蛋白和1种未知功能基因序列,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因,可能是NS5B反式激活靶基因.结论:成功构建了HCV NS5B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HCV NS5B反式调节的靶基因在肝炎、肝纤维化和肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据.
- 刘妍白桂芹成军王志凌张黎颖纪冬
- 关键词：C型肝炎样病毒属病毒非结构蛋白质类
- 全身放射损伤对伤口早期局部组织核转录因子NF-κB活性的影响被引量：3
- 2002年
- 史春梦程天民屈纪富冉新泽
- 关键词：全身放射损伤伤口核转录因子NF-ΚB活性
- 中药奇蒿提取物体外抗菌活性的实验研究被引量：15
- 2010年
- 目的研究中药奇蒿80%乙醇粗提取物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物对临床常见菌种的抗菌活性。方法对中药奇蒿进行系统性分离提取,以80%乙醇粗提取物和石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物进行体外药敏实验,序贯使用纸片扩散法和常量肉汤稀释法,选用临床常见的致病菌株,包括金黄色葡萄球菌(标准型ATCC25923)、大肠埃希氏菌(标准型ATCC25922)、铜绿假单胞菌(标准型ATCC27853)、无乳链球菌(临床型)、粪肠球菌(临床型)、福氏志贺菌(临床型)和痢疾志贺菌(临床型)。结果奇蒿80%乙醇粗提取物对痢疾志贺菌的最小杀菌浓度(MBC)为25 mg/ml;奇蒿氯仿提取物对大肠埃希氏菌的MBC为6.25 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的MBC为12.5 mg/ml;奇蒿乙酸乙酯提取物对福氏志贺菌、痢疾志贺菌、无乳链球菌的MBC均为6.25 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的MBC为12.5 mg/ml;奇蒿正丁醇提取物对无乳链球菌的MBC为12.5 mg/ml,对痢疾志贺菌的MBC为25 mg/ml;石油醚提取物未对测试的细菌表现出明显的抗菌活性。结论奇蒿不同提取物对临床多种致病菌表现出了良好的杀菌作用,在抗感染治疗领域具有较好的开发和应用前景,其有效单体及杀菌机制有待进一步研究发现。
- 谭蔚锋王靖邢新秦路平
- 关键词：奇蒿提取物体外抗菌实验最小杀菌浓度
- 用SLS法定制修复下颌骨缺损的钛植入体的实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨应用SLS法定制钛植入体修复下颌骨缺损的可行性。方法:通过螺旋CT图像重建人下颌骨三维数据并制作单侧骨缺损模型,采用健侧数据镜像反转方法获得修复缺损的植入体CAD数据模型,用SLS法将CAD数据转换成蜡模,经失蜡铸造制作纯钛植入体,通过定点测量比较植入体与CAD模型的几何差异。结果:所制作的钛植入体形态自然,尺寸精度高。结论:应用SLS法定制修复下颌骨缺损的植入体精度高,耗时短,是一种很有前景的个性化修复下颌骨缺损的方法。
- 高勃朱晓瑜王晓波王忠义
- 关键词：SLS钛植入体骨缺损
- 骨桥蛋白编码基因在肝内胆管细胞癌和胆囊癌中的表达被引量：2
- 2006年
- 骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种高度磷酸化和糖基化的分泌型蛋白，富含唾液酸，OPN在很多恶性肿瘤中异常表达并且同恶性程度和转移相关。由此我们应用荧光定量PCR技术可以对肝内胆管细胞癌和胆囊癌这两种重要的肝胆系统恶性肿瘤组织中的OPN的mRNA水平进行实时定量检测，发现OPN在肝内胆管细胞癌和胆囊癌组织中表达明显升高。
- 张宝华满晓波唐亮邱秀华程庆保姜小清张柏和
- 关键词：肝内胆管细胞癌胆囊癌组织骨桥蛋白荧光定量PCR技术恶性肿瘤组织实时定量检测
- 两种基于直接数字合成技术的阻抗激励源的对比研究被引量：5
- 2005年
- 目的:比较两种基于直接数字合成技术的阻抗激励源的性能,为以后阻抗系统设计提供指导.方法:设计了基于直接数字合成(DDS)芯片的阻抗激励源;并且在频谱特性、灵活性等方面与基于可编程逻辑器件(FPGA)芯片的激励源进行了比较.结果:在频谱特性上,FPGA激励源的信号质量优于DDS芯片激励源.灵活性上,DDS芯片激励源优于FPGA激励源.结论:二者各有优缺点,实际应用中,可根据具体情况选择合适的激励源.我们在实验中对激励源的灵活性要求较高,所以选择了基于AD9850的阻抗激励源.
- 刘延勇董秀珍尤富生史学涛季振宇
- 关键词：直接数字合成激励源生物电阻抗
- 重组ACTH(4-10)与GDNF融合蛋白及其生物活性研究被引量：1
- 2001年
- 通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素 4 10 (ACTH (4 10 ) )与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的融合基因 ,并将它重组克隆到表达载体 pET 2 8a (+ )中 ,构建表达质粒pET ACTH (4 10 ) GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导可高效表达ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白 .用Ni2 + NTA树脂一步法纯化目的蛋白 ,纯度达 85 %以上 .纯化和复性的ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活 ,作用强于ACTH (4 10 )及GDNF蛋白 .
- 陈哲宇张勇何成路长林吴祥甫
- 关键词：融合蛋白基因表达
- 抗汉坦病毒NP抗原细胞内抗体的瞬时表达及活性检测被引量：3
- 2004年
- 目的 :在真核细胞中表达抗汉坦病毒NP抗原鼠源性单克隆抗体 (mAb) 1A8的scFv ,并检测表达产物的活性。方法 :将真核表达载体 1A8 scFv Cκ/pCI neo用脂质体转染COS 7细胞 ,用间接免疫荧光和免疫共沉淀法检测瞬时表达产物的免疫学活性。结果 :间接免疫荧光的结果表明 ,约 1%细胞胞质中出现弥散荧光 ,在免疫共沉淀 /免疫印记中 ,表达的抗体片段可与汉坦病毒的NP抗原特异性结合。结论 :细胞内表达的1A8 scFv Cκ可与NP抗原特异性结合 。
- 白文涛徐志凯张芳琳罗雯刘勇吴兴安阎岩
- 关键词：细胞内免疫单链抗体汉坦病毒
- 汉滩病毒糖蛋白G2酵母双杂交诱饵载体的构建及初步鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的利用Ras募集系统(RRS),构建并鉴定含汉滩病毒囊膜糖蛋白G2的诱饵载体。方法将汉滩病毒76-118株囊膜糖蛋白G2基因与Ras基因连接,构建嵌合基因Ras-G2及Ras-G2’(G2’无前导肽序列)。将两个嵌合基因分别克隆入酵母表达载体pMet25,并转化至酵母温度敏感株cdc25-2,检测其对RRS系统的激活作用。结果限制性内切酶酶切鉴定表明,Met-G2和Met-G2’载体构建正确。激活试验结果为阴性。结论Met-G2和Met-G2’载体可用于从cDNA文库中筛选汉滩病毒受体。
- 白文涛张芳琳吴兴安胡刚于澜史梦远王海涛徐志凯
- 关键词：汉滩病毒酵母双杂交
