云南省烟草专卖局(公司)科技项目(2011YN01)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：皮金鹏刘勇谢贺兰建强李文正更多>>
- 相关机构：云南省烟草农业科学研究院云南农业大学更多>>
- 发文基金：云南省烟草专卖局(公司)科技项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 烟草马铃薯Y病毒病相关基因eIF4E的片段克隆及RNAi载体构建被引量：3
- 2012年
- 以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA(dsRNA)为目标,以感病烟草品种为材料,提取总RNA,根据已报道的eIF4E基因的核苷酸序列,在保守区域和差异区域分别设计特异性引物,采用RT-PCR克隆出eIF4E基因的目的片段。将正向目的基因用XbaⅠ和ClaⅠ切下,将所得基因片段与用同样酶切开的含内含子的载体pKAN相连,取名pK-S;用同样的方法,将反向目的基因用XhoⅠ和KpnⅠ切下,所得基因片段与用同样酶切开的pK-S相连,取名pK-SA,再用NotⅠ将包括Intron和正反向基因在内的片段切下,将其定向插入同样酶切开的pART27上,获得重组质粒。以中间载体pKANNIBAL和表达载体pART27为基础,构建成以CaMV35S启动子为驱动的含有"正向eIF4E目的片段-pdkintron-反向eIF4E目的片段"的RNAi烟草表达载体,获得的载体可以应用于植物转基因抗病毒育种工程中。
- 皮金鹏谢贺刘勇兰建强李文正
- 关键词：烟草PVYEIF4ERNAI载体构建
