江苏省自然科学基金(BK2011094) 作品数:5 被引量:18 H指数:2 相关作者: 诸葛宇征 张峰 王晖晖 赵芹 杨华 更多>> 相关机构: 南京大学医学院附属鼓楼医院 东南大学 南京医科大学 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
经皮肝动脉插管化疗栓塞术后并发症的原因分析及护理 被引量:12 2016年 目的探讨肝癌患者经皮肝动脉化疗栓塞术后并发症的原因及护理对策,以提高护理观察能力,促进患者术后康复。方法回顾性分析肝动脉插管化疗栓塞术后180例患者的临床资料,总结术后并发症原因及采取的护理措施。结果本组80例患者术后发生并发症,并发症包括穿刺部位出血及血肿、迷走神经反射、股动脉栓塞、栓塞性胆囊炎、化疗栓塞术后综合征、上消化道出血、尿潴留等;经过周密观察、对症治疗与护理,患者均恢复良好。结论严密细致地观察术后病情变化,正确认识和处理并发症,是预防和减少术后并发症的关键,对于提高并发症治愈率、促进患者康复有着重要意义。 赵芹 杨华关键词:肝癌 并发症 护理 改良重叠区扩增法构建Rac1相关质粒 被引量:2 2013年 采用改良重叠区扩增法实现Rac1基因定点突变,构建人Rac1基因相关真核表达质粒,观察EGFP-Rac1融合蛋白在人正常肝细胞LO2中的表达。利用RT-PCR的方法得到Rac1基因,使用改良重叠区扩增法实现Rac1基因的定点突变,获得Rac1突变基因。将Rac1基因及Rac1突变基因通过限制性酶切技术及DNA连接技术插入真核表达载体pEGFP-C1中,获得重组质粒pEGFP-C1-Rac1,pEGFP-C1-Rac1V12和pEGFP-C1-Rac1N17。将上述质粒瞬时转染入LO2细胞中,采用荧光技术及Westernblotting检测目的基因的表达。结果显示,限制性酶切及基因测序证实质粒构建正确,转染LO2细胞后,融合蛋白EGFP-Rac1在细胞中高效表达。成功构建真核表达质粒,在LO2细胞中,该质粒能成功表达融合蛋白EGFP-Rac1。 段桂华 沈姗姗 诸葛宇征关键词:RAC1 基因定点突变 融合蛋白 S-腺苷蛋氨酸对活化人肝星状细胞增殖和凋亡的影响 被引量:1 2014年 背景:肝星状细胞(HSCs)的活化是肝纤维化发生的中心环节.S-腺苷蛋氨酸(SAM)是机体最重要的甲基供体,既往研究表明SAM具有一定的抗纤维化作用,能抑制HSCs的活化.目的:观察SAM对活化人肝星状细胞株LX-2增殖、凋亡的作用及其相关机制.方法:用不同浓度SAM培养LX-2细胞24h,采用CCK-8法检测SAM对LX-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时定量PCR法检测cyclin Dl mRNA表达,蛋白质印迹法检测α-SMA蛋白表达.结果:与对照组相比,3.0 ~8.0mmol/L SAM能抑制LX-2细胞增殖,并呈剂量依赖性(P<0.05);2.0、4.0 mmol/L组G1/G0期细胞比例显著降低(P<0.05),S期细胞比例显著升高(P<0.05);4.0、8.0 mmol/L组早期凋亡率和总体凋亡率显著升高(P<0.05);2.0、4.0 mmol/L组cyclin D1 mRNA表达显著升高(P<0.05);1.0、2.0、4.0 mmol/L组α-SMA蛋白表达显著降低(P<0.05).结论:SAM能抑制LX-2细胞增殖,其机制可能通过上调cyclin D1的表达而使细胞周期阻滞于S期;同时,SAM能诱导LX-2细胞的凋亡,并下调α-SMA的表达. 张峰 诸葛宇征 顾建祥 李昱江关键词:S-腺苷甲硫氨酸 肝星状细胞 细胞增殖 细胞周期蛋白D1 Rac1对L02肝细胞株上皮细胞间质转化及增殖和凋亡的影响 被引量:3 2014年 目的检测Rac1在TGF-β1诱导的L02细胞上皮间质转化中的作用,及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法应用不同活性的Rac1质粒pExRed-NLS Flag(空载体组)、pExRed-NLS Flag Rac1(野生型Rac1组)、pExRed-NLS Flag Rac1T17N(显性负调控Rac1组)、pExRed-NLS Flag Rac1G12V(持续活化型Rac1组)瞬时转染L02细胞,经5 ng/ml TGF-β1处理细胞。采用免疫印迹法检测融合蛋白Flag-Rac1表达,采用细胞免疫荧光及免疫印迹法检测Ck8和Vimentin表达,采用细胞划痕实验及Transwell法检测细胞迁移能力。使用不同浓度的Rac1特异性抑制剂NSC23766处理L02细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果四组质粒均成功瞬时转染到L02细胞中;与空载体组和野生型Rac1组比,持续活化型Rac1转染细胞Vimentin蛋白表达水平显著增高,CK8蛋白表达水平降低,细胞迁移能力增加;与空载体组和野生型Rac1组比,显性负调控Rac1转染细胞Vimentin蛋白表达水平降低,CK8蛋白表达水平增高,细胞迁移能力降低(P<0.05);在NSC23766处理L02细胞后,细胞增殖被抑制,但各处理组细胞凋亡无明显差异。结论 Rac1可促进TGF-β1诱导的L02肝细胞株上皮间质转化和细胞增殖,但对细胞凋亡无明显影响。 王晖晖 张峰 沈珊珊 诸葛宇征关键词:L02细胞 RAC1 上皮间质转化 增殖 凋亡 不同二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞的比较研究 2014年 目的:在现有二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的基础上,探索更加高效的分离HSC方法。方法:分别采用链酶蛋白酶+胶原酶循环灌注、链酶蛋白酶非循环灌注+胶原酶循环灌注以及胶原酶单独循环灌注法分离大鼠HSC,比较三种方法的细胞获得率、活性和纯度差异。应用0.4%台盼蓝染色判断活性,结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)细胞免疫荧光方法鉴定纯度。结果:链酶蛋白酶非循环灌注+胶原酶循环灌注法细胞获得率高于另两种方法,细胞活力高于链酶蛋白酶循环灌注+胶原酶循环灌注法,三组得到的细胞纯度均高于90%且无显著差异。结论:在三种二步酶灌注方法中,链酶蛋白酶非循环灌注+胶原酶循环灌注法能显著提高HSC获得率,且对细胞活力影响小,不降低细胞纯度,是一种高效的分离方法,有利于HSC相关肝脏疾病的生物学研究。 张佳玲 张峰 边康麒 王晖晖 诸葛宇征关键词:肝星状细胞 原代培养