国家自然科学基金(30230140)
- 作品数：70 被引量：159H指数：7
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- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省自然科学基金更多>>
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- 大鼠大脑中动脉缺血后海马星形胶质细胞反应的研究被引量：15
- 2004年
- 目的观察大鼠大脑中动脉缺血后皮层损伤侧海马星形胶质细胞反应的变化。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞再灌流模型,应用免疫印迹和免疫组织化学方法测定脑缺血后3d、7d以及30d皮层损伤侧海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,观察星形胶质细胞增殖的变化。结果GFAP免疫组化结果显示,脑缺血后7d皮层损伤侧海马CA1、CA2区星形胶质细胞数量较假手术组增加且胞体增大;脑缺血后30d皮层损伤侧海马CA1、CA2区呈胶质疤痕样改变。同时,免疫印迹法显示脑缺血后7d皮层损伤侧海马GFAP表达增强;脑缺血后30d皮层损伤侧海马GFAP表达增高更加明显。此外,免疫印迹法显示脑缺血后3d皮层损伤侧海马PCNA蛋白表达水平升高;脑缺血后7dPCNA蛋白表达水平达到峰值;脑缺血后30d,PCNA蛋白表达水平降低,但仍高于假手术组。结论大鼠大脑中动脉缺血后可引起其皮层损伤侧海马星形胶质细胞过度反应和增殖。
- 张梁王伟阮旭中
- 关键词：星形细胞神经胶质原纤维酸性蛋白质海马
- 细胞周期素依赖性激酶抑制剂olomoucine对大鼠脊髓损伤后轴突再生微环境的影响及其意义被引量：9
- 2006年
- 目的探讨细胞周期素依赖激酶抑制剂olomouc ine对脊髓损伤后轴突再生微环境的影响及意义。方法建立脊髓半切损伤模型,实验大鼠随机分为假手术组、损伤对照组和olomouc ine干预组,采用W estern印迹分析脊髓损伤后细胞周期相关蛋白的表达;应用免疫荧光技术检测损伤区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)以及生长相关蛋白43(GAP-43)的表达;采用改良的Gale联合评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。结果假手术组细胞周期素(cyc lin)A、B1、E和增殖细胞核抗原以及GFAP、CSPG和GAP-43的表达较弱;脊髓损伤后cyc linA、cyc linB1、cyc linE和细胞周期素(PCNA)等细胞周期相关蛋白的表达显著增高,星形胶质细胞明显活化增殖,GFAP和CSPG的表达明显增强(均P<0.01),GAP-43的表达高于假手术组(P<0.05);给予olomouc ine干预后,细胞周期相关蛋白的表达显著下调,损伤区域星形胶质细胞的增殖和胶质瘢痕形成受到抑制,胶质瘢痕产生的CSPG的表达明显减少,GAP-43的表达显著增高,瘫痪后肢的运动功能明显改善(均P<0.05)。结论olomouc ine可通过调控细胞周期,抑制脊髓损伤后胶质细胞的活化增殖和胶质瘢痕的形成,减少抑制因子CSPG的表达以及上调有利于轴突再生的GAP-43的表达,改善损伤后轴突再生微环境最终促进瘫痪后肢的运动功能恢复。
- 田代实王伟徐运兰喻志源谢敏杰王萍张贵斌
- 关键词：脊髓损伤GAP-43蛋白细胞周期
- 细胞外信号调节激酶对细胞周期调控的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:研究脑缺血后细胞外信号调节激酶(ERK)对细胞周期调控的影响。方法:建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为脑缺血组(对照组及干预组)和假手术组。干预组于缺血前30min尾静脉注入ERK阻滞剂U0126,对照组尾静脉注入相同体积不含U0126的DMSO稀释溶液。应用免疫组织荧光化学法观察细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)阳性细胞表达;免疫印迹(Western blot)检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、Cyclin D1和Cyclin E的蛋白表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转录因子E2FmRNA的表达。结果:干预组Cyclin D1和Cyclin E阳性表达的细胞数较对照组显著减少(P<0.05);缺血对照组pERK1/2蛋白表达明显强于干预组(P<0.05),4h时间点表达最为明显,12h时间点恢复到基线水平,Cyc-lin D1和Cyclin E表达6h开始升高,12h表达最为明显,干预组较对照组显著减弱(P<0.05);缺血对照组E2FmRNA的表达显著强于干预组和假手术组(P<0.05),以7d表达最为明显。结论:ERK在大鼠脑缺血中发挥重要作用,抑制脑缺血引起的pERK1/2磷酸化可降低细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E和E2F的表达,即细胞外信号调节激酶可影响细胞周期的调控。
- 张贵斌王伟徐运兰王萍田代实
- 关键词：ERKSU0126CYCLINCYCLINE2F细胞周期
- 马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液对正常大鼠脑内TNF-α的影响
- 2005年
- 目的揭示激活的星形胶质细胞条件培养液对正常大鼠脑内TNF-α的影响。方法将马桑内酯(coriarialactone,CL)激活的星形胶质细胞条件培养液(astrocyticconditionedmedium,ACM)注射入正常SD大鼠侧脑室,观察大鼠的行为变化,运用免疫组织化学及放射免疫分析的方法,观察脑组织匀浆及脑脊液内肿瘤坏死因子(TNF-α)含量的变化。结果ACM组大鼠在注射ACM30min后出现癫痫行为,2h后恢复正常;免疫组织化学显示:ACM作用后2h,TNF-α免疫反应阳性神经元数和平均光密度值明显增高,4h达高峰(P<0.05),12h恢复正常水平;放射免疫分析方法显示ACM作用后2h大鼠大脑皮质、海马及脑脊液中TNF-α含量均开始增加,4h达高峰(P<0.05)。结论以上实验结果提示马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液可增强大鼠TNF-α的表达,并与癫痫发病有关。
- 李忠玉刘庆莹朱长庚王伟
- 关键词：条件培养液星形胶质细胞
- 细胞周期素依赖性激酶抑制剂olomoucine对大鼠癫痫持续状态后神经元凋亡的影响被引量：2
- 2007年
- 目的探讨选择性细胞周期素依赖性激酶抑制剂 olomoucine 对癫痫持续状态(SE)后神经元凋亡的影响。方法建立氯化锂-匹罗卡品 SE 模型,随机分为生理盐水组、SE 组和 olomoucine干预组。应用免疫荧光化学法检测神经元核心抗原(NeuN)和周期素蛋白 B1表达,通过 TUNEL 方法检测神经元凋亡情况;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测皮质及海马白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA 表达情况。统计方法采用方差分析与 t 检验。结果 (1)生理盐水组TUNEL 示阳性神经元稀少,SE 后显著增加(P<0.05),olomoucine 干预组明显少于 SE 组(P<0.05),尤其齿状回门区与生理盐水组相比差异没有统计学意义(P>0.05);(2)与 SE 组比较,olomoucine 干预组细胞周期素 B1阳性神经元数目减少,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)生理盐水组 IL-1β、TNF-αmRNA 表达量稀少,SE 后显著增加(P<0.05),除皮质 TNF-αmRNA 外,olomoucine 干预组较 SE组均明显降低(P<0.05)。结论 olomoucine 可通过调控细胞周期,抑制癫痫持续状态后神经元重新进入细胞周期,以及抑制活化的胶质细胞分泌炎性细胞因子,抑制癫痫持续状态后神经元凋亡而减轻脑损伤。
- 杜晓萍孙美珍喻志源陈华先田代实谢敏杰王伟
- 关键词：癫痫持续状态神经元凋亡细胞周期炎性细胞因子
- 脑缺血后大鼠神经元和星形胶质细胞p15^(ink4b)表达的差异研究
- 2006年
- 目的:比较研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15ink4b在神经元和星形胶质细胞的表达。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用流式细胞术检测各组MCAO再灌注后不同时期神经元和星形胶质细胞中的p15ink4b的表达。结果:缺血侧皮质区星形胶质细胞中的p15ink4b的表达在再灌注3d后开始下调,14d显著下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05);缺血侧皮质神经元中的p15ink4b在再灌注14d后表达下调,与假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:局灶性脑缺血再灌注损伤后,缺血侧皮质区星形胶质细胞和神经元均有p15ink4b不同程度的表达下调,星形胶质细胞中的p15ink4b表达下调比神经元更为显著。
- 陈华先王萍朱舟朱丽霞谢翠红喻志源王伟
- 关键词：细胞周期流式细胞术
- 大鼠发育过程中海马细胞周期相关蛋白的表达与分布
- 2005年
- 目的 观察正常SD大鼠发育过程中海马细胞周期相关蛋白表达及分布特点, 探讨其与脑老化的关系。方法 采用免疫组织化学方法观察不同发育时期 (1 周, 2 月, 4 月, 10 月, 15 月) Cyclin D1、CDK4、P16、NeuN表达的规律。结果 在各年龄组Cyclin D1、CDK4、P16、NeuN阳性细胞层的厚度随着增龄而逐渐变薄。各阳性细胞的排列逐渐由紧密变得松散, 胞体逐渐增大, 各阳性细胞逐渐伸出轴突进入分子层。P16 随月龄的增长在海马各区染色增强, 但 P16阳性细胞数目减少。结论 Cyclin D1、CDK4、P16、NeuN在海马发育的各个时期均有表达, 老龄大鼠海马内 Cyclin D1、CDK4、P16表达的下调提示细胞增殖活性受限, 这可能与脑老化有关。
- 刘津英王伟朱舟陈晨杜鹏余勇飞
- 关键词：海马细胞周期蛋白D1P16NEUN
- 选择性CDK抑制剂对大鼠局灶性脑缺血后胶质增殖及疤痕形成的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨选择性周期素依赖性蛋白激酶抑制剂Olomoucine对局灶性脑缺血后星形胶质细胞增殖及胶质疤痕形成的抑制作用。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组12只、模型组27只和干预组33只。3组均手术暴露颅骨,模型组和干预组建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,之后干预组腹腔注射Olomoucine,分别将3组大鼠于处理后3、7、30 d处死,应用免疫组织化学法检测梗死灶周围胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;Western blot法观察损伤侧皮质GFAP、增殖细胞核抗原(PCNA)、周期素蛋白A(CyclinA)和周期素蛋白B1(Cy-clinB1)的表达。结果:缺血后各组梗死灶边缘区GFAP表达明显增强,缺血后7和30 d模型组GFAP表达明显强于干预组(P<0.05),并且7和30 d对照组缺血边缘区可见胶质疤痕形成,尤以30 d最为明显;GFAP、PCNA、Cy-clinA和CyclinB蛋白的表达,模型组明显高于干预组(P<0.05)。结论:Olomoucine可部分抑制胶质细胞的活化增殖及疤痕的形成。该结果提示调控细胞周期可能是治疗脑缺血新的方向。
- 张贵斌邱张徐运兰王伟谢敏杰
- 关键词：OLOMOUCINE脑缺血
- 戊四氮致痫大鼠皮质和海马内GFAP、cyclin D1及脑和脑脊液17β-雌二醇和孕酮浓度变化被引量：7
- 2005年
- 目的研究癫痫发作后脑和脑脊液中17β-雌二醇和孕酮含量的变化。方法将雌性SD大鼠随机分为戊四氮(PTZ)致痫组和生理盐水对照组。(1)用免疫组织化学方法观察大鼠大脑皮质和海马星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量的变化;(2)用Western blot方法检测大鼠大脑皮质和海马细胞周期素D1(cyclin D1)表达的变化;(3)采用放免法测定大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中17β-雌二醇和孕酮含量的变化。结果免疫组织化学染色结果显示癫痫发作4h后在海马CA3区、CA1区和皮质内GFAP免疫反应明显增强(P<0.05);Western blot结果显示癫痫发作2h后cyclin D1的表达在皮质和海马均较对照组明显增强(P<0.05);放射免疫分析结果显示,癫痫发作后,皮质、海马和脑脊液的17β-雌二醇的浓度有不同程度增高,致痫8h后恢复正常,孕酮的浓度在皮质和脑脊液则呈下降趋势。结论戊四氮致痫时皮质及海马内星形胶质细胞激活、增殖,内源性雌激素合成增多,同时孕酮浓度降低,说明雌性激素在癫痫的形成和维持中发挥作用。
- 谭政朱长庚刘庆莹王伟
- 关键词：胶质原纤维酸性蛋白细胞周期素D117Β-雌二醇
- 大鼠脊髓星形胶质细胞培养方法的改良
- 2009年
- 目的：改进大鼠脊髓星形胶质细胞的体外培养方法，为研究脊髓星形胶质细胞的生物学作用及脊髓相关疾病提供实验模型。方法：新生1～2d的SD乳鼠，无菌操作下游离整段脊柱，将脊髓从椎管中冲出，机械吹打制成单细胞悬液，差速黏附处理以去除成纤维细胞成分。利用GFAP免疫荧光显色对培养细胞进行鉴定。结果：经原代和传代培养，获得的星形胶质细胞纯化率高达99％以上。结论：采用本实验室改进的方法，操作简便快捷，培养的大鼠脊髓星形胶质细胞生长良好，纯度高，为后续实验对脊髓星形胶质细胞的生物学作用研究奠定实验基础。
- 詹燕渠文生田代实王伟
- 关键词：脊髓星形胶质细胞细胞培养
