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一种特异性检测哈茨木霉的荧光定量PCR检测方法: 本发明公开了一种基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术特异性检测哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的检测方法，主要内容为提取待测样本中微生物总DNA，通过全基因组比对筛选出可用于特异性引物设...; 于海博杨闻翰梅宝贵王婉秋张嘉月张丹郭丹李乐瑶魏钗

11种致牛腹泻病原的一步法多重PCR/RT-PCR检测方法的建立被引量：1: 2025年; 【背景】单病原或多病原混合感染导致的牛腹泻综合征严重制约养牛业发展,病原快速准确诊断是防控该病的重要前提。【目的】建立11种致牛腹泻的细菌或病毒的一步法多重PCR/RT-PCR检测方法,实现快速诊断病原。【方法】通过文献检索调查了引起牛腹泻病的主要病原及其高覆盖率的引物,选择以产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)α-toxin、肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)inv A、大肠杆菌(Escherichia coli)K99、牛肠道病毒(bovine enterovirus,BEV)5′-UTR、牛星状病毒(bovine astrovirus,BAstV)ORF1a、牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRoV)VP6、牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKoV)D4、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)ORF1、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)N、牛环曲病毒(bovine torovirus,BToV)N、牛病毒性腹泻黏膜病病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)5′-UTR为靶标序列的引物,通过温度梯度PCR及单一控制变量法优化退火温度、引物浓度、循环数,建立11种病原的多重PCR/RT-PCR检测方法,对该方法进行特异性、灵敏度和重复性评价,并应用该方法进行临床样品检测。【结果】最佳退火温度为54.4℃,C.perfringens、S.enterica、E.coli、BEV、BAstV、BRoV、BKoV、BNoV、BCoV、BToV和BVDV对应基因片段最优引物浓度分别为0.20、0.25、0.25、0.20、0.25、0.25、0.35、0.50、0.25、0.25、0.30μmol/L,最优循环数为35个循环。该方法特异性强,仅对靶标病原检测为阳性,对溶血性曼氏杆菌(Mansiella haemolyticus)、化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、牛支原体(Mycoplasma bovine)分离株等病原检测均为阴性;敏感性高,对重组质粒标准品最低检出限依次为7.5×10^(3)、7.5×10^(4)、7.5×10^(3)、7.5×10^(1)、7.5×10^(4)、7.5×10^(2)、7.5×10^(3)、7.5×10^(2)、7.5×10^(2)、7.5×10^(4)、7.5×10^(3)copies/μL;重复性好,批间与批内试验均一致。用该方法检测江苏地区临床样品490份,结果显示,BEV、BAstV、BRoV、BKoV、B; 金美君胡云皓辛凌翔刘燕潘瑶王秀丽赵浩然汤承陈曦李锦铨朱良全; 关键词：腹泻多重PCR RT-PCR

PCR检测方法及设备、定量PCR仪器、电子设备: 本申请涉及分子生物领域，公开了一种PCR检测方法、PCR检测设备、定量PCR仪器、电子设备及计算机可读存储介质。其中，PCR检测方法包括：响应于接收到温控设备的检测指令，对各个温控设备分别进行PCR检测；在检测过程中，响...; 陈琦陈强许存存康厚杰

针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光PCR检测方法: 本发明提供针对非结核分枝杆菌检测与鉴定的实时荧光PCR检测方法，涉及生物检测的技术领域，包括以下操作步骤：S1：提取待测样品的DNA：S2：第一次PCR扩增：设计引物：以分枝杆菌的16S rRNA基因3’端和23S rR...; 陈建波

禽痘病毒的实时荧光PCR检测方法及检测用引物: 本发明公开了禽痘病毒的实时荧光PCR检测方法及检测用引物，该检测方法，呈良好的线性关系；相较于常规PCR，荧光定量PCR检测灵敏性可提高100倍，最低可达检测出的最低病毒含量为每毫升9.75个TCID<SUB>50</S...; 叶伟成朱寅初陈柳华炯钢倪征云涛张存霍苏馨付媛

一种基因编辑高GABA番茄的荧光PCR及数字PCR检测方法: 一种基因编辑高GABA番茄的荧光PCR及数字PCR检测方法，本发明涉及一种基因编辑高GABA番茄的检测方法。本发明解决了现有基因编辑作物无检测方法的问题。本发明基因编辑高GABA番茄的荧光PCR以及数字PCR检测方法是利...; 甄珍

小麦叶疫病菌实时荧光PCR检测方法的建立: 2025年; 为了快速准确地鉴定小麦叶疫病菌(Alternaria triticina),根据小麦叶疫病菌基因组序列中保守区域设计特异引物AT-F6/AT-R5和探针AT-P5,建立小麦叶疫病菌实时荧光PCR检测方法。引物AT-F6/AT-R5和探针AT-P5能特异性地扩增阳性小麦叶疫病菌DNA,其他供试菌株均不能扩增。建立的实时荧光PCR检测方法检测灵敏度可达600 fg菌体DNA。该方法可以有效快速地对小麦叶疫病菌进行检测,为口岸进境麦类产品中病菌检测和疫情监测提供技术支撑。; 许然牟桂萍龚静如胡加谊段维军曾杨森易建平; 关键词：实时荧光PCR

一种布鲁氏菌菌株的多重荧光定量PCR检测方法: 本发明涉及一种布鲁氏菌菌株的多重荧光定量PCR检测方法，属于菌株检测技术领域，包括以下步骤：S1、根据布鲁氏菌的特异性基因序列，设计多对特异性引物和荧光标记探针；S2、制备PCR扩增反应体系，并以待测样品的DNA为模板，...; 刘锴孟清刘磊鲁帆王占军鲁仁杰

一种环境DNA福寿螺属PCR检测方法及其应用: 本发明公开了一种环境DNA福寿螺属PCR检测方法及其应用，本发明检测环境DNA福寿螺属的方法，在水体中的检出限低至0.4copies/μL，仅对目标物种福寿螺属成功扩增，对于近源物种(如中华圆田螺等)无法扩增，具有较高的...; 刘燕山李大命唐晟凯钟立强谷先坤杨志强代培孙晶莹孟遥

发热伴血小板减少综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用: 2025年; 目的建立一种基于Taqman探针的高灵敏度一步法实时荧光定量RT-PCR方法,用于检测发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)。方法靶向发热伴血小板减少综合征病毒基因组S片段保守区域设计引物和Taqman探针建立实时荧光定量RT-PCR方法。评价方法的灵敏度、特异性和重复性,并应用临床样本进行应用评价。结果该方法最低检测限为100拷贝/ml,其灵敏度为普通RT-PCR的1000倍。在线性范围内,循环阈值(Ct值)与病毒RNA标准品之间表现出较强的线性相关性(R 2>0.999)。批内和批间重复性的变异系数均小于1.0%。该方法还具有高度特异性,不与其他病毒核酸交叉反应。应用发热伴血小板减少综合征确诊患者和健康志愿者血清样本对该方法进行了评估,结果显示,该方法检测灵敏度和特异度均为100.0%。此外,用该方法对288例疑似SFTSV感染患者的样本进行检测,有14.9%的患者感染了SFTSV。该方法速度较快,包括核酸提取步骤在内仅需2 h。结论本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可作为SFTSV感染早期诊断的可靠方法。; 李鹏飞李全李梦兰吴玲李志锋; 关键词：实时荧光定量RT-PCR 特异性检测限

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