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Ⅰ型 人类免疫缺陷病毒 潜伏激活剂的研究进展 被引量：1 2023年 I DS)是由人类免疫缺陷病毒 (HI V)引起的获得性机体免疫 缺陷 综合征。高效抗反转录病毒 治疗是目前治疗AI DS患者最有效的方法,其虽可降低病人体内病毒 载量,但却不能彻底清除病毒 。2012年“shock and ki ll”治疗策略被提出,该策略利用HI V潜伏激活剂(LRA)激活潜伏在CD4+T细胞内的HI V-1使其暴露,随后通过增强免疫 系统或采用抗病毒 药物消灭携带有病毒 的宿主细胞,从而逐渐清除病毒 潜伏库,最终实现艾滋病的功能性治愈。HI V-1潜伏机制主要有5种:表观遗传学调控、转录因子对基因的调控、免疫 信号通路的调节、前病毒 基因整合位点的影响和微RNA的影响。基于HI V-1的潜伏机制,目前有潜力作为LRA的药物主要包括表观遗传修饰剂、转录因子调节剂和免疫 激活剂等。本文对以上几类药物的作用机制、代表性药物以及研究进展进行综述,以期为LRA研发提供思路。关键词：艾滋病 一种检测1型 人类免疫缺陷病毒 的方法及其专用成套试剂 型 人类免疫缺陷病毒 的方法及其专用成套试剂。成套试剂包括引物对HI V‑1和探针HI V‑1；引物对HI V‑1由引物HI V‑F和引物HI V‑R组成；引物对HI V‑1在HI V‑1基因组中的靶序列含有特异RN...Ⅰ型 人类免疫缺陷病毒 tat基因重组慢病毒 表达载体的构建 2017年 人类免疫缺陷病毒 1型 (HI V-1)tat基因重组慢病毒 表达载体。方法将pCDH-GFP和pCDHRFP载体分别用EcoRⅠ和Hi ndⅢ双酶切制备线性化载体;通过设计引物及PCR扩增,获得5′端与3′端分别与15nt线性化载体3′端与5′端互补的tat基因片段;tat基因片段和线性化载体经纯化后,进行重组反应;将重组产物转化感受态细胞DH5α,通过菌落PCR、质粒双酶切、序列测定等方法鉴定重组克隆。结果菌落PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,在约354bp位置出现预期的条带;EcoRⅠ和Hi ndⅢ双酶切重组质粒经琼脂糖凝胶电泳,在约7544bp和354bp位置上出现预期条带;通过测序,重组质粒中插入的tat基因序列与GenBank基因库中的HI V-1tat基因序列同源。结论采用本研究方法能成功构建HI V-1tat基因重组慢病毒 表达载体。关键词：人免疫缺陷病毒1型 TAT基因 一种检测1型 人类免疫缺陷病毒 的方法及其专用成套试剂 型 人类免疫缺陷病毒 的方法及其专用成套试剂。成套试剂包括引物对HI V‑1和探针HI V‑1；引物对HI V‑1由引物HI V‑F和引物HI V‑R组成；引物对HI V‑1在HI V‑1基因组中的靶序列含有特异RN...Ⅰ型 人类免疫缺陷病毒 包膜gp120与乙型 肝炎病毒 表面抗原免疫 原性比较 被引量：1 2016年 型 人类免疫缺陷病毒 （HI V-1）及乙型 肝炎病毒 （HBV）包膜蛋白初次免疫 及加强免疫 后诱导产生抗体的规律,为提高HI V-1包膜蛋白诱导保护性抗体产生能力提供创新思路.方法 以10周龄雌性C57BL/6小鼠为动物模型 ,分别用HI V-1 06044毒株gp120三聚体（gp120T）、HBV表面抗原（HBsAg）蛋白与AddaVax佐剂免疫 小鼠,背部皮下注射,共免疫 3次,每次免疫 间隔3周,第一、第二次免疫 后7d和第三次免疫 后3d、7d取血;第一次免疫 后7d、第三次免疫 后3d、7d取脾组织.用酶联免疫 吸附实验（ELI SA）及酶联免疫 斑点实验（ELI Spot）方法检测免疫 小鼠血浆特异性结合抗体滴度及抗体分泌细胞（ASC）数量.结果 gp120T和HBsAg两种蛋白初次免疫 后,动物均未产生明显的特异性抗体.两种蛋白加强免疫 后特异性抗体水平明显升高,gp120T一次加强免疫 及两次加强特异性抗体滴度逐渐升高,而HBsAg一次加强抗体滴度已经接近两次加强的水平.二次加强免疫 后,gp120T和HBsAg免疫 鼠脾脏特异性ASC数量差异不显著.结论 HI V-1包膜gp120T加强免疫 诱导抗体水平达到高峰慢于HBsAg加强免疫 ,即加强免疫 后gp120T诱导的回忆反应慢于HBsAg.关键词：GP120 乙型肝炎病毒 表面抗原 1型 人类免疫缺陷病毒 体外复制、检测系统的建立及评价 2016年 型 人类免疫缺陷病毒 (HI V-1)体外复制和检测系统(JLTRG/H9细胞混合培养体系),并初步应用于抗HI V-1有效药物筛选。方法 JLTRG细胞与H9细胞按不同比例混合培养后,通过流式细胞技术分别于24、48、72、96 h观察和检测JLTRG细胞增强绿色荧光蛋白(EGFP)的表达来评估JLTRG细胞感染程度,并以此确定最优感染体系。然后以此最优体系来筛选抗HI V-1有效药物。结果(1)在JLTRG/H9细胞混合培养体系中,JLTRG与H9细胞混合培养比例为10:1时,JLTRG细胞EGFP表达量在各个时间点均为最高。(2)在JLTRG/H9细胞混合培养体系(JLTRG与H9细胞数比值10:1)中,T-20能有效抑制JLTRG细胞EGFP的表达,并且呈现剂量依赖性。结论 JLTRG/H9细胞混合培养体系(JLTRG与H9细胞数比值10:1)适用于HI V-1药物筛选。关键词：获得性免疫缺陷综合征 HIV-1 凝血酶增强Ⅰ型 人类免疫缺陷病毒 -1原代分离株侵入靶细胞能力作用研究 2014年 型 人类免疫缺陷病毒 （HI V）-1包膜V3区冠部序列不同的毒株介导的细胞融合的影响及其原因.方法 采用携带HI V-1 ADA、06057c3、03009c34株env基因的表达质粒pSVⅢ-ADA、pSM-06057c3、pSM-03009c34与pcTat分别按2∶1的比例共转染293T细胞,制备Env-293T细胞,用不同浓度的Th处理,与Magi c5A细胞进行融合实验,计融合细胞数,观察对融合作用的影响.结果 Th能增强ADA和06057c3Env介导的融合,它们的V3冠部的序列为GPGRAF,但不能增强V3冠部序列为GPGQAW的毒株03009c34 Env介导的融合.结论 Th能促进HI V介导的细胞融合,其原因可能是依赖V3冠部GPGRAF序列.关键词：凝血酶 重组分泌型 人类免疫缺陷病毒 Tat蛋白在真核细胞中的表达及活性检测 2014年 人类免疫缺陷病毒 病毒 tat基因的重组分泌型 真核表达载体并在真核细胞中表达,检测表达的重组蛋白活性。方法聚合酶链反应(PCR)从重组质粒pcDNA3.1(+)/Tat中扩增tat基因,利用Hi ndⅢ和BamHⅠ酶切位点分别将tat基因正向、反向插入分泌型 载体pSecTag,获得正向插入克隆(pSecTat)和反向插入克隆(pSecTat-AS),经双酶切鉴定连接成功后,利用测序鉴定其序列和插入方向。将构建的重组质粒转染293细胞,利用Western blot法检测Tat蛋白的表达。进而将重组质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞,CAT-酶联免疫 吸附试验(ELI SA)检测其细胞内CAT表达,从而检测Tat蛋白的活性。最后将转染重组质粒的293细胞与转染LTR-CAT报告质粒的BCBL-1细胞用Transwell培养系统共培养,CAT-ELI SA检测分泌型 Tat蛋白的旁分泌调控活性。结果 PCR扩增产物在10g/L琼脂糖凝胶上约300bp位置出现条带,与预期的324bp大小相符;经Hi ndⅢ和BamHⅠ分别酶切鉴定,获得2个正向克隆;正向克隆经测序,克隆的tat基因序列与GenBank中登记的HI V-1tat基因100%同源。正向克隆质粒转染293细胞后,Western blot法检测观察到约19×103蛋白条带。正向克隆质粒与LTR-CAT报告质粒共转染293细胞和BCBL-1细胞CAT表达量高于反向克隆质粒转染细胞(P<0.05)。与反向克隆对照相比,与正向克隆转染的293细胞共培养的BCBL-1细胞CAT表达量更高(P<0.05)。结论成功构建HI V-1tat基因基因分泌型 真核表达载体,该载体不但可在真核细胞内表达具有调控活性的Tat蛋白,表达的Tat蛋白还可分泌至细胞外并具有调控活性。关键词：TAT基因 棉酚氨基酸衍生物抗I 型 人类免疫缺陷病毒 活性与机制的研究 人类免疫缺陷病毒 斗争的这三十年中,人类 为预防和治疗艾滋病所作的努力主要有三个方面,抗HI V药物和疫苗的研发以及AI DS的基因治疗。尽管人们对HI V-1疫苗的研发投入了很多,但是HI V-1序列的多样性和相对不易接近到E...关键词：人类免疫缺陷病毒 获得性免疫缺陷综合症 融合抑制剂 GP41 I 型 人类免疫缺陷病毒 包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点突变对感染细胞能力的影响被引量：2 2012年 I 型 人类免疫缺陷病毒 （HI V-1）包膜糖蛋白120V4区氨基酸位点发生突变对CCR5及CXCR4嗜性毒株感染靶细胞能力的影响。方法根据ADA株为CCR5嗜性毒株，只具有感染CCR5细胞的能力；HXB2株为CXCR4嗜性毒株，只具有感染CXCR4细胞的能力，通过重叠延伸剪接的方法，构建CCR5嗜性及CXCR4嗜性毒株V4区丙氨酸替换突变体。将突变体表达载体与带有荧光报告基因的HI V骨架基因表达载体共同转染真核细胞，制备假病毒 颗粒。采用酶联免疫 吸附（ELI SA）法检测假病毒 中HI V-1P24抗原，对假病毒 进行定量。将假病毒 按20、40ng感染U87．CD4.CCR5和U87．CD4．CXCR4细胞，以野生株ADA和HXB2毒株为对照，通过荧光素酶（RLU）测定，检测HI V-1V4区氨基酸386—417位点各突变体假病毒 对细胞的感染能力。结果成功构建HI V-1ADA和HXB2株V4区丙氨酸替换突变体，各获得10株突变体。在ADA株和HXB2株，389—391及414—417位点均发生丙氨酸替换突变体，无论是用20ng，还是40ng假病毒 感染，对CCR5及CXCR4细胞的感染能力均完全丧失[（0±0）％]；在ADA株，400-403和408--410位点发生丙氨酸替换突变体，当假病毒 在20ng时，感染细胞的能力达到了（124±35）％和（182±29）％；在40ng时，感染能力达到了（127±8）％和（134±16）％；在HXB2株，395—397位点发生丙氨酸替换突变体，当假病毒 在20ng时，感染能力达到了（144±42）％；在40ng时，感染能力达到了（121±18）％；两株在其他位点发生丙氨酸替换突变体，但仅保留部分感染细胞能力（15％-84％）。结论HI V—1包膜糖蛋白V4区389—391及414—417位点氨基酸发生丙氨酸突变．使病毒 完全丧失感染靶细胞能力。关键词：I型人类免疫缺陷病毒 包膜糖蛋白 点突变
