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一株羊源A荚膜的分子生物学诊断
2025年
为查明河南省邓州市某羊场病死羊病因,尽快控制病情,采集病羊肝脏、肺脏和脾脏等器官组织样本进行细16S rDNAPCR扩增测序,并利用MEGA7.0软件构建系统进化树,PCR鉴定毒素基因分。结果表明,在病料中分离鉴定出一株分离;对该分离株进行16S rDNA基因扩增,得到1400 bp阳性条带,与荚膜核苷酸同源性均在99.6%以上,进行核苷酸同源性比对,与荚膜参考株相似性在99.6%以上,表明为荚膜;PCR毒素基因分得到324 bp阳性条带,符合α毒素基因特征,证实其为A荚膜,命名为DENGZHOU202409;构建遗传进化树进行分析,发现DENGZHOU202409株与上海人源218002-301、印度豹源ATCC 13124处于同一小分支,亲缘关系较近。综上所述,DENGZHOU202409分离株为此次羊群感染致病的病原,为A荚膜
王奎
关键词:产气荚膜梭菌
鹅源A荚膜对鹅的致病性试验
2025年
为了解鹅源A荚膜(Clostridium perfringens,Cp)对鹅的致病性,研究通过鸡胚致病性试验、不同感染途径攻毒试验筛选毒力较强的株及适合感染途径,对35日龄雏鹅进行人工致病试验,通过评估临床症状、体重变化、肠道表征评分、组织病理学变化、肠道绒毛高度及隐窝深度等研究其对鹅的致病性。结果显示:Cp-07株对鸡胚的致病性较强,鸡胚半数致死量(ELD_(50))为10^(-8.75)/0.2 mL;灌服Cp-07株可对雏鹅致死,肠道能分离到Cp,而皮下注射和静脉注射仅在第6天肠道分离到Cp;感染组雏鹅表现出精神沉郁、拉血便等症状,从第3天开始感染组体重低于对照组,肠道出现明显的肠壁变薄、出血,肠黏膜脱落并出现坏死灶,肠道表征评分高达4分;感染组肠绒毛脱落、断裂,大量红细胞、炎性细胞浸润,十二指肠及回肠固有形态消失,小肠绒毛高度不同程度下降,隐窝深度增加。研究表明,试验筛选出1株高毒力Cp,适合接种途径为灌服,单独感染Cp可引起鹅肠道损伤。
张美琳杨智灿刘佳琪苏文楠李宛珈朱婉君陈济铛张济培
关键词:产气荚膜梭菌坏死性肠炎肠道
1株羊源D荚膜的分离鉴定及耐药性分析
2025年
【目的】D荚膜是一种革兰阳性厌氧,可引起山羊、绵羊和牛等动物发生肠毒血症,对反刍动物的健康造成巨大的影响。本研究旨在了解内蒙古乌审旗地区D荚膜耐药情况,为该地区由D荚膜引起的疾病的治疗提供科学依据。【方法】通过培养特性及革兰染色镜检对分离进行初步鉴定,通过16S rRNA基因序列比对和毒素基因PCR扩增对可疑株进一步鉴定,并采用K-B纸片法进行药敏试验,PCR检测分离耐药基因。【结果】分离在TSC培养基中长出黑色的圆形落,革兰染色镜检可见体粗短,成单个或双个排列的革兰阳性直杆,形态学及镜检结果符合荚膜特点。16S rRNA基因序列比对结果显示,分离与NCBI数据库中已公布的荚膜16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该株为荚膜。毒素基因PCR检测扩增出cpa和etx基因,表明该株为D荚膜。药敏试验结果显示,分离对头孢曲松、头孢呋新、庆大霉素等16种抗药耐药。耐药基因检测结果显示,分离检出bla CTX-M、bla SHV、qnrA和aac(6′)-Ⅰb-cr 4种耐药基因,未检出bla TEM和qnrS 2种耐药基因。【结论】本试验成功从绵羊体内分离出1株D荚膜,该株存在多重耐药,该研究结果为D荚膜感染绵羊的诊断、流行病学调查和治疗提供了参考依据。
李娜刘重阳张靖靖玛丽雅其其格珠娜陆斌海鹰
关键词:绵羊D型产气荚膜梭菌耐药性
一种A荚膜间接血凝检测方法的建立及其应用
本发明涉及兽用生物制品检验技术领域,尤其涉及一种A荚膜间接血凝检测方法的建立及其应用。本发明采用A荚膜外毒素溶液作为免疫原,以A荚膜外毒素抗原最小致死量为依据,通过筛选间接血凝试验中抗原最佳...
王婷韩四娥李化生金鹰郝颖杨富贵史文瑞王岩张娜刘丽春
针对A荚膜的噬体及其应用
本发明涉及生物技术领域,具体涉及针对A荚膜的噬体及其应用。本发明提供的一株荚膜体专性裂解引起乳猪腹泻的肠毒素荚膜,且噬体基因组不含耐药基因、抗性基因、整合酶基因,具有安全、效价高、稳定...
牛旻杨瑞华鲁璐程帅吴艳琴
一株C荚膜的分离与鉴定被引量:1
2024年
荚膜是一种重要的人畜共患病原,在一定条件下可引起多种严重疾病。从疑似山羊魏氏病例中分离到一株细,通过厌氧培养、显微镜镜检、分子生物学鉴定表明该分离荚膜,使用药敏纸片法进行分离株药敏性试验研究,数据分析表明:分离对常见抗生素具有不同程度的耐药性,对头孢噻呋敏感性最高,对多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素等耐药,以期为山羊健康养殖提供技术参考。
宋锋刘赛荣榕
关键词:产气荚膜梭菌药敏试验疫病防控
A荚膜Fba重组干酪乳杆的构建与表达
2024年
为了构建重组乳酸,以A荚膜全基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增出Fba基因并将其连接到大肠杆表达载体pET-28a上,鉴定正确后,用1.0 mmol·L-1 IPTG诱导表达,最佳诱导表达时间为5 h。表达的目的蛋白纯化后与弗氏佐剂乳化制备抗血清,Western blot分析表明,目的蛋白能与制备的抗血清特异结合,具有很好的反应原性。将正确的Fba基因与pLA乳酸载体构建成重组质粒并电转至干酪乳杆中,Western blot结果显示,重组的干酪乳杆表达的蛋白与抗血清具有良好的反应原性。间接免疫荧光、流式细胞仪检测结果表明,目的蛋白能够展示表达到体表面。
杨启尧范佳霖秦达曲艺王嘉彬余丽芸史同瑞侯喜林
关键词:A型产气荚膜梭菌干酪乳杆菌
绵羊大肠杆与A荚膜混合感染的病原分离鉴定
2024年
试验旨在对宁夏一绵羊场疑似大肠杆与A荚膜混合感染的死亡病例进行确诊并提出相应的防治方案。采用荚膜显色培养基及伊红美蓝固体培养基进行病原分离培养,对分离株进行16S rRNA基因序列PCR检测,依据16S rRNA序列构建分离株分子进化树;之后对大肠杆分离株毒素因子进行PCR检测,对荚膜分离株进行毒素分鉴定。结果显示,分离株PCR检测获得了16S rRNA特异性条带;分子进化树结果显示,大肠杆分离株NXDC001与大肠杆在同一分支,荚膜分离株NXSJ001与荚膜在同一分支。大肠杆分离株检测出毒素因子HPI(irp2)及LEE(eae);荚膜分离株携带毒素因子cpa,证明分离株为A荚膜。研究表明,试验成功分离鉴定大肠杆及A荚膜各一株,证明病死羊为大肠杆及A荚膜混合感染。
王玲玲王景松王健霖王玮陈灿宋前进郭亚男李继东
关键词:大肠杆菌A型产气荚膜梭菌绵羊
1株兔源A荚膜毒力和免疫原性测定
2024年
在兔场中发现一只疑似感染了荚膜病兔,从该兔的病理组织中分离到1株兔源荚膜,对分离株进行血清学分。毒力以及免疫原性检测。结果表明:该分离株血清为A,该分离株肉肝胃酶消化汤培养液的无毒素对小鼠和家兔均有毒力、对小白鼠的最小致死量为0.05 m L/只,对家兔的最小致死量为1.5 m L/只。按《中华人民共和国兽用生物制品规程》(以下简《规程》)方法制备疫苗进行效力检验,免疫保护率不低于80%。
贾华强
关键词:产气荚膜梭菌毒力免疫原性
苦参碱对A荚膜致小鼠肠炎的预防和治疗效果被引量:2
2024年
为研究苦参碱对A荚膜致小鼠肠炎的预防和治疗效果,本实验将56只8周龄的健康雄性昆明小鼠均分为对照组、液组、治疗组和预防组。液组小鼠以0.2 mL/只灌胃A荚膜(1×10~9cfu/mL)16 d,治疗组小鼠于灌胃A荚膜7 d后灌服苦参碱(30 mg/kg)9 d,预防组小鼠则以A荚膜液和苦参碱同时灌胃16 d,对照组小鼠则每日每只灌服PBS 0.2 mL至16 d。对各组小鼠称重采血后剖杀、收集回肠组织制备病理切片观察组织病变,并分离血清,利用ELISA试剂盒对血清中的炎性细胞因子进行检测,采集肠内容物,经PCR检测后灰度分析A荚膜的数量,采用ELISA试剂盒测定α毒素含量。结果显示治疗组和预防组小鼠的体质量明显增加;液组小鼠肠道小肠绒毛脱落,淋巴细胞和红细胞的数量增加,而预防组和治疗组的肠道炎性细胞浸润减少,肠绒毛结构逐渐恢复,炎症引起的肠组织损伤得以修复。ELISA检测结果显示,预防组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、MAPK8的含量与对照组之间无显著性差异(P>0.05);治疗组小鼠血清中IL-6和MAPK8含量显著高于对照组(P<0.05)。PCR检测后灰度分析结果显示,治疗组和预防组小鼠肠内容物A荚膜的数量与液组无显著差异(P>0.05),但与对照组比较,上述两组小鼠释放的A荚膜α毒素含量明显降低。上述结果表明苦参碱可抑制A荚膜释放ɑ-毒素,并可恢复小鼠回肠黏膜免疫屏障,降低荚膜所引起小鼠的肠道炎症。本研究为苦参碱应用于A荚膜所致肠炎的治疗和预防提供参考依据。
李慧李晓林秦颖孟妮佳吴晨晨刘文君薛虹
关键词:苦参碱A型产气荚膜梭菌小鼠体外抑制