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消减杂交结合限制性显示技术筛选精子中特异表达的基因片断
建立/寻找一种简便、快速、特异的筛选精子中特异表达基因片断的方法.方法:收集并提取健康成年男的精子总RNA,高压超流路凝胶电泳进行质量检定后,利用自行建立的消减方法进行消减杂交,结合限制性显示技术,分组扩增差异cDNA...
毛向明冯春琼宋艳斌
关键词:SPERM
应用限制性显示技术筛选K562细胞脱核前后差异表达基因被引量:2
2006年
目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制。方法用CB(终浓度为10 μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、筛选CB处理前后差异表达的基因。对筛选出的差异表达基因进行克隆、测序,在GenBank检索进行序列同源分析。结果筛选及克隆了7个差异表达基因,其中水通道蛋白1(AQP1)基因经反转录PCR验证在CB诱导脱核的 K562细胞中表达上调。结论 AQP 1基因在CB诱导K562细胞脱核过程中特异高表达,提示其可能与细胞脱核及增殖抑制密切相关。
危敏马文丽宋艳斌毛向明李凌郑文岭
关键词:K562细胞细胞松弛素B水通道蛋白1
消减杂交技术结合限制性显示技术制备K562细胞特异基因探针
2005年
建立一种简便、快速、特异的制备基因芯片探针的方法.以K 562细胞和正常人淋巴细胞作为消减对象,利用自行建立的消减方法进行消减杂交,结合限制性显示技术,分组扩增差异cD N A,回收K 562细胞特异基因片段,制作基因芯片探针.结果显示,分离到400个K 562特异的基因,片段大小均一,适于制作cD N A芯片.消减杂交技术结合限制性显示技术制备基因芯片探针,具有快速、简便、特异的特点,降低了芯片制作成本,可加速芯片的推广应用.
宋艳斌马文丽冯春琼石嵘毛向明张宝郑文岭
关键词:K562细胞消减杂交限制性显示技术基因探针
应用限制性显示技术制备HCVcDNA诊断基因芯片的初步研究被引量:5
2005年
制备丙型肝炎病毒 (HCV)检测芯片并进行验证、初步检测质量评价。采用限制性显示 (Restrictiondisplay ,RD)技术制备芯片探针 ,从载体pCV_J4L6S中切出HCV全长cDNA ,Sau3AⅠ酶消化 ,所得的限制性片段进行RD_PCR扩增 ,经聚丙烯酰胺电泳 (PAGE)结合银染法进行分离。切胶回收后作 3次PCR ,得到较纯净的HCVcDNA限制性片段。扩增后的产物克隆至pMD18_T载体进行快速鉴定。将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片进行杂交验证分析 ,对芯片检测进行优化、初步的质量评估。运用RD技术 ,得到 2 4个 2 0 0~ 80 0bp、大小均一的基因片段 ,序列分析表明 ,均属于HCV特异基因 ,可以作为诊断芯片探针 ;杂交、测序结果显示 ,芯片检测的敏感、特异、准确度、重复、线等指标均佳。利用RD技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法 ;制备的诊断芯片可以用于检测HCVRNA ,具有敏感、检测结果较为可靠的优点。
孙朝晖郑文岭彭翼飞张宝马文丽
关键词:丙型肝炎病毒分子探针基因芯片杂交
应用Agilent 2100 Bioanalyzer分析限制性显示技术制备的HIV片段库被引量:1
2005年
使用Agilent 2 10 0Bioanalyzer分析限制性显示技术 (restrictiondisplay ,RD)制备的HIV片段库 .利用合适的限制酶从质粒上获得HIVB亚型代表株U2 6 94 2全基因cDNA ,然后将目的片段进行Sau3AⅠ消化 ,在消化得到的片段两端加接头 ,利用通用引物进行PCR扩增 ,扩增结果通过琼脂糖凝胶电泳以及Agilent 2 10 0Bioanalyzer两种方法分析 .结果显示 ,Agilent 2 10 0Bioanalyzer比琼脂糖凝胶电泳能更快速、直接和客观地反映RD技术制备的DNA片段的大小以及含量 ,并能对RD PCR过程中片段自身连接以及优势扩增的现象进行直接的监控作用 .
刘佳马文丽李凌郑文岭
关键词:限制性显示技术AGILENT
蛋白质多肽文库构建中限制性显示技术的接头设计
2005年
为了探讨限制性显示(RD)技术在构建蛋白质多肽文库中灵活的接头设计,分别根据原核表达载体pET22b以及酵母表达载体pNMT-TOPO设计了三套接头,三套接头依次增加一个碱基以保证与之连接的片段总有可能表达正确的开放阅读框.然后以HIV-1B亚型代表株U26942全基因质粒DNA为对象,利用RD技术分别建立了相应的蛋白质多肽文库.从每个库中各随机挑选12个克隆进行测序分析并进行蛋白质表达预测.结果从原核表达文库中获得了一个可以表达HIVPol多肽的克隆,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示该克隆在细菌BL21(DE3)中有较高的表达,蛋白质印迹为阳,与理论预测相符.这些结果提示,RD技术是一种建立基因组随机多肽文库的新方法,该方法灵活的接头设计可以满足不同的表达载体需求.
马文丽刘佳李凌张宝师永霞郑文岭
限制性显示技术在HIV随机多肽文库构建中的应用
随着人类基因组计划的完成,生命科学研究已进入了后基因组时代。以细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式为研究对象的蛋白质组学,是后基因组时代生命科学研究的核心内容之一。细胞内蛋白质间的相互作用、相互协调是进行一切代谢活动的基础...
刘佳
关键词:人免疫缺陷病毒基因组片段基因编码
限制性显示技术作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法的初步研究(英文)
2005年
目的初步研究限制性显示技术(RD-PCR)作为一种高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法对芯片杂交信号的影响。方法收集3个健康人外周血单核细胞,提取RNA后分为两组,采用RD-PCR进行样本双色(Cy3/Cy5)荧光标记,与3张Agilent60mer高密度(22K)人1B寡核苷酸芯片进行杂交。排除阴和阳对照信号值、Cy3和(或)Cy5的前景与背景间无统计显著差异点的信号值,进一步排除两种荧光标记间存在统计显著差异点的信号值,将3张芯片的共同信号值用于分析。SPSS软件进行常规统计分析和作图,R语言环境下的VSN统计包排除芯片间和两种不同荧光标记间的系统误差。结果3张芯片的8744个共同点用于本研究。芯片间及两种荧光标记间存在明显的可校正的系统误差。芯片间杂交信号值相关显著。RD-PCR样本标记方法对较低表达基因信号值较为敏感。结论初步的统计分析结果表明,RD-PCR是一种潜在的有用的高密度长链寡核苷酸芯片样本标记方法。
莫小阳马文丽李凌石嵘张宝徐秋林张海燕郑文岭
关键词:限制性显示技术
限制性显示技术在制备丙型肝炎病毒分型芯片探针的应用研究
2004年
目的 探讨限制性显示 (restrictiondisplay ,RD)技术在制备丙型肝炎病毒 (HCV )分型芯片探针的可行。方法 用限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV1a、1b、2a亚型全长cDNA ,所得的限制性内切酶片段与通用接头相连 ,通过10个选择引物进行分组PCR ,使得各片段得以扩增并分布于 10个亚组中 ,经聚丙烯酰胺电泳 (PAGE)结合银染法进行分离。切胶回收后作 3次PCR ,得到较纯净的HCVcDNA限制性片段。对这些片段做分子克隆 ,并测序鉴定。结果 由HCV 3个亚型 1a、2a、1b的全长cDNA得到 66个大小相对均一 ( 2 0 0~ 90 0bp)的限制性片段 ,平均每个亚型约 2 2个。测序结果表明 ,属于HCV基因 ,可以作为HCV分型芯片的探针。结论 RD技术能快速收集大量长度适宜、大小均一的病毒基因片段 ,适合于分型诊断基因芯片探针的收集。
孙朝晖郑文岭彭翼飞张宝马文丽
关键词:限制性显示技术丙型肝炎病毒基因芯片分子探针
限制性显示技术分离差异表达基因——Mac30被引量:4
2002年
冯春琼马文丽宋艳斌吴清华郭秋野祝骥张宝郑文岭
关键词:限制性显示技术差异表达基因白血病

相关作者

马文丽
作品数:550被引量:1,887H指数:20
供职机构:南方医科大学基础医学院
研究主题:基因芯片 K562细胞 基因表达谱 基因表达 限制性显示技术
郑文岭
作品数:511被引量:1,719H指数:18
供职机构:南方医科大学基础医学院基因工程研究所
研究主题:基因芯片 基因表达谱 K562细胞 基因表达 限制性显示技术
李凌
作品数:77被引量:334H指数:10
供职机构:南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室
研究主题:基因芯片 限制性显示技术 DNA芯片 寡核苷酸芯片 K562细胞
张宝
作品数:156被引量:423H指数:10
供职机构:南方医科大学
研究主题:基因芯片 限制性显示技术 K562细胞 CDNA文库 鼻咽癌
石嵘
作品数:84被引量:258H指数:9
供职机构:南方医科大学
研究主题:基因芯片 K562细胞 限制性显示技术 荧光标记 SARS冠状病毒