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乙酰辅酶A羧化酶的酶活测定方法、试剂盒与应用: 本发明涉及物质检测技术领域，具体公开了乙酰辅酶A羧化酶的酶活测定方法、试剂盒与应用。本发明提供了一种乙酰辅酶A羧化酶的酶活测定方法，其检测反应流程如下：<IMG width="1000" orientation="por...; 贾映彤罗惠方郑豪亮陈晨王芳马玉岭于艳红

一种体外苯丙氨酸羟化酶酶活测定方法: 本发明涉及体外苯丙氨酸羟化酶活力的测定方法，采用一种体外酶体系进行酶活力反应，酶体系包括：苯丙氨酸羟化酶，L‑色氨酸、MH4、硫酸铵、二硫苏糖醇、硫酸亚铁铵和过氧化氢酶，前处理时间短（约30min），反应在37℃水浴锅中...; 吴小梅孟杰陈虹彭毅

黄杆菌中浒苔多糖降解有关基因的异源表达及酶活测定: 2024年; 浒苔绿潮爆发带来了一系列环境问题,也对浒苔资源的开发利用提出了新挑战。从生物酶法降解浒苔的主要成分浒苔多糖入手,筛选出能降解浒苔多糖的菌株,对其进行16S rRNA基因鉴定,同时对其中表达量上调的木聚糖酶基因(GH43)进行异源表达,利用紫外-可见分光光度计比色法进行酶活测定及酶学性质研究。结果表明筛选到的浒苔多糖降解菌为黄杆菌(Algibacter pacificus),克隆表达的木聚糖酶的最适温度为50℃,最适pH约为5,粗酶液酶活为65.71 U/mL。实验可为由浒苔引起的海洋污染治理问题提供理论依据,同时为该菌株及木聚糖酶的工业化利用提供了参考,有利于实现对浒苔的资源化利用。; 徐展刘芳芳徐玉雯闫达中晁红军陈静; 关键词：黄杆菌木聚糖酶

一种GPI转酰胺酶的酶活测定方法: 本发明涉及一种GPI转酰胺酶的酶活测定方法。该方法是以丙氨酸‑苏氨酸‑赖氨酸‑天冬氨酸‑7‑氨基‑4‑甲基香豆素为底物，使用待测GPI转酰胺酶水解该底物，测定荧光强度，然后根据7‑氨基‑4‑甲基香豆素标准品的线性关系回归...; 卢丽丽段飞宇张敬文

一种用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒及酶活测定方法: 本发明涉及基因测序领域，具体地说，本发明涉及一种用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒及酶活测定方法。本发明的用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒，包括用于检测T4 DNA连接酶活性的反应底物原料，还包括T4 DNA连...; 卢润丰何文龙庄志华王春香

一种用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒及酶活测定方法: 本发明涉及基因测序领域，具体地说，本发明涉及一种用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒及酶活测定方法。本发明的用于T4 DNA连接酶的酶活检测试剂盒，包括用于检测T4 DNA连接酶活性的反应底物原料，还包括T4 DNA连...; 卢润丰何文龙庄志华王春香

限制性核酸内切酶Asc I蛋白质的表达纯化、酶活测定及小角散射结构解析: 2023年; 限制-修饰系统(RMS)是细菌为了防御外来DNA入侵而进化产生的一种保护机制。RMS系统可分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型。Asc I是一种Ⅱ型限制性核酸内切酶,能识别8-bp DNA基序。尽管Asc I已经被广泛应用于分子克隆研究中,然而目前尚无关于Asc I蛋白质的表达、纯化以及结构机制等方面的研究报道。本研究基于大肠杆菌重组表达体系建立了Asc I重组蛋白质的高效表达和纯化方法,从每升细菌培养物中可获得约2.5 mg纯度大于95%的Asc I蛋白质。进一步的酶学性质研究表明,Asc I酶切反应的最适温度是37℃,最适pH为7.5~8.5,反应依赖于Mg^(2+)和Mn^(2+)等二价金属离子。基于小角X射线散射(SAXS)分析技术,我们还建立了Asc I蛋白质及其与底物DNA复合物在溶液状态下的三维空间模型,并结合点突变对该模型进行了验证。总之,本研究对Asc I蛋白质的重组表达、纯化、酶活性质以及结构机制进行了比较系统地研究,为了解RMS系统的工作机制提供了结构基础,同时也为Asc I作为分子克隆工具酶的进一步开发和改造提供了理论依据。; 方倩倩陈浩廖馨源林忠辉; 关键词：限制性核酸内切酶表达纯化小角散射

一种葡萄糖脱氢酶酶活测定方法: 本发明公开了一种葡萄糖脱氢酶酶活测定方法，包括以下步骤：S1.在PMS反应溶液中加入待测的葡萄糖脱氢酶液，反应完成后立即加入酸调节溶液pH≤3.0终止葡萄糖脱氢酶反应，离心、去除上清液保留沉淀；S2.取DCIP检测溶液，...; 俞志豪景成宇

生菜查尔酮异构酶基因克隆及体外酶活测定: 2023年; 查尔酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是植物黄酮类化合物合成的关键限速酶之一。生菜(Lactuca sativa)是全球性的叶用蔬菜,含有丰富的黄酮类物质。本研究在生菜基因组中鉴定到一个编码查尔酮异构酶的基因LsCHI,该基因编码235 aa的蛋白质,具有典型的查尔酮异构酶活性残基位点。系统进化分析显示,LsCHI属于I型查尔酮异构酶。基因表达模式分析表明,LsCHI在生菜的地上部分表达量明显高于地下部分,且在花序中表达量最高。构建原核表达载体pET28a-LsCHI并诱导表达,纯化后获得LsCHI蛋白。体外酶活实验表明,LsCHI蛋白催化柚皮素查尔酮转化为柚皮素。本研究为进一步探讨查尔酮异构酶在生菜中的功能以及在黄酮类化合物生物合成中的作用提供一定基础。; 徐朝阳张苛苛王晨晨张彬刘雪唐金富周军刘敏李大勇; 关键词：生菜查尔酮异构酶黄酮类化合物

白芥子诱导的鸡内源性芥子碱降解菌的筛选、鉴定及酶活测定被引量：1: 2023年; 本试验旨在通过分离鉴定白芥子诱导的芥子碱降解菌,并对其核心功能酶漆酶进行酶活测定,建立芥子碱的生物降解方法,为探寻白芥子等十字花科类非粮饲料资源的高效利用提供技术支撑。本试验以藏香鸡为模型,在基础日粮中添加20%白芥子饲喂28 d进行芥子碱降解菌体内诱导。分别采集鸡空肠、回肠、盲肠内容物在不同培养基中分离筛选芥子碱降解菌,对筛选出的优势菌进行形态学和分子生物学鉴定,测定该菌株的芥子碱降解效果和漆酶活性。结果表明:(1)在鸡盲肠中筛选出9株目标菌,筛出率明显高于空肠和回肠,并进一步选出1株芥子碱降解优势菌SDB2(Sinapine-degrading bacteria 2)。(2)经鉴定,SDB2菌株属于变形菌门;γ-变形菌纲;肠杆菌目;肠杆菌科;大肠埃希菌。(3)芥子碱浓度与SDB2菌株培养时间存在极显著的线性回归关系(P <0.01),芥子碱浓度随培养时间增加而降低,培养72 h的芥子碱降解率可达50%。(4)漆酶活力与SDB2菌株培养时间存在极显著的线性回归关系(P <0.01),漆酶活力随培养时间增加而降低。(5)漆酶活力与芥子碱浓度存在极显著的线性回归关系(P <0.01),漆酶活力与芥子碱浓度呈正相关。综上,本试验条件下,筛选出的SDB2能利用自身分泌的漆酶有效降解芥子碱,为高效利用十字花科类非粮饲料资源奠定了基础。; 邓卉余丹范景胜屈东邹成义李斌殷勤郑钰嘉倪青松汪林书; 关键词：芥子碱漆酶白芥子

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