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CTM2-GFP转基因拟南芥构建及细胞定位研究
2024年
通过筛选突变体库发现的镉耐受突变体植株可能参与了植物Cd胁迫的调控。文章通过同源重组方法构建pART27-CTM2-GFP载体,并将pART27-CTM2-GFP重组质粒入农杆菌GV3101,采用浸花染法入野生型拟南芥植株;通过抗性筛选和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定获得CTM2-GFP转基因阳性植株,进行抗性分离鉴定获得纯合转基因植株;最后通过qPCR检测CTM2基因表达,筛选最佳的CTM2-GFP转基因株系;通过观察CTM2-GFP转基因植株中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的荧光发现CTM2为细胞膜定位蛋白。研究结果为深入研究CTM2基因在调控植物镉耐受分子机制中的作用提供了遗传材料支撑。
李亚平曹蕾郑朋朋樊婷婷
关键词:拟南芥植物表达载体转基因植株
过表达AtVIP1基因增强转基因拟南芥对铜胁迫的抗性
2024年
铜对植物生长至关重要,过量会导致生物量降低。AtVIP1属于拟南芥bZIP家族,具有淀粉积累、渗透信号传导和促进农杆菌化等作用。录因子VIP1在植物响应非生物胁迫方面已有研究报道,但与铜胁迫相关的研究还未见报道。为明确AtVIP1基因过表达植株在响应铜胁迫过程中的作用,向1/2 MS固体培养基中加入50μM的铜离子,观察AtVIP1基因过表达植株在胁迫后对种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:在铜胁迫下,AtVIP1基因过表达可减轻对种子萌发的抑制,缓解幼苗受到的伤害,提高SOD、POD和CAT等抗性酶的活性,减少MDA含量,降低细胞膜的通透性,增强拟南芥对铜胁迫的抗性。综上,研究结果为深入解析植物响应铜胁迫的分子调控网络提供一定的理论依据。
李学影李征杭赵阳王鑫李思琪黄荣臻徐海军戴凌燕
关键词:铜胁迫拟南芥过表达抗性
大豆GmCWIN3基因的克隆及转基因拟南芥株型鉴定
2024年
植物细胞壁化酶(CWIN,cell wall invertase)可以催化蔗糖水解为葡萄糖和果糖,在植物生长发育过程中具有重要作用。为探究GmCWINs在大豆株高、分枝数等株型发育过程中的功能,本研究克隆到1个该基因家族成员GmCWIN3,序列分析结果显示,GmCWIN3基因的CDS全长为1728 bp,其编码575个氨基酸。GmCWIN3蛋白二级结构中无规则卷曲结构占比最大,为48.17%;蛋白质三级结构显示该基因编码了一种细胞壁化酶。GmCWIN3基因启动子区具有多个光响应元件,同时也具有响应生长素、赤霉素及昼夜节律的顺式作用元件。进一步地分析生长素和赤霉素诱导下GmCWIN3的表达模式,发现GmCWIN3基因能在反应初期快速地响应两种激素的诱导。构建GmCWIN3基因的植物表达载体并完成其在拟南芥中的过表达,对转基因株系及野生型拟南芥的细胞壁化酶活性和蔗糖含量进行测定,结果表明转基因拟南芥中细胞壁化酶活性显著提高,且蔗糖含量显著降低。此外,对植株表型进行观察和统计,发现与野生型相比,过表达植株的株高和分枝数均显著增加。综上所述,本研究推测GmCWIN3基因可能通过调节体内蔗糖的水解,从而参与生长素及赤霉素介导的大豆株高及分枝数等性状的形成过程。本研究结果为进一步探究GmCWIN3基因调控大豆株型相关性状的分子机制研究奠定了基础。
牟可欣周芳雪冯雯蜜于哲周丽娟曾雨欣井妍李海燕
关键词:大豆激素诱导株型
大白菜孤基因转基因拟南芥株系的创制及其功能分析
张睿琦
激发子BAR11诱导转基因拟南芥类黄酮代谢及影响根际微生物的研究
植物在自然界中往往面临着复杂而严峻的生存环境,相比于物理和化学防治,生物防治能够为生产者提供一种环境友好、高效可持续的害虫和病害防治方法。其中由生防菌分泌的激发子能够通过诱导防御反应来增强植物免疫,减少植物病害发生。通过...
王瑜
关键词:激发子植物抗病性根际微生物类黄酮
基于转基因拟南芥抗黄萎病候选基因筛选与鉴定
棉花黄萎病是一种土传维管束病害,其致病菌大丽轮枝菌是一种半活体营养型真菌,具有强大的环境适应能力侵染棉花后会引起叶子枯黄、脱落;维管束的褐化对棉花的产量与纤维品质造成极其严重的影响。因此,解析棉花对黄萎病的免疫反应机制,...
陈泳泽
关键词:拟南芥大丽轮枝菌
盐穗木miR397a增强转基因拟南芥的低温耐性
2023年
盐穗木(Halostachys caspica)是耐盐性极强的苋科藜属盐生植物.miRNA是长度为21∼24 nt的内源性非编码小RNA,通常在录后水平负调控靶基因的表达介导多种生物学过程.从盐穗木高盐胁迫下根的小RNA文库和录组数据中,克隆盐穗木miR397a(HcmiR397a)前体序列和漆酶HcLACs(Laccase,LAC)为预测的靶基因.通过实验的方法鉴定HcmiR397a与HcLACs的靶向关系及HcmiR397a在多种非生物胁迫下的表达和HcmiR397a的转基因拟南芥在低温胁迫下的功能.研究结果表明:(1)烟草瞬时表达体系和5’RLM-RACE技术确定HcmiR397a与HcLAC17之间存在靶向切割,具体的切割位点位于HcmiR397a的第10∼11碱基处;(2)qRT-PCR检测的结果显示盐、干旱和低温胁迫下,盐穗木同化枝HcmiR397a受到显著诱导;(3)异源表达HcmiR397a的转基因拟南芥表现出较强的低温耐性.
魏冉张慧珍陈方圆赵丽娟李文辉曾幼玲
关键词:转基因拟南芥
白羊草BiMYB52基因的克隆及转基因拟南芥抗旱性表达分析被引量:6
2023年
白羊草(Bothriochloa ischaemum)是一种耐旱的优良乡土草种。为了探索白羊草录因子MYB的结构和功能,本研究以白羊草录组测序中筛选出的一段对干旱胁迫响应表达量变化显著的MYB序列为基础,采用基于拓扑异构酶快速克隆法从白羊草中克隆了一个R2R3-MYB基因BiMYB52,该基因编码237个氨基酸。为了深入研究BiMYB52基因的抗旱性,利用染色体步移技术扩增出了BiMYB52启动子序列,构建了pCAMBIA1301-BiMYB52过表达载体,采用农杆菌介导的花序侵染法对拟南芥(Arabidopsis thaliana)进行遗传化,然后对野生拟南芥转基因拟南芥进行干旱胁迫处理。结果表明,干旱胁迫复水后,转基因拟南芥的存活率显著高于野生拟南芥,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量是干旱胁迫后转基因拟南芥的显著低于对照,脯氨酸(Proline,Pro)含量则显著高于对照。由此推测BiMYB52基因可能增加了拟南芥对干旱胁迫的抵抗能力。这为白羊草抗旱育种提供候选基因和理论基础。
李春艳钟华杜利霞侯向阳
关键词:白羊草MYB转录因子干旱胁迫转基因
油茶CoBBX22基因负调控转基因拟南芥耐旱性被引量:3
2023年
BBX录因子在植物的生长发育及胁迫响应中起着重要的作用。本研究利用逆录PCR (RT-PCR)方法从油茶(Camellia oleifera)中克隆得到CoBBX22基因,其开放阅读框(ORF)为891 bp,编码296个氨基酸,预测蛋白分子质量为32 kDa,等电点为4.88,偏酸性。利用生物信息学软件对CoBBX22蛋白进行同源序列比对,发现其氨基酸序列含有两个B-box结构域。构建系统进化树分析发现该基因编码的蛋白与茶树(Camellia sinensis) CsBBX22处于同一分支,且氨基酸序列一致性高达96.96%。亚细胞定位结果显示其编码蛋白定位在细胞核中。进一步的研究发现,在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中过量表达Co BBX22基因可提高转基因植株对干旱的敏感性。综上所述, CoBBX22可能作为负调控因子参与拟南芥对干旱胁迫的响应。
刘亚男谢小燕吴杨朱智国叶思诚黄京京刘文鑫
关键词:油茶亚细胞定位
火龙果DREB1D基因的克隆及在转基因拟南芥中的功能分析被引量:2
2023年
【目的】DREB(dehydration responsive element binding)是一类脱水响应元件结合蛋白,在植物响应高温、干旱、高盐和低温等多种非生物胁迫过程中发挥关键作用。以紫红龙火龙果(Hylocereus monacanthus)为材料,克隆得到DREB录因子,并命名为HmDREB1D(HU02G01866.1),探究其生物学功能。【方法】构建HmDREB1D基因植物过表达载体,通过亚细胞定位分析HmDREB1D基因在细胞中的位置。异源拟南芥,对T3代纯合系转基因拟南芥(OE3、OE4、OE5)进行生物学功能验证。【结果】火龙果HmDREB1D基因的开放阅读框全长723 bp,产生的蛋白定位于细胞核内,属DREB1s亚家族,具有典型的AP2结构域。将HmDREB1D基因化至拟南芥获得超表达转基因株系,与野生型相比,转基因株系表现出较高的抗逆性。在干旱胁迫下,转基因植株T3代纯合系种子的萌发率高于野生型。转基因植株的叶片在逆境胁迫下表现出更低的电导率及更高的保护性酶活性。实时荧光定量PCR分析显示,RD20、HSP70和COR15A等逆境胁迫响应基因在HmDREB1D基因超表达植株中具有更高的表达量。【结论】过表达HmDREB1D基因通过调控抗逆相关基因表达,加速清除植株内的活性氧,增强植株的抗逆性。
张璐芳侯黔东蔡晓薇杨鵾文晓鹏
关键词:火龙果功能分析非生物胁迫亚细胞定位

相关作者

胡凤荣
作品数:160被引量:553H指数:14
供职机构:南京林业大学
研究主题:基因 春兰 表达蛋白 风信子 性状改良
刘倩
作品数:34被引量:19H指数:2
供职机构:南京林业大学
研究主题:表达蛋白 基因表达分析 基因 转基因拟南芥 春兰
王瑞刚
作品数:255被引量:478H指数:11
供职机构:内蒙古农业大学
研究主题:中间锦鸡儿 拟南芥 柠条锦鸡儿 基因克隆 非生物胁迫
李国婧
作品数:183被引量:458H指数:10
供职机构:内蒙古农业大学
研究主题:中间锦鸡儿 拟南芥 柠条锦鸡儿 非生物胁迫 基因克隆
徐兆师
作品数:282被引量:814H指数:15
供职机构:中国农业科学院作物科学研究所
研究主题:编码基因 氨基酸残基 相关蛋白 小麦 植物育种