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鱼载脂抗冻蛋白在毕赤酵母中的胞内表达及其活性分析: 2025年; 目的:选用冰鱼来源的载脂蛋白(Apolipoprotein)序列修饰的抗冻蛋白(Antifreeze Protein,AFP)基因——鱼载脂抗冻蛋白(fish Apolipo-Antifreeze Protein,fApoAFP)基因作为目的基因,对其在毕赤酵母中进行胞内表达,并对表达产物进行纯化及蛋白活性分析。方法:将真核表达质粒pPICZαA-fApoAFP利用大肠杆菌进行扩增并进行线性化处理。通过电转化法转化于感受态毕赤酵母X-33,并进行甲醇利用表型及高拷贝菌株筛选。甲醇诱导重组蛋白表达,提取酵母胞内蛋白并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。对鉴定成功的转化子进行大量诱导,对胞内蛋白进行亲和层析纯化、透析及真空冻干。最后在293T细胞培养基中分别添加终浓度为1 mg/mL和5 mg/mL的fApoAFP,-80℃处理24 h,检测fApoAFP是否有助于改善冷冻处理后细胞的存活率。结果:成功获得2株高拷贝甲醇利用正常型(Mut+)菌株,并对fApoAFP蛋白成功进行了表达和纯化,相对分子质量为37 kDa。然而通过293T细胞冷冻实验发现,fApoAFP未能够改善冷冻处理后的293T细胞增殖能力及其存活率。结论:鱼载脂抗冻蛋白fApoAFP能够在毕赤酵母X-33中成功表达并纯化,然而对293T细胞未表现出良好的低温保护作用。; 耿嫦慧; 关键词：抗冻蛋白毕赤酵母蛋白表达蛋白纯化

胞内表达双孢蘑菇酪氨酸酶的毕赤酵母工程菌株及其应用: 本发明公开了一种双孢蘑菇酪氨酸酶表达载体，该表达载体是将SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示的双孢蘑菇酪氨酸酶突变编码序列克隆至毕赤酵母胞内表达载体而获得的。本发明利用定位突变提升了重组酪氨酸酶的稳定性，得...; 王娟刘廷竹李宇涵

一种胞内表达病毒样颗粒的粗纯方法: 本发明提供了一种胞内表达病毒样颗粒的粗纯方法，该方法包括以下步骤：（1）制备破碎菌液，并对其进行澄清，收集破碎菌液上清；（2）加入沉淀剂沉淀目的蛋白；（3）洗涤并复溶目的蛋白沉淀，收集上清液，即得粗纯蛋白液。本发明所述粗...; 刘容麟张卫婷李岩异陈金利张红霞庞晓敏杨玉凤

LfcinB与EGFP融合蛋白在毕赤酵母中的胞内表达与分离纯化: 2024年; 该研究将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因片段与抗菌肽牛乳铁蛋白肽(LfcinB-His)基因片段的N末端连接,构建以EGFP为报告基因的胞内表达载体,融合表达重组蛋白EGFP-LfcinB-His,并对其进行活性检测。将重组表达质粒电转入毕赤酵母GS115中,筛选阳性转化子,甲醇诱导其发酵表达,488 nm的激发光下检测到较强的荧光。当酵母细胞培养达到最高密度后,收集菌体细胞,破壁,用酵母细胞蛋白裂解液进行裂解。裂解液经过超滤浓缩、Ni-NTA亲和层析、甲酸裂解等纯化步骤后,Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量为4.1 ku的目标蛋白(LfcinB-His)条带。通过液质联用测定与分析,最终获得了纯度为90.32%的LfcinB-His超滤浓缩液,对测试的6株致病菌均有不同程度的抑制作用,抑菌浓度范围在16~64μg/mL。综上,该研究为毕赤酵母表达小分子多肽提供了较好的方法学参考,也为进一步研究LfcinB的生物活性及高密度发酵奠定了基础。; 刘威王玉莲王林吴昊东田会敏成德王亮; 关键词：绿色荧光蛋白毕赤酵母蛋白纯化

一种胞内表达四环素降解酶Tet(X)的基因工程酵母菌及应用: 本发明属于生物工程技术领域，具体公开了一种胞内表达四环素降解酶Tet(X)的基因工程酵母菌及应用。本发明以毕赤酵母GS115为表达宿主菌，以GAP或TEF1为启动子替代pPIC9K‑opt(X4)质粒的甲醇诱导型启动子，...; 孙坚贺骞林卓宇张晓净廖晓萍刘雅红

胞内表达双孢蘑菇酪氨酸酶的毕赤酵母工程菌株及其应用: 本发明公开了一种双孢蘑菇酪氨酸酶表达载体，该表达载体是将SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示的双孢蘑菇酪氨酸酶突变编码序列克隆至毕赤酵母胞内表达载体而获得的。本发明利用定位突变提升了重组酪氨酸酶的稳定性，得...; 王娟刘廷竹李宇涵

一种胞内表达病毒样颗粒的粗纯方法: 本发明提供了一种胞内表达病毒样颗粒的粗纯方法，该方法包括以下步骤：（1）制备破碎菌液，并对其进行澄清，收集破碎菌液上清；（2）加入沉淀剂沉淀目的蛋白；（3）洗涤并复溶目的蛋白沉淀，收集上清液，即得粗纯蛋白液。本发明所述粗...; 刘容麟张卫婷李岩异陈金利张红霞庞晓敏杨玉凤

利用酵母胞内表达制备黄曲霉尿酸氧化酶的方法: 本发明涉及一种利用酵母胞内表达制备黄曲霉尿酸氧化酶的方法，包括在诱导重组酵母胞内表达黄曲霉尿酸氧化酶后，使菌体置于破胞缓冲液中破碎细胞；其中所述破胞缓冲液包含添加剂，所述添加剂选自二硫代苏糖醇、三(2‑羧乙基)膦、半胱氨...; 冯军路建光王亚鹏赵文杰于敏黄宗庆赵伟化浩举杜萱

一种通过过表达毕赤酵母翻译相关因子提高重组蛋白胞内表达的策略被引量：1: 2021年; 本研究为筛选对毕赤酵母重组蛋白表达有促进作用的翻译相关因子,扩增了毕赤酵母中包括核糖体蛋白翻译起始因子、翻译延伸因子、氨酰-tRNA合成酶、核糖体生物合成因子、核糖体分子伴侣五类翻译相关因子(共28个)的基因片段,并将上述基因片段与质粒pPICZA进行同源重组,进一步获得重组载体后分别转化至以增强型绿色荧光蛋白eGFP为报告蛋白的毕赤酵母中。之后通过测量计算120 h内28个过表达翻译相关因子菌株的荧光蛋白表达量,筛选对毕赤酵母重组蛋白表达有潜在促进作用的因子,进一步以红色荧光蛋白mRFP为报告蛋白进行验证。结果表明:本研究共筛选到了6个对毕赤酵母重组蛋白胞内表达有促进作用的翻译相关因子eIF4A、eEF1A、eEF3、Ded81、Bcy1、Ssb。其中eIF4A、eEF1A、eEF3、Ded81、Bcy1、Ssb的eGFP单位菌体表达量分别增加了18.40%、18.80%、29.50%、28.45%、21.60%,mRFP单位菌体表达量分别增加了20.00%、8.00%、19.00%、5.40%、15.40%。Bcy1使得eGFP表达菌株生物量增加20.00%,mRFP表达菌株生物量增加30.90%。为从翻译层面提高毕赤酵母重组蛋白表达提供了思路。; 林雯炀廖锡豪陈南柱黄大富陈亮钟炳旭梁书利林影; 关键词：毕赤酵母重组蛋白胞内表达

胞内表达热带假丝酵母脂肪酶的毕赤酵母全细胞催化剂的制备及其应用: 本发明属于生物工程领域，提供了一种胞内表达热带假丝酵母脂肪酶的毕赤酵母全细胞催化剂的制备方法：一个经过密码子优化的热带假丝酵母脂肪酶基因在巴斯德毕赤酵母GS115中进行胞内表达，经过初筛和复筛后得到最佳重组菌株3‑1；将...; 彭仁张雨佳洪远明辉辉洪彬文

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