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一种小鼠原代肺泡巨噬细胞 的体外长期扩增培养方法 细胞 培养技术领域，特别涉及一种体外长期扩增小鼠原代肺泡巨噬细胞 的培养方法。该方法使用含20‑40ng/ml GM‑CSF、5‑15ng/ml TGFβ和0.8‑1.2μM罗格列酮的Macrophage‑SFM无...一种小鼠原代肺泡巨噬细胞 的体外长期扩增培养方法 细胞 培养技术领域，特别涉及一种体外长期扩增小鼠原代肺泡巨噬细胞 的培养方法。该方法使用含20‑40ng/ml GM‑CSF、5‑15ng/ml TGFβ和0.8‑1.2μM罗格列酮的Macrophage‑SFM无...肺泡巨噬细胞 对屋尘螨诱导的过敏性气道炎症的影响2025年 细胞 的变化,并对肺泡巨噬细胞 (AM)在其中的效应功能进行初步探索。方法:气管注射HDM诱导过敏性气道炎症,并在建模前通过气管注射氯膦酸盐脂质体(CL)特异性地对AM进行清除;心脏灌注分离小鼠全肺免疫细胞 ;气管灌洗分离小鼠肺泡 灌洗液免疫细胞 ;ELISA检测肺泡 灌洗液Ⅱ型细胞 因子的水平;流式细胞 术检测肺脏或肺泡 灌洗液免疫细胞 的变化;HE染色、PAS染色评价HDM建模后肺脏炎症粒细胞 浸润、杯状细胞 增生以及黏液分泌情况。结果:在HDM诱导的过敏性气道炎症中,Ⅱ型免疫反应的效应细胞 如Ⅱ型先天性淋巴细胞 (ILC2)、嗜酸性粒细胞 显著增加,组织学分析表明肺组织有大量炎症细胞 浸润,杯状细胞 增生,黏液分泌增加。而清除AM减缓了HDM诱导的Ⅱ型免疫反应,但促进了中性粒细胞 的浸润,加重了肺脏的病理损伤。结论:AM在HDM诱导过敏性气道炎症中发挥重要作用。关键词：屋尘螨 过敏性气道炎症 肺泡巨噬细胞 嗜酸性粒细胞 猪胸膜肺炎放线杆菌通过Adh诱导猪肺泡巨噬细胞 氧化应激 2025年 细胞 氧化应激与肺脏炎性损伤密切相关,但是APP感染和细胞 氧化应激之间的关系仍不清楚。【目的】明确APP感染和细胞 氧化应激之间的关系并对其机制进行初步探索,从而为进一步阐明APP致病机理奠定基础。【方法】APP野生菌5b(5b WT)和Adh基因缺失菌(5bΔAdh)分别感染猪肺泡巨噬细胞 (porcine alveolar macrophage,PAM)后,荧光显微镜观察细胞 内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,RT-qPCR和Western blotting检测氧化应激相关分子的表达变化,利用NLRP3炎性体抑制剂MCC950处理细胞 ,分别感染5b WT和5bΔAdh后,生化反应法检测细胞 内乳酸和丙酮酸含量,流式细胞 术检测细胞 内ROS水平及线粒体膜电位变化情况;采用tandem mass tag(TMT)标记定量蛋白质组学测序分析细胞 蛋白表达变化并检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的释放情况。【结果】免疫荧光和流式细胞 术检测结果均显示,5b WT组ROS水平明显高于5bΔAdh组,但经MCC950处理后可以逆转这一上升趋势;生化指标检测结果表明,相较于5bΔAdh组,5b WT组的丙酮酸和乳酸的含量下降更显著,而且经过MCC950抑制NLRP3活性后,细菌感染组的丙酮酸和乳酸的含量均有显著回升,与对照组无显著差异;5b WT和5bΔAdh感染后,猪肺泡巨噬细胞 (porcine alveolar macrophage,PAM)中氧化应激关键转录因子核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和GCLM均呈现出下降的趋势;Western blotting结果表明5b WT和5bΔAdh组烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(nicotinamide adenine dinucleotide oxidase 2,NOX2)含量增高,并且5b WT组含量升高更明显;蛋白质组学分析表明共有15个蛋白的表达出现显著变化,GO分析发现这些差异蛋白主要参与ATP代谢、嘌呤代谢、炎症等重要生物学过程,KEGG分析发现这些蛋白与炎�关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 猪肺泡巨噬细胞 ADH 活性氧 线粒体损伤 不同模式PM_(2.5)暴露下大鼠的肺泡巨噬细胞 活化及其机制 2025年 肺泡巨噬细胞 活化的影响,将Wistar大鼠分为三组:空白对照组、4倍浓缩PM_(2.5)连续暴露组(4FC组)和8倍浓缩PM_(2.5)间歇暴露组(8FI组).采用动物全身动态暴露系统对大鼠进行染毒,共暴露84天.HE染色法观察肺组织病理变化,比色法测定肺泡 灌洗液(BALF)中氧化应激指标,RT-q PCR测定肺组织中M2极化标志物的m RNA水平,Western-blot测定肺组织中巨噬细胞 活化信号通路相关蛋白表达水平.结果显示,与对照组相比,实验组大鼠出现明显的肺损伤症状,BALF中氧化指标升高.大鼠肺组织中M2极化标志物的m RNA水平增加,PI3K/AKT以及JAK1/STAT6信号通路相关蛋白表达均明显上升,且8FI组高于4FC组.由此证明,长期吸入PM_(2.5)可通过激活PI3K/AKT和JAK1/STAT6信号通路促进肺泡巨噬细胞 的活化,进而造成肺损伤.且高浓度间歇吸入PM_(2.5)比低浓度连续吸入PM_(2.5)对肺部造成的损伤更为严重.在细胞 水平上,进一步验证了PM_(2.5)对AMs活化及相关信号通路的影响.关键词：肺泡巨噬细胞 猪肺炎支原体感染猪肺泡巨噬细胞 诱导氧化应激反应机制的初步研究 2025年 肺泡巨噬细胞 是否会诱导细胞 发生氧化应激反应,并初步揭示相关机制,试验分别用5×10^(6),1×10^(7),2×10^(7),5×10^(7)CCU/mL Mhp感染猪肺泡巨噬细胞 ,以未感染Mhp的细胞 为对照,并分别于第6,12,18,24,36小时收集细胞 ,检测氧化应激相关指标[活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、还原型一氧化氮合成酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性];根据氧化应激相关指标的测定结果,选择氧化应激水平最明显的感染浓度和时间点,采用荧光定量PCR方法检测氧化应激通路相关因子{核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor2,Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1[NAD(P)H:quinoneoxidoreductase-1,NQO1]、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)}的mRNA表达水平,并采用Western-blot方法检测上述因子的蛋白表达水平。结果表明:与正常细胞 比较,4个浓度的Mhp感染细胞 中ROS水平在第6,12,18,24,36小时均显著升高(P<0.05);5×10^(6)CCU/mL Mhp感染细胞 的NO浓度仅在第24小时显著升高(P<0.05),1×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞 的NO浓度在第6,12,18小时显著升高(P<0.05),2×10^(7)CCU/mL和5×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞 的NO浓度在第6,12,18,24小时显著升高(P<0.05);5×10~(6)CCU/mL Mhp感染细胞 的MDA含量仅在第36小时显著升高(P<0.05),1×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞 的MDA含量在第24,36小时显著升高(P<0.05),2×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞 的MDA含量在第6,12,18,36小时显著升高(P<0.05),5×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞 的MDA含量在第6,18,24小时显著升高(P<0.05);5×10^(6)CCU/mL Mhp感染细胞 的iNOS活性在第6,12,24,36小时显著升高(P<0.05),1×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞 iNOS活性在第6,12,18关键词：猪肺炎支原体 核因子E2相关因子2 血红素加氧酶-1 一种提取吞噬 MRSA的肺泡巨噬细胞 来源的胞外囊泡的方法 细胞 生物学技术领域，具体涉及一种提取吞噬 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的肺泡巨噬细胞 来源的胞外囊泡(EVs)的方法。本发明首先优化了MRSA感染肺泡巨噬细胞 的体外模型，模拟体内的病理生理过程。通过超速离心...8-oxo-Guo调控小鼠细胞 因子表达及肺泡巨噬细胞 极化的研究 2025年 细胞 因子产生及肺泡巨噬细胞 极化的影响,探讨其在肺部免疫炎症中的潜在作用。方法选用10~12周龄C57BL/6N雄鼠,随机分为对照组和8-oxo-Guo组,每组6只。8-oxo-Guo组小鼠尾静脉注射8-oxo-Guo(溶于含10%小鼠血清的1×PBS中,剂量为4μg/kg),对照组注射等体积含10%小鼠血清的1×PBS。间隔2小时注射1次,共注射2次,4小时后收集小鼠肺泡 灌洗液和血浆。然后采用RayBio■QAM-CAA-4000芯片检测200种血浆细胞 因子浓度,通过流式细胞 术检测肺泡巨噬细胞 极化情况。使用SPSS 22.0软件进行数据分析,以未配对Student t检验分析两组间差异,P<0.05为有统计学意义。结果与对照组相比,8-oxo-Guo组小鼠血浆中IL-12 p70、MIP-2等多种细胞 因子显著上调,IL-33显著下调;GO富集分析显示变化的细胞 因子主要在免疫效应调节等功能方面富集且与细胞 对脂多糖反应相似。肺泡巨噬细胞 检测中,8-oxo-Guo组小鼠肺泡巨噬细胞 CD86^(+)CD206^(-)细胞 占比率及CD86^(+)荧光强度增加,表明8-oxo-Guo可以诱导肺泡巨噬细胞 向M1型极化。结论本研究基于小鼠模型证明8-oxo-Guo引起小鼠血浆细胞 因子产生上调和肺泡巨噬细胞 的促炎型转换,提示8-oxo-Guo可能在肺部免疫炎症进程中起重要作用。琥珀酸诱导小鼠肺泡巨噬细胞 极化对高氧上皮间质转化的影响 2025年 肺泡巨噬细胞 极化对高氧致MLE-12小鼠肺泡 上皮细胞 上皮间质转化(epithelial–mesenchymal transition,EMT)的影响。方法(1)确定高氧暴露时间:将MLE-12细胞 置于95%O2的培养箱中培养不同时间,构建急性高氧肺损伤细胞 模型,Western blot法测定EMT相关蛋白(E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白)相对表达量,选择高氧暴露时间。(2)MLE-12与MH-S共培养探究MH-S对EMT的影响:将MLE-12细胞 分为高氧0 h组、高氧48 h组、与MH-S高氧共培养48 h组(共培养组),Western blotting法测定EMT相关蛋白相对表达量。(3)确定琥珀酸浓度及其对MH-S极化和琥珀酸受体GPR91的影响:将MLE-12置于不同浓度的琥珀酸培养基中培养24 h,CCK-8法测定细胞 活力,选取琥珀酸浓度进行后续实验;将MH-S细胞 分为对照组和琥珀酸处理组,对照常规培养24 h,琥珀酸处理组在对照组基础上加入上述浓度琥珀酸,RT-q PCR法测定MH-S细胞 GPR91和极化相关因子mRNA相对表达量,流式细胞 术测定巨噬细胞 极化相关蛋白(CD11b、CD206、CD86)表达。(4)细胞 共培养探究琥珀酸对EMT的影响:将MLE-12与MH-S在孔径为0.4μm的Transwell小室中共培养,分为共培养组、琥珀酸处理后共培养组、GPR91抑制剂组(抑制剂组)。结果(1)四组MLE-12不同时间EMT相关蛋白表达:与0 h相比,24 h、48 h组波形蛋白和N-钙黏蛋白表达量增高,48 h、72 h组E-钙黏蛋白表达量降低(P<0.05),其余各组无明显差异,选取高氧条件48 h进行后续实验。(2)MH-S对EMT的影响:共培养组波形蛋白和N-钙黏蛋白表达量高于48 h组,E-钙黏蛋白表达量低于48 h组(P<0.05)。(3)使用不同浓度的琥珀酸干预MLE-12细胞 24 h后,与0 mmol/L组相比,2.5 mmol/L、1 mmol/L、500μmol/L组细胞 活力增高(P<0.05),其余各组无明显差异,选取1 mmol/L琥珀酸浓度进行后续实验;与对照组相比,琥珀酸处理组GPR91 mRNA表达量增高,琥珀酸处理组诱导型一氧化氮关键词：高氧肺损伤 肺泡上皮细胞 上皮间质转化 琥珀酸 山羊肺泡巨噬细胞 永生化建立与表型鉴定 2025年 细胞 系可以作为布鲁氏菌(Brucella)的体外侵染模型,但目前仍缺乏能够准确模拟其在体内感染过程的大动物体外细胞 模型。【目的】获得具有单一克隆特性的、能稳定传代的山羊肺泡巨噬细胞 系,优化布鲁氏菌体外侵染山羊细胞 系模型。【方法】在无菌环境下用PBS灌洗山羊肺脏,分离得到原代山羊肺泡巨噬细胞 ;采用转染SV40大T抗原(SV40 large T antigen,SV40LT)、嘌呤霉素抗性筛选的方法建立了永生化山羊肺泡巨噬细胞 系;使用细胞 免疫荧光和流式细胞 术检测单核巨噬细胞 表面特征性标志物分化抗原簇14(cluster of differentiation antigen 14,CD14),利用鸡红细胞 吞噬 实验检测其吞噬 能力;随后将布鲁氏菌(Brucella)M5疫苗株侵染该细胞 系,在不同时期统计胞内活菌数。【结果】成功分离并构建了山羊肺泡巨噬细胞 系,并且具有典型的巨噬细胞 形态学特征,呈现不规则形状,有伪足伸出,胞体较大,吞噬 能力强;体外培养10 d,有95.40%原代细胞 特异性表达CD14,永生化后仍有92.4%的细胞 特异性表达CD14;相较于另外3种细胞 ,永生化后的肺泡巨噬细胞 对布鲁氏菌敏感性与RAW264.7细胞 近似,高于绵羊间质睾丸细胞 (sheep testicular interstitial cell,STIC)。【结论】成功建立永生化山羊肺泡巨噬细胞 系,该细胞 系为研究布鲁氏菌的致病机制及免疫逃逸机制提供了体外试验对象。关键词：慢病毒 布鲁氏菌 流式细胞术
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刘芬 作品数：131 被引量：626 H指数：12 供职机构：南昌大学第一附属医院 研究主题：肺泡巨噬细胞 脂多糖诱导 肺泡巨噬 炎症反应 细胞炎症反应 钱克俭 作品数：176 被引量：857 H指数：14 供职机构：南昌大学第一附属医院 研究主题：肺泡巨噬细胞 吸入性损伤 炎症反应 脂多糖诱导 急性肺损伤 钱桂生 作品数：1,146 被引量：6,962 H指数：33 供职机构：中国人民解放军 研究主题：急性肺损伤 急性呼吸窘迫综合征 脂多糖 肺损伤 肺癌 曾振国 作品数：90 被引量：311 H指数：11 供职机构：南昌大学第一附属医院 研究主题：肺泡巨噬细胞 脂多糖诱导 肺泡巨噬 高容量血液滤过 急性肺损伤 邵强 作品数：43 被引量：225 H指数：9 供职机构：南昌大学第一附属医院 研究主题：肺泡巨噬细胞 炎症反应 肺泡巨噬 细胞炎症反应 脂多糖诱导
