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猪肠病毒G型的分离鉴定及致病性研究: 2025年; 为分析临床腹泻发病猪场疫情发生的原因,在开展初生仔猪腹泻样品病毒分离试验中,获得了能够在Marc145细胞上稳定增殖的病毒,并对该病毒进行宏基因组测序、核酸序列分析、培养特性研究、仔猪回归试验等研究。该病毒的分离株鉴定为猪肠病毒G1型(EV-G1),能在Marc145、 ST、 Vero等多种细胞上生长,无胰酶依赖性,对氯仿不敏感,适应细胞培养滴度均能达到10^(7.0)TCID_(50)/mL以上。人工感染3~5日龄仔猪,可导致一过性腹泻,在感染仔猪的脑、心脏、空肠、回肠、盲肠、结肠中均可检测到该病毒。本研究从与猪轮状病毒混合感染的组织样品中分离到1株EV-G病毒,该病毒可导致新生仔猪腹泻,且病毒有良好的细胞适应性,旨在充分了解仔猪感染EV-G病毒的致病性,为EV-G免疫原性研究以及疫苗研发奠定基础。; 林艳夏嘉鑫周远成李敏郑勤琴陈莉群岳丰雄; 关键词：仔猪生物学特性腹泻

一株牛肠病毒F型的全基因组分析及抗体检测间接ELISA方法的建立: 2025年; 本研究从牛肠病毒(BEV)阳性粪便中通过接种BHK细胞进行蚀斑纯化分离得到一株F型肠道病毒,经过RT-PCR鉴定正确后送生物公司进行全基因测序以及进行TCID_(50)的测定,以MEGA11.0等生物信息学软件对BEV全基因进行分析并构建遗传进化树。以原核表达方式得到含BEV分离株VP3基因的重组蛋白,作为包被抗原,建立检测抗体的间接ELISA方法,并对建立的ELISA方法的特异性、灵敏性、重复性进行测定与用于临床样品的检测。结果显示,BEV分离株的TCID 50为10-6.26·mL^(-1),病毒分离株全长为7439 nt,ORF大小为6504 bp,编码2168个氨基酸,与F型肠道病毒BEV4遗传关系最近且核苷酸相似性最高,故分离到的病毒为F型肠道病毒,暂命名为BEV-QD,与其他F型毒株相比,BEV-QD株存在氨基酸的突变以及缺失并且大多集中在P2、P3区。本次建立的抗体检测间接ELISA方法重复性良好;阳性血清稀释1600倍后结果仍呈现阳性,灵敏性良好;与BVDV等阳性血清不发生特异性结合,特异性良好;检测40份临床样品中,13份为阳性,阳性率为32.5%。本研究分离到一株F型牛肠病毒突变株,建立了一种抗体间接ELISA方法。为牛肠病毒的检测和防控提供了基础手段。; 刘健于泽海张玫瑜李丹王君刘芳琴张群徐守振; 关键词：全基因组分析 ELISA

猪肠病毒G型PLP蛋白多克隆抗体的制备方法及其应用: 本发明公开了一种猪肠病毒G型PLP蛋白多克隆抗体的制备方法，将自然重组猪肠病毒G型全长PLP基因(PLP)或截短PLP基因(PLP‑1)克隆至原核表达载体pET‑32a获得重组质粒pET‑32a‑PLP或pET‑32a‑...; 欧阳康洪大林曾令佑陈凯歌张胜斌覃一峰尹业师何家康陈樱韦祖樟黄伟坚

牛冠状病毒牛肠病毒牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法的建立与应用被引量：4: 2024年; 为建立一种可以快速检测牛冠状病毒(BCoV)、牛肠病毒(BEV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的实时荧光PCR方法并应用于临床检测,根据BCoV N基因、BEV 5′-UTR基因、BVDV 5′-UTR基因设计3对特异性引物和探针,通过对引物、探针的浓度以及反应条件的优化,建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒三重一步法实时荧光PCR方法,并对该三重PCR方法的敏感性、重复性、特异性和临床样本检测结果进行了评价。结果显示,该方法灵敏度高,对BCoV、BEV和BVDV的最低检测限为10 copies/μL;重复性稳定,批内和批间变异系数(CV)均在2%以下;特异性强,对常见腹泻类病原无交叉反应。应用此方法检测河南省445份牛腹泻粪便样本,BCoV、BEV和BVDV的阳性率分别为6.5%(29/445)、17.5%(78/445)、12.1%(54/445)。上述结果表明,本研究建立了牛冠状病毒、牛肠病毒、牛病毒性腹泻病毒一步法三重实时荧光PCR方法,为疫病的快速检测及预防提供了有效的技术手段。; 康台生刘影胡煜锋李博文王益冰王淑娟闫若潜王东方; 关键词：牛冠状病毒牛病毒性腹泻病毒

猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2024年; 本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。; 边金妮黄诗婷许佳乐米雪王奕斐杜琛陈樱韦祖樟黄伟坚欧阳康; 关键词：原核表达多克隆抗体

一种快速检测猪肠病毒G型的检测试剂、试剂盒及其应用: 本发明涉及分子标记技术领域，特别涉及一种快速检测猪肠病毒G型的检测试剂、试剂盒及其应用，本申请成功建立了一种快速检测EV‑G的RT‑RAA与CIRSPR/Cas12a相结合的技术手段，该方法从引物的选择和体系优化提高了整...; 覃绍敏刘金凤欧阳康杨丽华许力士秦树英韦珊珊马玲陈凤莲林俊韦珏陆晨阳杨磊彭娜

一种可视化快速检测猪肠病毒G型的RT-LAMP引物组及试剂盒: 本发明涉及一种可视化快速检测猪肠病毒G型的RT‑LAMP引物组及试剂盒，属于微生物检测技术领域。该引物组包括5条引物，分别为两条外引物、两条内引物和一条环引物；所述的两条外引物为正向外引物EV‑G/P5‑F3和反向外引物...; 李占鸿宋建领朱沛张振兴李卓然

2013—2022年云南地区猪肠病毒G型的分子流行病学调查被引量：2: 2023年; 【目的】了解肠病毒G型(Enterovirus G,EV-G)在云南地区猪场中的流行状况及其分子特征,为云南地区EV-G的防控提供理论依据。【方法】根据EV-G的5′-非翻译区(UTR)保守区域设计引物,RT-PCR扩增监测2013-2022年云南地区猪临床腹泻样品的EV-G阳性率,从阳性样品来源的区域、猪群结构及类型分析EV-G在云南地区的感染情况。利用EV-G VP 1基因巢式PCR引物,通过RT-PCR扩增EV-G VP 1基因全序列;采用MegAlign软件分析EV-G云南株的VP1序列与EV-G的20个基因型标准株的相似性及关键氨基酸突变,采用Mega 7.0软件构建VP 1基因的遗传进化树,并通过Protean软件的Jameson-Wolf分析法对VP1蛋白进行抗原指数分析。【结果】云南地区2013-2022年收集的1941份临床样品EV-G总阳性率为19.42%(377/1941),其中大理(54.54%)、玉溪(45.45%)、红河(43.24%)猪群的EV-G感染阳性率明显高于云南其他地区;乳猪(25.19%)和保育猪(24.68%)2个年龄组的猪群阳性感染率高于其他猪群;肛拭子阳性样品的检出率(53.58%)高于肠道内容物(29.71%)及粪便(16.71%)样品。基于20株EV-G代表株VP 1基因序列相似性分析及遗传进化表明,17个云南株为EV-G1型,2株为EV-G6型,1株为EV-G17型。17个EV-G1基因型云南分离株VP1蛋白在第125-150、170-190位氨基酸处抗原指数活跃度显著增强,此区域同时存在多个亲水性氨基酸位点的突变,如P^(127) S、P^(143) S、G^( 146) R、P^( 188 )S。【结论】EV-G1、EV-G6和EV-G17等多种基因型在云南地区猪群中流行,以EV-G1型流行为主。EV-G1基因型云南分离株的VP1蛋白在第125-150、170-190位氨基酸处存在显著的抗原活跃度,可能介导EV-G1基因型毒株在云南的感染和流行。; 王位朱沛李占鸿薛晓岩杨钦鸿李雪李素华姚俊; 关键词：VP1 分子流行病学基因特征

一种5种人肠病毒的MNP标记组合、引物对组合、试剂盒及其应用: 本发明属于分子生物学技术领域，本发明公开了一种5种人肠病毒的MNP标记组合、引物对组合、试剂盒及其应用，所述MNP标记组合包括人肠病毒基因参考序列上的52个标记，具体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID N...; 彭海高利芬周俊飞李甜甜陈利红李论方治伟肖华峰万人静

猪肠病毒G型3C蛋白的原核表达及多克隆抗体制备: 2023年; 为制备猪肠病毒G型(EV-G)非结构蛋白3C的多克隆抗体,本研究参考EV-G分离株CH/17GXQZ/2017的序列设计带有酶切位点的引物扩增3C全基因,通过RT-PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-EVG-3C。将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞中,通过对诱导条件(诱导温度、IPTG浓度以及诱导时间)的筛选,获得重组3C蛋白的最优表达条件。将表达纯化后的3C蛋白通过皮下注射的方式免疫新西兰大白兔,制备3C蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA测定效价,并利用间接免疫荧光试验及Western-blot进行验证。结果显示,表达的3C蛋白主要以包涵体的形式存在,相对分子质量约为38.8 ku;经间接ELISA方法测定,制备的EV-G兔抗效价达到1∶8192000;间接免疫荧光试验和Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能与EV-G特异性结合,具有良好的免疫原性和反应性。本研究为EV-G的诊断以及3C蛋白的功能研究提供了参考。; 罗允燕黄诗婷曾德平洪大林米雪陈樱韦祖樟韦祖樟欧阳康; 关键词：原核表达多克隆抗体

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