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山羊肺泡巨噬细胞永生化建立与表型鉴定: 2025年; 【背景】尽管已有多种人和鼠细胞系可以作为布鲁氏菌(Brucella)的体外侵染模型,但目前仍缺乏能够准确模拟其在体内感染过程的大动物体外细胞模型。【目的】获得具有单一克隆特性的、能稳定传代的山羊肺泡巨噬细胞系,优化布鲁氏菌体外侵染山羊细胞系模型。【方法】在无菌环境下用PBS灌洗山羊肺脏,分离得到原代山羊肺泡巨噬细胞;采用转染SV40大T抗原(SV40 large T antigen,SV40LT)、嘌呤霉素抗性筛选的方法建立了永生化山羊肺泡巨噬细胞系;使用细胞免疫荧光和流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志物分化抗原簇14(cluster of differentiation antigen 14,CD14),利用鸡红细胞吞噬实验检测其吞噬能力;随后将布鲁氏菌(Brucella)M5疫苗株侵染该细胞系,在不同时期统计胞内活菌数。【结果】成功分离并构建了山羊肺泡巨噬细胞系,并且具有典型的巨噬细胞形态学特征,呈现不规则形状,有伪足伸出,胞体较大,吞噬能力强;体外培养10 d,有95.40%原代细胞特异性表达CD14,永生化后仍有92.4%的细胞特异性表达CD14;相较于另外3种细胞,永生化后的肺泡巨噬细胞对布鲁氏菌敏感性与RAW264.7细胞近似,高于绵羊间质睾丸细胞(sheep testicular interstitial cell,STIC)。【结论】成功建立永生化山羊肺泡巨噬细胞系,该细胞系为研究布鲁氏菌的致病机制及免疫逃逸机制提供了体外试验对象。; 张文鑫丁一格孙嘉媛王欣慧刘真丁家波; 关键词：慢病毒布鲁氏菌流式细胞术

一种基于B细胞永生化的单个B细胞抗体开发方法及其应用: 本发明具体涉及一种基于B细胞永生化的单个B细胞抗体开发方法及其应用。本发明提供的方法，包括以下步骤：S1、抗原的准备；S2、抗原免疫；S3、慢病毒载体的改造；S4、病毒的感染及细胞的分选；S5、筛选高结合活性细胞；S6、...; 卢海松王辉林施聘包黎明

单克隆山羊肌内前体脂肪细胞永生化细胞系、制备方法及应用: 本发明公开了一种单克隆山羊肌内前体脂肪细胞永生化细胞系、制备方法及应用，涉及永生化细胞领域。该方法包括：获取原代山羊肌内前体脂肪细胞；将携带SV40‑T的慢病毒感染原代山羊肌内前体脂肪细胞，并添加嘌呤霉素筛选出感染携带S...; 向华王应归黄炼朱江江石恒波王永林亚秋张倡珲杜站宇

动物细胞永生化研究进展被引量：1: 2024年; 细胞永生化是指通过各种手段、方式来突破原代细胞衰老的限制,延长细胞寿命,实现细胞无限复制增殖,是当前生物医学领域研究的一个热点与难点。永生化细胞株/系可用于生物制品研发、衰老机制探索以延伸生命等;然而目前永生化细胞种类不多、永生化技术相对较难,肿瘤风险以及动物福利伦理等原因,还不能满足研发需求。目的细胞永生化不仅可以永久保存动物细胞遗传资源,还对多种疾病的诊断、治疗及细胞基质疫苗的研发等提供支持。本文就动物细胞永生化的原理、永生化机制及方法的研究最新进展进行综述,为未来的生物医学研究和应用提供参考。; 张震宇靳莉武王婧尊田玲乔自林杨迪阿依木古丽·阿不都热依木; 关键词：动物细胞细胞永生化

一种PBMC细胞永生化的培养方法: 本发明公开了一种PBMC细胞永生化的培养方法，所述培养方法为：配制包括EBV、PBMC和永生化培养基的EBV感染体系，在培养过程中至少一次部分更换培养基直至永生化成功，其中所述培养基以RPMI‑1640为基础培养基，补加...; 郭静黄学朋魏亮王晓明佘靖陈念嘉

猪肺成纤维细胞永生化细胞系的构建: 韦雯莉

一种山羊垂体细胞永生化细胞系及其构建方法: 本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其是指一种山羊垂体细胞永生化细胞系及其构建方法，将山羊垂体细胞转染SV40后传代培养，持续传代至30代以上；包括以下步骤：S1，分离垂体细胞；S2，免疫荧光法鉴定垂体细胞；S3，SV40慢...; 韩燕国秦歌张梨郭家雪俄广鑫黄勇富赵中权赵永聚

猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用: 本发明提出一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用，包括以下步骤：S10、提供转染体系；S20、提供包装细胞，将所述转染体系和所述包装细胞混合、进行慢病毒包装，得慢病毒颗粒；S30、提供分离的原代猪腹膜间皮细胞，...; 李晓敏陆启荣刘宇邱银生周朗田俊可

小鼠角膜上皮细胞永生化细胞系的建立及表型鉴定: 2024年; 目的探讨小鼠角膜上皮细胞永生化细胞系的建立方法,并鉴定其表型的稳定性。方法提取小鼠角膜上皮原代细胞,以猴空泡病毒40大T抗原(SV40-LT)慢病毒感染小鼠角膜上皮原代细胞建立永生化细胞系。通过HE染色与免疫荧光染色对角膜上皮组织表型和标记物(K12、Pax6、Ki-67)进行鉴定。提取原代角膜上皮细胞并对其角膜上皮细胞分层蛋白K14进行鉴定,观察细胞明场视野评估细胞形态学特征。对转染后的P1和P8代细胞的部分标志物(K12、Pax6、Ki-67、ABCG2、K14)进行鉴定。采用结晶紫染色法观察转染后的P1和P8代细胞克隆的形成能力。结果小鼠角膜上皮组织中K12、Pax6、Ki-67染色阳性;P1、P8代小鼠角膜上皮细胞中K12、Pax6、Ki-67、K14和ABCG2染色阳性,上述标志物阳性率比较,差异均无显著性(P>0.05),P1与P8代小鼠角膜上皮细胞克隆能力无明显差异(P>0.05)。结论使用SV40-LT慢病毒转染小鼠角膜上皮,成功建立永生化小鼠角膜上皮细胞系,表型稳定且稳定增殖。; 白莹王一卉葛欢欢卞雯晗陈鹏; 关键词：细胞系上皮细胞角膜

一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法: 本发明公开了一种人骨髓间充质干细胞永生化的方法，涉及细胞永生化技术领域。本发明包括如下步骤：获取样本：在无菌条件下从人体骨髓中提取骨髓间充质干细胞；基因修饰：采用CRISPR/Cas9技术，针对ABCG2基因进行基因敲除...; 张舒林魏慧敏胡芳琼张则宇万武

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