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一种神经球免疫荧光染色的方法: 本发明公开了一种神经球免疫荧光染色的方法：(1)神经球清洗：取悬浮培养的神经球，离心，弃上清，重悬神经球，再次离心，弃上清；(2)固定；(3)通透及封闭；(4)一抗孵育；(5)漂洗；(6)二抗孵育；(7)漂洗；(8)封片...; 和会娟杨敏闫红张俊利曹晓红曹启龙; 文献传递

一种神经球免疫荧光染色的方法: 本发明公开了一种神经球免疫荧光染色的方法：(1)神经球清洗：取悬浮培养的神经球，离心，弃上清，重悬神经球，再次离心，弃上清；(2)固定；(3)通透及封闭；(4)一抗孵育；(5)漂洗；(6)二抗孵育；(7)漂洗；(8)封片...; 和会娟杨敏闫红张俊利曹晓红曹启龙; 文献传递

人胚胎干细胞源神经球条件培养液对大鼠施万细胞增殖和迁移的影响被引量：1: 2019年; 目的:探讨人胚胎干细胞源神经球条件培养液(human embryonic stem cell-derived neurospheres conditioned medium,h ESCN-CM)对施万细胞增殖和迁移的影响及其潜在的机制。方法:取3~5 d SD大鼠双侧坐骨神经,分离纯化施万细胞,用免疫荧光染色法进行鉴定。分别用0%、50%和100%h ESCN-CM刺激施万细胞,CCK-8实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,实时荧光定量PCR检测Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf、Igf-1等mRNA的表达。结果:免疫荧光染色结果显示,施万细胞S100特异性表达可达99%。CCK-8实验显示,与0%h ESCN-CM相比,50%h ESCN-CM刺激后施万细胞增殖明显增强,100%h ESCN-CM刺激后施万细胞增殖明显降低(P均<0.05)。划痕实验显示,刺激6 h,与0%h ESCN-CM刺激后施万细胞相比,50%和100%h ESCN-CM刺激后施万细胞迁移明显增强(P<0.05);刺激12 h,50%h ESCN-CM刺激后施万细胞迁移明显增强(P<0.01),100%h ESCN-CM差异无统计学意义。荧光定量PCR结果显示,与0%h ESCN-CM相比,50%h ESCN-CM刺激后施万细胞Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf等mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论:h ESCN-CM可能通过上调Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf等mRNA表达促进施万细胞增殖和迁移。; 纪贤严高建一叶开张磊曹江素胡嘉波; 关键词：条件培养液增殖迁移神经球施万细胞

不同厚度神经球冰冻切片免疫荧光细胞化学染色结果的比较被引量：4: 2018年; 目的探索适合免疫荧光细胞化学染色的神经球最佳冰冻切片厚度。方法选取悬浮培养10～12 d的神经球,制作厚度分别为4、7、10μm的冰冻切片。采用免疫荧光细胞化学染色比较神经球神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达和定位。结果培养10～12 d的神经球直径为200～250μm,状态良好,折光性强,呈圆球状,周边有毛刺。4μm的神经球冰冻切片制作较难,容易卷片,但细胞层次清楚,染色均匀,密疏适宜,可较清楚计数细胞。成像清楚。胞核清晰,可见较多nestin染色阳性的完整胞质包绕4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色阳性的胞核,能观察更多的细胞间细节。7μm切片较4μm切片制作容易,切片较平整,细胞层次不如4μm切片清楚,染色较均匀。所含细胞数较4μm多,可粗略计算细胞数。荧光拍照不能完全对焦,可见部分完整细胞形态。10μm的冰冻切片制作相对容易,切片平整,但细胞层次不清楚,堆叠严重,成像不清楚,难以看到完整细胞形态。结论 4μm厚度的神经球冰冻切片较适合进行免疫荧光细胞化学染色和分析。; 马雪霞汪兆艳王倩杨印祥栾佐; 关键词：神经球冰冻切片厚度

咪康唑与纤维蛋白协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞被引量：1: 2018年; 目的:探讨咪康唑与纤维蛋白能否协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞。方法:培养并鉴定胎鼠神经球;通过MTT法确定不同浓度咪康唑对神经球存活的影响;将神经球按培养条件不同分为四组,对照组、咪康唑组(mico组)、纤维蛋白组(fibrin组)及纤维蛋白-咪康唑联用组(fibrin+mico组),培养两周后以免疫荧光染色比较髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达;Western Blot法比较MBP、2’3’环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、整合素、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化(ERK、p-ERK)的表达。结果:(1)神经球阳性表达巢蛋白(nestin)和CD133:当咪康唑浓度低于或等于1.5μmol/L时,神经球存活在各组之间不存在统计学差异(P>0.05),但2.5μmol/L组显著低于2μmol/L组和1.5μmol/L组(P<0.05)。(2)免疫荧光结果显示:神经球分化所成的成髓鞘样细胞表达MBP阳性,呈多突起形态;fibrin组及mico组MBP相对荧光强度均高于对照组(P<0.05),fibrin+mico组神经球分化为网络状的成髓鞘样细胞团,其相对荧光强度高于其他组(P<0.05)。(3)Western Blot结果显示:fibrin+mico组MBP及CNPase表达显著高于mico组和fibrin组(P<0.05),fibrin+mico组整合素表达及p-ERK/ERK显著高于mico组和fibrin组(P<0.05),同时咪康唑及纤维蛋白对MBP、CNPase、整合素的表达及p-ERK/ERK的效应具有交互作用(P<0.05)。结论:咪康唑与纤维蛋白能协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞,其机制可能与ERK磷酸化有关。; 崔学文周焕高陈平波杨文静杨文静龚爱华张志坚; 关键词：咪康唑纤维蛋白神经球

人脂肪干细胞向神经球诱导分化的研究: 目的：神经退行性疾病的特点是大脑或脊髓内神经元和神经胶质细胞的丢失。将干细胞诱导分化为神经细胞，并进行移植，是治疗神经元丢失疾病的有希望的方法之一。目前，骨髓间充质干细胞、胚胎干细胞等已可诱导生成神经细胞。本研究拟观察人...; 杨二方; 关键词：神经退行性疾病脂肪干细胞神经细胞诱导分化; 文献传递

五味子木脂素诱导胶质瘤神经球细胞凋亡的机制研究被引量：12: 2014年; 目的研究五味子木脂素诱导人脑胶质瘤SHG-44神经球细胞凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法分析检测五味子木脂素对SHG-44神经球细胞增殖的影响;Annexin V/PI分析凋亡率;酶联免疫吸附法法检测培养上清中bax、bcl-2和caspase 3蛋白分泌的变化,蛋白质印迹法检测神经球bcl-2蛋白表达变化。结果 50、100、200 mg·L-1五味子木脂素作用24、48和72 h时,均能明显抑制SHG-44神经球细胞的增殖,作用呈剂量依赖性。Annexin V/PI结果显示,五味子木脂素可诱导SHG-44神经球细胞明显凋亡,作用亦呈剂量依赖性。酶联免疫吸附法结果显示,不同浓度五味子木脂素作用后,bcl-2蛋白分泌明显下调使bax/bcl-2比例升高,caspase 3蛋白分泌增加。蛋白质印迹结果显示,SHG-44神经球表达bcl-2蛋白明显下降。结论五味子木脂素通过下调bcl-2的表达和分泌,使抑制凋亡因素减弱而促凋亡因素占优势,使caspase 3活化,进而引起SHG-44神经球细胞发生凋亡。; 齐玲金宏赵东海纪鹏艳温娜杨宁江; 关键词：胶质瘤神经球凋亡 BAX BCL-2

五味子木脂素与顺铂抑制SHG-44神经球细胞的生长: 2014年; 目的研究五味子木脂素和顺铂对人脑胶质瘤SHG-44神经球细胞生长的作用。方法 MTT法分析检测五味子木脂素和顺铂对SHG-44神经球细胞生长的影响;ELISA法检测细胞培养上清中bcl-2及caspase 3蛋白的变化。结果 50、100、200 mg/L五味子木脂素作用24、48、72h,均能明显地抑制SHG-44神经球细胞的生长,作用呈浓度依赖性;10 mg/L顺铂作用后也可明显抑制神经球细胞的生长,作用呈时间依赖性。Elisa结果显示,药物作用后bcl-2蛋白水平明显下调,而caspase 3蛋白水平明显上调。结论五味子木脂素和顺铂都可以通过下调抗凋亡蛋白bcl-2的水平,进而抑制SHG-44神经球细胞的生长。; 韩磊金宏孙文萍田晶纪鹏艳齐玲于洪泉; 关键词：顺铂神经球 BCL-2

不同代次大鼠脂肪间充质干细胞增殖及成神经球的能力比较被引量：2: 2014年; 背景:脂肪间充质干细胞是一组具有多向分化潜能的干细胞,体外在一定条件下可分化为神经干细胞。目的:观察不同代次大鼠脂肪间充质干细胞体外培养增殖能力及诱导成神经球的潜力。方法:取SD大鼠脂肪体外分离培养出脂肪间充质干细胞并传代扩增,分别在P3、P6、P10、P20时观察其形态学变化、测定增殖速度。流式细胞仪检测定不同代次细胞表型及细胞周期。将脂肪间充质干细胞诱导为神经球,计数成神经球率。结果与结论:脂肪间充质干细胞主要呈长梭形,不同代次的脂肪间充质干细胞均具有很强的体外增殖能力;除P3细胞其他代次细胞均高表达CD29、CD44、CD73,低表达CD45、CD34。细胞周期中G0/G1期细胞所占比例P3为93.4%、P6为92.7%、P10为92.4%、P20为86.0%。P6、P10诱导成神经球率均显著高于P20(P<0.05),P3细胞较难诱导成神经球。提示以脂肪间充质干细胞作为种子细胞时,应注意选择适宜的扩增代数,以便在获得足够纯度细胞的同时保留细胞最佳的分化潜力。; 张恩丰曹锐徐韬王晓燕买尔旦.买买提王国旗盛伟斌; 关键词：干细胞脂肪干细胞脂肪间充质干细胞细胞培养细胞分化神经球国家自然科学基金

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合顺铂抑制胶质母细胞瘤神经球生长的作用: 2014年; 目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和顺铂对胶质母细胞瘤神经球细胞生长的抑制作用。方法培养人脑胶质母细胞瘤SC326神经球细胞,将其分为对照组、TRAIL组、顺铂组和联合用药组,MTS法检测药物作用后神经球细胞的死亡率;倒置显微镜观察药物作用后神经球形成情况。结果 TRAIL和顺铂均可以使神经球细胞死亡,两者联合作用后神经球细胞死亡率明显增加,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。TRAIL和顺铂均可以抑制神经球的形成,两者联合对神经球形成的抑制作用更明显。结论 TRAIL和顺铂可以抑制SC326神经球细胞生长,两者联合后可以发挥协同杀伤神经球细胞的作用。; 闫振坤王立波宋玉梅刘晓阳齐玲; 关键词：顺铂胶质母细胞瘤神经球

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