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小鼠SGK1基因真 核 表达 载体的构建及鉴定 2025年 真 核 表达 载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,并观察载体在转染HEK293细胞后的表达 情况。方法:PCR法扩增SGK1目的基因片段,并与经过HindⅢ和SbfⅠ双酶切的pcDNA3.1-MYC-C-mcherry载体连接。酶切和测序验证成功后,采用脂质体转染法将pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry转染至HEK293细胞中,Western blotting法测定HEK293细胞中真 核 表达 载体的表达 情况。结果:酶切载体条带位于5200 bp,目的基因条带位于3100 bp,与预期结果相符。Snap Gene软件比对,pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry的测序结果与预期序列一致,表明真 核 表达 载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry构建成功。Western blotting法观察到转染后的HEK293细胞在相对分子质量49000附近显现出明显的条带,真 核 表达 载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry成功表达 。结论:成功构建真 核 表达 载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry,为后续研究SGK1基因对小鼠受精卵细胞早期发育的作用机制奠定了基础。关键词：真核表达载体 HEK293细胞 脑心肌炎病毒VP22A基因真 核 表达 载体的构建 2025年 真 核 表达 载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真 核 表达 载体构建成功。关键词：脑心肌炎病毒 VP2基因 真核表达载体 MAVS全长及其截短体真 核 表达 载体的构建和鉴定 2025年 真 核 表达 载体,并检测其在HEK293细胞中的表达 ,为后续探索MAVS在病毒逃逸机制研究中的作用提供重要的实验材料。首先,根据NCBI数据库中人源MAVS的全长序列,设计截短体引物,通过PCR从cDNA模板中扩增出MAVS全长及不同截短体的基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1-3xflag载体中。随后,将构建好的载体转染到HEK-293细胞中,利用RT-PCR技术检测扩增产物大小,与目的大小进行对比,用Western blot技术检测MAVS蛋白在293细胞中的表达 情况。结果表明,成功构建了全长MAVS(MAVS-FL)及其截短体MAVS-△C、MAVS-△CP、MAVS-PBD、MAVS-△Tm的真 核 表达 载体,Western blot结果表明,构建的载体蛋白在HEK-293中能够有效表达 。本研究成功构建了MAVS全长及其截短体的真 核 表达 载体,并在HEK-293细胞中表达 了这些蛋白,为后续研究MAVS蛋白的功能和抗病毒机制提供了实验材料。关键词：真核表达载体 蛋白表达 鸡TXNRD1基因真 核 表达 载体的构建、组织表达 和功能研究 2025年 表达 的影响,试验以鸡的肝脏和脂肪组织cDNA为模板,PCR扩增鸡TXNRD1基因编码序列(CDS),测序鉴定后用生物信息学分析编码蛋白及其特性,构建鸡TXNRD1基因的真 核 表达 载体,将其转染鸡肝癌细胞系(LMH)后对表达 产物用Western-blot鉴定,采用实时荧光定量PCR检测LMH细胞中过表达 TXNRD1基因对脂类代谢相关基因表达 的影响,以及鸡不同组织TXNRD1基因的表达 情况。结果表明:获得了鸡TXNRD1基因1497 bp的CDS片段,共编码499个氨基酸;该蛋白分子量为54818.7 u,理论等电点pI为6.03,不稳定系数为34.60(<40),为稳定蛋白,平均亲水性为-0.168(<0),为亲水蛋白质;构建真 核 重组表达 载体gga-TXNRD1/pCMV-3Tag-9在LMH细胞中成功融合,并表达 鸡TXNRD1-MYC;在LMH中过表达 TXNRD1基因后LPL基因表达 量显著下降(P<0.05),FASN基因表达 量显著上升(P<0.05);TXNRD1基因在小肠、肾脏中表达 量较高,在肝脏、腿肌、腺胃、胸肌表达 量较低。说明TXNRD1基因对鸡肝脏脂类的合成具有促进作用。关键词：真核表达载体 从江香猪DDX6基因克隆、组织表达 分析及真 核 表达 蛋白鉴定 2025年 表达 分析,并构建真 核 表达 载体,鉴定其表达 与细胞定位,为研究DDX6在抗病毒免疫应答中的作用奠定基础。结果表明:成功克隆了从江香猪DDX6基因CDS区,从江香猪DDX6基因CDS区序列全长1452 bp,编码483个氨基酸。DDX6蛋白为可溶性蛋白,不存在跨膜结构,拥有多个糖基化修饰位点。DDX6在从江香猪的心脏、肝脏和脾脏等组织中均有表达 。DDX6在淋巴结的表达 量显著高于其余组织,在骨骼肌的表达 量则相对最低。DDX6在猪肺泡巨噬细胞传代细胞系(PAM-CD163)中主要定位于细胞质,重组蛋白Myc-DDX6具有良好的反应原性。以上试验结果为进一步探究DDX6基因的生物学功能奠定基础。关键词：从江香猪 生物信息学 真核表达载体 马山黑山羊MAPK8基因克隆、生物信息学分析及真 核 表达 载体构建 2025年 真 核 表达 载体,为山羊乳腺发育及MAPK8基因在转分化过程中的研究提供试验材料。[方法]参考山羊MAPK8基因序列(GenBank登录号:XM_018042429.1)设计引物,利用PCR扩增马山黑山羊MAPK8基因CDS序列并克隆;分别使用DNAStar和Mega 11.0软件进行序列比对及系统进化树构建,并利用ProtParam、ProtScale等软件进行生物信息学分析;构建真 核 表达 载体并进行慢病毒包装后收集病毒液上清,感染马山黑山羊成纤维细胞,并通过实时荧光定量PCR检测感染病毒组和对照组MAPK8基因表达 水平。[结果]马山黑山羊MAPK8基因CDS区全长1 155 bp,编码384个氨基酸,蛋白分子质量为43.98 ku,分子式为C_(1968)H_(3114)N_(528)O_(569)S_(22),等电点(pI)为7.13。相似性比对结果显示,马山黑山羊与不同物种间MAPK8基因氨基酸序列相似性均高于85%,表明MAPK8氨基酸序列较为保守。系统进化树显示,马山黑山羊MAPK8基因氨基酸序列与牛的亲缘关系最近,与斑马鱼的亲缘关系最远。马山黑山羊MAPK8蛋白为亲水性,不属于跨膜蛋白,主要分布在细胞质(52.2%)、线粒体(26.1%)、细胞核 (17.4%)和细胞膜(4.3%)中,含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(第26―321位氨基酸处)。MAPK8蛋白二级结构包括无规则卷曲、α-螺旋、β-转角和延伸链。互作蛋白预测显示,MAPK8蛋白可能与MAPK9、JUN、TP53、FOS、JUNB、MAP2K4、MAP2K7、MAPK8IP1和NFATC3蛋白存在互作。试验成功构建MAPK8基因慢病毒真 核 表达 载体pCDH-CMV-MAPK8-mchery-Puro,转染马山黑山羊成纤维细胞后产生红色荧光信号,试验组细胞内MAPK8基因表达 量极显著高于对照组(P<0.01)。[结论]本研究成功克隆了马山黑山羊MAPK8基因CDS序列,并构建了pCDH-CMV-MAPK8-mchery-Puro真 核 表达 载体,为山羊MAPK8基因功能及应用�关键词：生物信息学 真核表达 重组猪巨噬细胞集落刺激因子的真 核 表达 质粒及其构建方法和应用 真 核 表达 质粒及其构建方法和应用，该构建方法包括以下步骤：将合成的猪巨噬细胞集落刺激因子基因克隆至PUC57质粒中，得到PUC57‑PM‑CSF质粒；以PUC57‑PM‑CSF质...牛源IFI6基因的克隆及其蛋白生物信息学分析与真 核 表达 载体构建 2025年 真 核 表达 载体,试验采用RT-PCR方法扩增牛肾细胞(MDBK)的IFI6基因,对其蛋白的理化性质、蛋白亲/疏水性、信号肽、跨膜结构域、二/三级结构进行预测分析,并构建牛源IFI6基因真 核 表达 载体pEGFP-N1-IFI6。结果:牛源IFI6基因开放读码框序列长度为405 bp,编码134个氨基酸,蛋白分子质量为32425.61 u,等电点为5.20,不稳定系数为57.75(>40),属于不稳定疏水性蛋白质,存在信号肽和跨膜结构域;Eco RⅠ、Bam HⅠ双酶切的pEGFP-N1-IFI6重组质粒扩增出4700、405 bp条带,分别与pEGFP-N1、IFI6基因相符。结论:pEGFP-N1-IFI6真 核 表达 载体构建成功,可为家畜的抗病毒研究奠定基础。关键词：生物信息学分析 表达载体构建 鸡SOX6基因真 核 表达 载体构建及其对成肌细胞分化相关基因表达 的影响 2025年 表达 和在成肌细胞分化中的作用,采用荧光定量PCR方法检测鸡不同组织以及胚胎期(E11~E19)和出壳早期(D0、D3、D6)骨骼肌中SOX6 mRNA的表达 ;通过RT-PCR扩增并克隆鸡SOX6基因的编码序列区(CDS),经测序分析并利用生物信息学工具预测鸡SOX6蛋白的理化性质和结构功能;构建鸡SOX6基因的真 核 表达 载体并转染至鸡原代成肌细胞,Western blot技术检测重组蛋白的表达 ;利用荧光定量PCR检测过表达 和敲低SOX6基因对成肌分化相关基因表达 的影响。结果显示:SOX6 mRNA在鸡12种不同组织中均有表达 ,其中在胸肌、腿肌较高,而在肌胃和脾脏较低;SOX6 mRNA在胚胎期E11~E19表达 量逐渐增加,D6期显著高于其他时期(P<0.05);获得鸡SOX6基因编码区全长2 367 bp,共编码789个氨基酸;生物信息学分析鸡SOX6蛋白为中性、亲水性蛋白,分子量为87.533 kDa,等电点为6.99,不稳定系数为60.95,脂肪系数为62.51;构建SOX6过表达 载体并转染至鸡原代成肌细胞中,成功表达 出SOX6-MYC融合蛋白;在成肌细胞中过表达 SOX6后,肌肉分化标志基因生肌分化因子(MyoD)和肌细胞生成素(MyoG) mRNA表达 显著上升(P<0.05),而敲降SOX6后MyoD和MyoG mRNA表达 显著下降(P<0.05)。结果表明:SOX6基因对成肌细胞分化发育具有调控作用,为进一步分析SOX6基因功能奠定基础。关键词：克隆 真核表达 鸡CTCF基因真 核 表达 载体的构建及其对脂类代谢作用的研究 2025年 表达 量,发现CTCF在脑和心脏中高表达 .构建的CTCF真 核 过表达 载体转染鸡肝癌细胞系LMH(Leghorn Male Hepatoma,LMH)后,成功表达 CTCF-Myc融合蛋白.油红O染色和比色法检测显示,过表达 CTCF后,LMH细胞脂滴沉积和总甘油三酯(TG)显著增加(P<0.01),磷脂酸磷酸酶1(LIPIN1)基因表达 下调(P<0.01),固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合酶(FASN)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACACA)基因表达 显著上调(P<0.05或P<0.01).结果表明,CTCF基因可能通过调控脂质代谢相关基因表达 促进脂质沉积.
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