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盘基网柄菌自噬缺陷导致蛋白酶体活性降低的分子机制研究: 自噬是一种古老的进化机制,它将一部分底物隔离在自噬体内,并在自噬溶酶体内降解。自噬受许多自噬相关（Autophagy-related,ATG）蛋白调控,包括核心成员ATG9和ATG16。ATG9和ATG16除了具有自噬功...; 冯榕; 关键词：盘基网柄菌自噬泛素-蛋白酶体系统

磷脂酰肌醇3激酶通过Akt和ERK抑制盘基网柄菌细胞的趋电性被引量：1: 2024年; 目的磷脂酰肌醇3激酶(PI3Ks)通过调控肌动蛋白在细胞定向运动中发挥重要作用。然而,PI3Ks的结构和功能很复杂,人们对PI3Ks在细胞趋电性运动中的作用并不完全清楚。因此,本文以模式生物盘基网柄菌细胞为实验材料,探究其中的PI3K1和PI3K2在细胞趋电性运动中的作用。方法首先利用CRISPR/Cas9系统介导分别构建PI3K1编码基因pikA基因敲除突变株和PI3K2编码基因pikB基因敲除突变株;随后将2个突变株置于强度为12 V/cm的直流电场中,记录并分析两个突变株的趋电性。结果数据分析显示,野生型细胞在直流电场中的方向指数为(0.86±0.03),而pikA-和pikB-突变株在直流电场中的运动方向指数分别为(0.95±0.02)和(0.94±0.03);此外,野生型细胞在电场中的平均轨迹速度(3.34±0.08)μm/min,而pikA-和pikB-突变株的平均轨迹速度分别为(4.85±0.20)μm/min和(5.48±0.15)μm/min,t检验表明突变株和野生型的方向性指数和运动速度都存在极显著的差异。蛋白质印迹实验结果显示,pikA-和pikB-突变株中磷酸化Akt和磷酸化ERK都显著增加。结论PI3K1和PI3K2在盘基网柄菌细胞趋电性运动中可能通过增加Akt和ERK的活性发挥抑制作用。; 葛晓雪蒋锐达王晓燕高晶高润池; 关键词：细胞迁移盘基网柄菌

基于CRISPR-Cas9介导敲除盘基网柄菌erkA基因的方法建立和erkA趋电性研究被引量：1: 2023年; 以盘基网柄菌为研究对象,首先建立基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑系统的erkA基因敲除方法,DNA测序和蛋白质印迹实验都证明所设计靶点都能有效地编辑erkA;随后对erkA突变株的趋电性进行探究,发现在12 V/cm的直流电场中,erkA突变株仍维持着与野生型细胞接近的趋电性,仅在运动速度上表现出增加趋势.在盘基网柄菌中利用CRISPR/Cas9系统成功构建了基因突变株,也明确了在盘基网柄菌中erkA基因并不是细胞感应电场的关键基因.; 葛晓雪蒋锐达王晓燕高润池; 关键词：盘基网柄菌丝裂原活化蛋白激酶

MAPK信号通路在土壤微生物盘基网柄菌趋电性迁移中的机制研究: 盘基网柄菌是一种存在于自然界中的土壤微生物,常摄食土壤中的细菌、酵母菌等,且以类似人类的“农业”行为播种并收获“食物”。当环境压力(如化学、物理因素胁迫等)出现时,它将开启独特的生活方式,即从单细胞游离生活方式向形成孢子...; 蒋锐达; 关键词：盘基网柄菌 MAPKS信号通路桩蛋白 RAS

PI3K/Akt/ERK信号通路在盘基网柄菌细胞趋电性中的作用研究: 细胞定向迁移在胚胎发育、组织形成、伤口愈合、癌症发生等生理病理过程中发挥重要作用。细胞在直流电刺激下发生朝向电场的正极或负极迁移的现象称为细胞的趋电性,然而,人们对细胞响应电场的机制并不清楚。利用模式生物盘基网柄菌（Di...; 葛晓雪; 关键词：盘基网柄菌 ERK PI3K

盘基网柄菌RasD蛋白的生物信息学分析及趋电性研究: 2022年; 通过对盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)RasD蛋白进行生物信息学分析及趋电性研究,探究盘基网柄菌能否作为开发电激治疗肿瘤的生物模型.研究发现RasD蛋白含有187个氨基酸残基,是亲水性蛋白,二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主,同源比较发现盘基网柄菌细胞中的RasD蛋白与人类的Ras蛋白相似性高达72%,在12 V/cm的电场中rasD缺陷型细胞株定向迁移的速度增加,方向性降低.结果表明可以用盘基网柄菌来研究肿瘤内源性生物电场指导细胞定向迁移的机制.; 王家家葛晓雪王晓燕高晶高润池; 关键词：盘基网柄菌 RAS

盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)用于本科“细胞膜功能蛋白”探究性实验教学研究被引量：2: 2022年; 该研究对细胞生物学经典教学实验“细胞膜渗透性实验”进行重新设计。通过比较兔红细胞和盘基网柄菌细胞的“细胞膜渗透性”实验结果,配合细胞生物学“细胞质膜结构与功能”一章的教学,引导学生初步探究盘基网柄菌水孔蛋白(aquaporins,AQPs)在细胞抗低渗环境中的作用,加深理解细胞质膜中的功能蛋白对于细胞生存的重要意义。; 王晓燕蒋锐达高润池; 关键词：盘基网柄菌兔红细胞水孔蛋白

gbpC和gbpD基因在盘基网柄菌细胞趋化性和趋电性运动中的差异研究被引量：3: 2022年; 目的趋化性和趋电性是细胞定向迁移的主要方式,并在生物有机体的生理和病理过程中发挥重要作用,但二者存在差异。本文对盘基网柄菌gbpC和gbpD基因在细胞趋电性和趋化性中的作用进行对比研究,以寻找两种迁移方式之间的新差异。方法将gbpC基因突变株gefT-和gbpD基因突变株gefU-分别置于场强为12 V/cm的直流电场中,分析细胞在电场中的运动方向及运动速度,探讨细胞的趋电性变化;利用电穿孔技术将标记F-actin的Lifeact-GFP质粒转化进入细胞,用荧光显微镜观察活细胞运动时F-actin的分布;用蛋白质印迹技术定量分析细胞的肌球蛋白调节轻链(RLC)在受直流电场刺激后的磷酸化变化情况。结果gefT-突变株细胞极化消失,但保持与野生型类似的趋电性;gefU-突变株细胞发生超极化,但趋电性显著降低。在直流电场中,突变株细胞和野生型细胞的F-actin主要分布在伪足部位。在电场作用下,细胞株的肌球蛋白RLC磷酸化变化情况存在差异,即野生型细胞以时间依赖的方式发生磷酸化,gefT-突变株细胞先急剧下降,然后再上升,gefU-突变株细胞却以时间依赖方式脱磷酸化。结论本研究表明gbpC和gbpD基因在盘基网柄菌趋化性和趋电性中的作用不同,暗示了电信号与化学信号确实通过不同的机理指导细胞的定向迁移。; 蒋锐达王家家赵三军王晓燕高润池; 关键词：盘基网柄菌趋化性

一种盘基网柄菌细胞同步化方法: 本发明公开了一种盘基网柄菌细胞同步化方法，主要包括：S1：盘基网柄菌细胞培养；S2：盘基网柄菌细胞饥饿处理；S3：饥饿处理中细胞分裂情况信息采集；S4：向饥饿处理后的盘基网柄菌细胞重新提供营养物质；本发明综合了人工同步化...; 高润池王晓燕施利民

盘基网柄菌基网柄菌HtrA2基因的克隆与生物信息学分析被引量：1: 2022年; HtrA2在细胞凋亡、细胞应激反应和神经退行性病变方面起重要作用,但其机理尚不清楚。本研究以盘基网柄菌作为模式生物,利用PCR技术克隆了盘基网柄菌HtrA2基因,经双酶切鉴定和序列测定确认后,对其进行了生物信息学分析。结果表明:所克隆盘基网柄菌HtrA2基因全长2023 bp,插入方向正确,无任何突变或碱基缺失。盘基网柄菌HtrA2蛋白分子量为72.17 kD,其分子式为C3180H5047N895O996S13,理论等电点为5.90,含257个非极性氨基酸和390个极性氨基酸。该蛋白不稳定指数为39.03,其结构相对稳定。脂溶指数和总疏水性平均值分别为94.5和-0.343。盘基网柄菌HtrA2蛋白含跨膜结构和信号肽识别序列,存在明显PDZ结构域。二级结构预测发现HtrA2蛋白含α-螺旋142个,β-转角41个,无规卷曲302个,延伸链162个,其分别占比为21.95%、6.33%、46.68%和25.04%。上述研究为后期探究HtrA2蛋白的功能与线粒体功能紊乱的相关性及其在帕金森病和其他疾病发生方面的作用机制奠定了基础。; 陈苏维艾雪言刘晔叶文燕马雯慧; 关键词：盘基网柄菌克隆生物信息学

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