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百日咳毒素S1亚基的基因脱毒: 2025年; 目的对百日咳毒素(pertussis toxin,PT)-S1亚基进行基因编辑,以完成百日咳杆菌CS株的基因脱毒。方法制备百日咳杆菌CS株电转感受态细胞,电转导入携带Kana抗性基因的线性DNA重组片段,以两侧同源臂的重组与PT-S1亚基交换。用Kana抗生素筛选重组菌株,通过基因测序确定重组序列,并从重组菌株培养上清中获取PT蛋白,对其进行ELISA、Western blot及体外毒性分析。结果抗性筛选得到的重组菌株经基因组及mRNA测序,获得S1-R9K/E129G双突变菌株FE3和S1-R9K单突变菌株FE16。FE3和FE16株生长速率均略有降低,但最大菌浓度均上升,其摇瓶培养上清中PT蛋白含量分别可达796.8和185.9 ng/mL,PT蛋白可被S1亚基单克隆抗体1B7识别;FE3和FE16株PT蛋白体外毒性相比于PT标准品分别降低至0.0016%和0.0081%。结论采用电转线性DNA片段及Kana抗生素筛选的方法可对百日咳杆菌CS株进行基因编辑,获得PT蛋白毒性显著降低的基因脱毒菌株,为百日咳疫苗的进一步研究奠定了基础。; 刘宏博朱德武蔡梦瑶马林王芬胡源陈雯付烈段凯; 关键词：百日咳毒素

咳嗽≥2周成人住院患者百日咳毒素IgG水平横断面调查: 2025年; 目的调查咳嗽≥2周成人住院患者血清中百日咳毒素IgG抗体水平,评估成人迁延性及慢性咳嗽患者中百日咳感染情况,为百日咳防控提供依据。方法收集2023年7月—2024年1月宝鸡市人民医院检验科525例成人咳嗽≥2周住院患者的血清样本,采用酶联免疫吸附试验检测百日咳毒素抗体IgG(pertussis toxin IgG,PT-IgG)的浓度。分析不同浓度下病例及出院诊断分布。结果咳嗽≥2周患者血清PT-IgG浓度中位数为16.94 IU/ml,浓度≥62.5 IU/ml和≥100.0 IU/ml的患者分别有88例(16.76%)和36例(6.86%)。PT-IgG≥100.0 IU/ml的患者在<50岁人群中的检出率(13.79%,8/58)高于≥50岁人群(6.00%,28/467)。患者均没有明确的百日咳诊断史。PT-IgG≥62.5 IU/ml的患者与其他患者比较,出院诊断的分布相似,前五位诊断均为呼吸系统疾病;PT-IgG≥62.5 IU/ml和<62.5 IU/ml患者中慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)最常见,检出率分别为46.59%(41/88)和47.37%(207/437)。结论成人咳嗽≥2周住院患者中百日咳现患或近期感染者不少见。成人COPD、肺炎等常见咳嗽性疾病的临床诊治过程中,应当注意鉴别百日咳特异性原因,积极开展实验室检查明确诊断,及时隔离治疗,以阻断百日咳传播。; 李海英郭孟杨王娅娟孟庆红贾彦海李茜孙敏姚开虎; 关键词：百日咳咳嗽酶联免疫吸附试验 IGG抗体

抗百日咳毒素的抗体及其应用: 本发明提供了一种抗百日咳毒素的单克隆抗体或其抗原结合片段。本发明还涉及包含所述单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子、检测装置或药物组合物，以及所述单克隆抗体或其抗原结合片段的用途。本发明还涉及一种通过所述单克隆抗体或其抗...; 王梦舒刘大维韩玲江涛沈雪

一种百日咳毒素脱毒方法及无细胞百白破联合疫苗: 本发明提供了一种百日咳毒素（PT）的脱毒方法及无细胞百白破联合疫苗，PT抗原采用甲醛和戊二醛作为脱毒剂；脱毒顺序为先用甲醛处理脱毒，再用戊二醛脱毒。脱毒后制备的吸附无细胞百白破联合疫苗具有良好的免疫原性和效价，毒性较低，...; 连红玉郝擘李军强黄剑陈列胜朱涛周朝东

一种百日咳毒素脱毒方法及无细胞百白破联合疫苗: 本发明提供了一种百日咳毒素（PT）的脱毒方法及无细胞百白破联合疫苗，PT抗原采用甲醛和戊二醛作为脱毒剂；脱毒顺序为先用甲醛处理脱毒，再用戊二醛脱毒。脱毒后制备的吸附无细胞百白破联合疫苗具有良好的免疫原性和效价，毒性较低，...; 连红玉郝擘李军强黄剑陈列胜朱涛周朝东

百日咳毒素和丝状血凝素抗原ELISA检测方法建立及验证: 百日咳是一种危及婴幼儿和成人生命安全的急性传染病,它通过感冒、咳嗽、打喷嚏等方式进入人体,对婴幼儿和成年人的生命安全构成了极大的挑战。起初,人类只能通过抗生素类药物进行对症治疗,却无法实现预防的目的。随着抗生素类药物耐药...; 魏国良; 关键词：百日咳 ELISA 抗原

一种表征百日咳毒素成像毛细管等电聚焦电泳方法及应用: 本发明提供了一种表征百日咳毒素成像毛细管等电聚焦电泳方法及应用，其包括：（1）将百日咳毒素样品制备成上样溶液；所述上样溶液中包含：百日咳毒素、尿素、亚氨基二乙酸、精氨酸、两性电解质、等电点标记物、甲基纤维素；（2）对所述...; 李世慧何鹏王玲於洋陈丝丝张娜杨柏峰张云涛

一种表征百日咳毒素成像毛细管等电聚焦电泳方法及应用: 本发明提供了一种表征百日咳毒素成像毛细管等电聚焦电泳方法及应用，其包括：（1）将百日咳毒素样品制备成上样溶液；所述上样溶液中包含：百日咳毒素、尿素、亚氨基二乙酸、精氨酸、两性电解质、等电点标记物、甲基纤维素；（2）对所述...; 李世慧何鹏王玲於洋陈丝丝张娜杨柏峰张云涛

百日咳毒素兔多克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立和验证被引量：1: 2024年; 目的制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)兔多克隆抗体(简称多抗),建立定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并进行验证及应用。方法采用传统方法,用PT免疫青紫蓝兔制备PT兔多抗。优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并进行特异性、线性、准确性、精密性、灵敏度验证。采用建立的方法对脱毒过程样品及其他百日咳抗原纯化过程样品菌毛蛋白(fimbriae proteins,FIM)原液中PT抗原含量进行检测。结果PT抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的工作条件为PT兔多抗包被浓度为1μg/mL,酶标抗体稀释度为1∶8000。此检测系统能与PT纯化蛋白发生特异性反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉类毒素、破伤风类毒素均未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法线性检测范围在25~400 ng/mL之间;PT高、中、低浓度回收率分别为103.27%、91.48%、103.52%;酶标板内和板间的变异系数(CV)均小于10%;该方法的灵敏度为20.719 ng/mL,检测下限为41.438 ng/mL。检测5种不同脱毒工艺条件下、不同取样时间点的35批样品,其抗原含量变化均符合脱毒反应变化趋势。结论成功制备了PT兔多抗,并建立了精密性和准确性良好的定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,可用于组分百白破联合疫苗生产过程中化学脱毒样品的抗原含量检测。; 宋欣然张茗婧伊丽男彭少丹王帆张国强司伟雪朱涛; 关键词：百日咳毒素多克隆抗体酶联免疫吸附试验

Lowry法检测百日咳抗原中百日咳毒素、丝状血凝素、黏附素含量方法验证: 2024年; 目的对Lowry法2检测百日咳抗原中百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)、黏附素(pertactin, Prn)含量进行方法学验证。方法将PT、FHA、Prn国家标准品系列稀释, 在0~50 μg/ml浓度范围内建立标准曲线。在已知浓度的PT、FHA、Prn精制液中加入国家标准品配制加标样品, 采用Lowry法2检测蛋白含量, 考察准确度和精密度。对原液生产中使用的400 mmol/L PBS进行专属性试验。分别在检测后10、20、30 min再进行检测以考察方法的耐用性。结果回收率介于91.1%~110.7%;准确度相对标准偏差为1.8%~9.2%, 批间精密度相对标准偏差为2.6%~6.2%;400 mmol/L PBS对样品测定无干扰;检测样品在30 min内读取数据有效。结论该法具有良好的线性、准确性、精密性、专属性和耐用性, 可用于百日咳抗原中PT、FHA、Prn含量的测定。; 邢盛宇邓海清季庚辰张艳红张钰东王宇吴晗尹珊珊; 关键词：百日咳菌苗蛋白检测

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