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云南省登革4型病毒全基因组序列特征研究被引量：5: 2017年; 目的阐明云南省2015年5株登革4型病毒(DENV-4)流行株的全基因组序列特征及分子流行病学特点。方法采用C6/36细胞培养法分离病毒,用RT-PCR法扩增新分离DENV-4的全基因组序列,采用ClastalX1.83和MEGA6等生物信息学软件进行核苷酸和推导氨基酸序列同源性及系统进化分析。结果从2015年云南省瑞丽市登革热患者血清中分离到5株DENV-4(本地病例2株,来自缅甸腊戍和南坎市输入性病例3株)。经RT-PCR和序列测定,获得这5株DENV-4的全基因组序列(10 661nt),其开放读码框(103-10 264)编码3 386个氨基酸。全基因组或结构蛋白和非结构蛋白基因序列的系统进化和同源性分析表明,云南分离株间高度同源并聚集为一个进化支,并与泰国不同年代DENV-4基因I型(G-I)流行株具有较近的进化关系和较高的同源性,同属G-I。云南株和泰国株均与同基因型的DENV-4原型株(H241,1956年菲律宾)和中国广州1990年B5株亲缘性和同源性都较低。云南株与H241株在结构蛋白或非结构蛋白中分别存在21和45个氨基酸位点差异。结论首次获得云南省DENV-4分离株的全基因组序列并发现它们与近期东南亚DENV-4G-I流行株亲缘关系较近。首次证实云南省存在DENV-4本地流行,传播来源为相邻缅甸北部边境地区。云南分离株某些氨基酸位点的改变是否与其抗原性和毒力有关尚需进一步研究。; 胡挺松张海林刘永华邓波尹小雄徐松淼李萍范泉水张富强; 关键词：登革4型病毒全基因组系统进化分析同源性分析

我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性及全基因组序列分析被引量：1: 2014年; 目的对我国云南登革4型病毒分离株（Ban18）及其减毒株（Ban18 HK20和Ban18 HK30）的生物学特性进行分析,测定原株和减毒株的全基因组序列并进行比对,分析与毒力相关的位点。方法将各毒株在Vero细胞传代后进行空斑形态观察、小鼠脑内致病力和免疫原性检测;减毒株经空斑纯化后,挑选单克隆,检测其小鼠脑内致病力;提取减毒株基因组RNA,RT-PCR法分段扩增其全基因组序列并测序,应用DNAStar软件包进行序列比对分析。结果Ban18 HK20和Ban18 HK30毒株在Vero细胞上形成的空斑较其原株稍大,但边界较模糊;两个代次的减毒株对KM小鼠不致病,对2~4日龄乳鼠的脑内致病力也明显低于其原株;Ban18原株和Ban18 HK20毒株免疫的小鼠经3个剂量的国际标准株H241株脑内攻击后,均无死亡,但Ban18 HK30毒株与对照组相比,未显示出保护作用;Ban18 HK20毒株的9个克隆株中,3株对乳鼠的脑内致病力低于其他6株克隆株,Ban18 HK30毒株的5个克隆株对乳鼠的脑内致病力无明显差异;减毒株的两个代次病毒与其原株存在3个氨基酸[A→V（C-111）、I→T（E-155）、I→L（E-369）]和一个核苷酸[G→A（3’UTR-219）]的共同差异。结论通过原代地鼠肾细胞传代的两个代次（HK20和HK30）病毒对小鼠的脑内致病力明显减弱,其中Ban18 HK20免疫原性较好,并从空斑克隆中筛选出3株毒力较Ban18 HK20更低的克隆株;C-111、E-155、E-369和3’UTR-219突变与毒力减弱密切相关。; 陈柠俞永新徐宏山刘欣玉王志伟杨立宏岳广智贾丽丽董关木李玉华; 关键词：登革4型病毒减毒株毒力免疫原性

我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究: 目的对我国云南登革4型病毒分离株（Ban18）及其减毒株（Ban18 HK20和Ban18HK30）病毒的生物学特性进行研究,并将减毒株的二个代次病毒进行空斑纯化以获得毒力更低的病毒克隆;测定母株和减毒株病毒的全基因组序...; 陈柠俞永新徐宏山刘欣玉王志伟杨立宏岳广智贾丽丽董关木李玉华; 关键词：减毒株毒力免疫原性

我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究: 【目的】对两株登革4型病毒减毒株(Ban18HK20和Ban18HK30)的部分生物学特性进行研究,同时测定其全基因组序列并与母株(Ban18)序列比较,分析与毒力相关的位点。【方法】将两株减毒株及其母株在Vero细胞传...; 陈柠俞永新贾丽丽徐宏山刘欣玉王志伟岳广智杨立宏董关木李玉华; 关键词：登革4型病毒减毒株毒力免疫原性

我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究: [目的]对两株登革4型病毒减毒株(BAN18 HK20和BAN18 HK30)的部分生物学特性进行研究,同时测定其全基因组序列并与母株(BAN18)序列比较,分析与毒力相关的位点.[方法]将两株减毒株及其母株在VERO细...; 陈柠; 关键词：登革4型病毒减毒株毒力免疫原性

抗登革4型病毒中和表位特异性抗体及其在治疗登革4型病毒感染中的应用: 本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明登革4型病毒ED3的新的中和表位LTLH，与上述中和表位特异性结合的抗登革4型病毒ED3的单克隆抗体1G6及其在制备治疗登革4型病毒感染药物中的应用。; 郭亚军戴建新邓永强秦成峰李博华王华菁

登革4型病毒深圳分离株E基因序列测定及其系统发生分析被引量：3: 2010年; 目的对深圳市2005年从登革热患者急性期血液中分离到的1株登革病毒进行型别鉴定,从分子水平分析分离株的生物学特征,追踪其可能的地域来源。方法用C6/36细胞培养增殖病毒株SZ0524,收集病毒液。用逆转录-半套式PCR(RT-semi-nested-PCR)方法和荧光PCR方法对其进行型别鉴定。扩增病毒E基因后进行序列测定,并与不同国家和地区的登革病毒株进行同源性比较和进化树分析。结果深圳市登革病毒分离株用4型特异性引物扩增出392bp的特异性条带,荧光PCR进一步证实了分离的病毒株为登革4型病毒。SZ0524与登革病毒4型国际标准株H241株在E基因上核苷酸同源性为99.7%,而与登革病毒1、2、3型国际标准株HAWAII、NGC、H87同源性分别为57.0%、59.2%和56.2%。基因进化树显示SZ0524株与D4-73NIID株和D4-61NIID株亲缘关系最近,其次为H241,在进化树的同一分支上,属基因Ⅰ亚型。结论从分子水平证明从深圳市登革热患者血清中分离到的毒株确为DEN-4型病毒。结合流行病学调查资料,证实此病例为输入性感染病例,该毒株最有可能来源于东南亚一带。; 阳帆何建凡冼慧霞何雅青张海龙姚相杰杨洪; 关键词：登革4型病毒 E基因系统发生树

云南登革4型病毒的鉴定及NS1和NS2a基因序列分析被引量：11: 2008年; 目的对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果从白纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒,分别命名为M110和M113,这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变,脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT-PCR扩增、序列测定,证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明,M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因Ⅰ型的H241株(Y19176)同源性最高,分别为99%、98%;NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96.5%、97.1%。结论从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因Ⅰ型,表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。; 王静林张海林孙肖红付士红米竹青龚正达翟友刚唐青梁国栋; 关键词：登革4型病毒 NS1 基因型

首次从深圳市登革热患者血清中分离到一株登革4型病毒被引量：5: 2008年; 目的:对深圳市2005年登革热病原体进行分离鉴定。方法:采用酶链免疫吸附试验法和胶体金免疫层析法检测登革热疑似患者血清中的特异性IgM和IgG抗体。用C6/36细胞对早期病例血清进行病毒分离,以MGB荧光PCR方法鉴定。用逆转录-套式PCR方法对其进行型别鉴定。结果:从8份标本中成功分离到一株登革病毒,经逆转录-套式PCR方法鉴定为登革4型病毒,将其命名为DEN4-SZ0524。结论:首次从2005年登革热患者血清中分离到一株登革4型病毒,为进一步研究和控制该地区登革热提供了科学依据。; 周丽阳帆刘建军杨洪张海龙; 关键词：登革热登革4型病毒病毒分离

登革4型病毒Ban18原株及其减毒株的分子特征研究被引量：4: 2008年; 目的从分子水平上探讨登革4型病毒Ban18-30减毒株的毒力相关位点和减毒机制。方法Ban18原株及Ban18-30减毒株在Vero细胞中培养增殖,收集病毒液,经RNA抽提后RT-PCR扩增C、prM、E、NS1和3′、5′端核苷酸片段并测序,比较分析结果,研究两株病毒的分子特征。结果RT-PCR成功扩增出目的片段,对两株病毒部分基因测定序列后进行对比分析,两株病毒间在C111位和E155位各有1个氨基酸残基发生变化,在3′UTR的219位发生核苷酸改变。结论从分子水平证明两株病毒确为DEN-4型病毒,某些基因位点的变化与Ban18-30株病毒毒力减弱有关,其中E155位的突变可能关系最大。; 刘志文俞永新贾丽丽董关木; 关键词：登革4型病毒基因分析系统发生树

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