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产海洋低温淀粉糖化酶噬纤维菌CX08发酵培养基的优化
2025年
为提高菌株发酵产淀粉糖化酶的能力,该研究以噬纤维菌(Cytophaga sp.)CX08为菌种进行液态发酵,以淀粉糖化酶活力为响应值,通过Plackett-Burman(PB)试验、最陡爬坡试验及Box-Behnken(BB)试验对发酵培养基组成进行优化。结果表明,最佳产淀粉糖化酶培养基组成为:玉米淀粉42 g/L,NaNO34 g/L,K2HPO43 g/L,KCl 0.4 g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L,FeSO4·7H2O 0.02 g/L。在此优化条件下,该菌株所产淀粉糖化酶活力最高,为168.31 U/mL,是优化前的1.61倍。
孙溪于爽迟雪梅王聪郭信志魏振勇张庆芳张庆芳
关键词:生淀粉糖化酶发酵培养基响应面法
一种低温淀粉糖化酶菌筛选方法
本发明属于微物工程领域,公开了一种低温淀粉糖化酶菌筛选方法。仅通过无碘液添加透明圈初筛结合活及扫描电镜复筛即可成功筛选淀粉糖化酶菌株。不仅可以有效避免碘液对菌株的不利影响,防止一些潜在有价值的菌株因碘液反...
迟乃玉张庆芳王严迟雪梅刘春莹
一种产海洋低温淀粉糖化酶菌株的筛选方法
本发明属于物工程技术领域,公开了一种产海洋低温淀粉糖化酶菌株的筛选方法。包括以下三个步骤:微物富集培养、菌株初筛、菌株复筛,本发明较其他的筛选方法具有操作简单,成本低,高筛选率的优势。采用该筛选方法效率高,快速,大...
孙溪迟雪梅于爽王聪郭信志张庆芳迟乃玉
淀粉糖化酶的高效表达与分子改造
淀粉糖化酶(EC3.2.1.3,raw starch glucoamylase,RSGA)可以在低于淀粉糊化温度下将淀粉颗粒水解为葡萄糖。基于较低的催化温度和能耗优势,RSGA在淀粉产、乙醇发酵及多孔淀粉等领域具...
宋伟艳
关键词:生淀粉糖化酶毕赤酵母
淀粉糖化酶突变体及其编码基因和应用
本发明涉及基因工程技术领域,公开了一种淀粉糖化酶突变体及其编码基因和应用。本发明提供的淀粉糖化酶突变体反应的最适温度较低,对反应底物玉米淀粉的降解效率也有所提高,淀粉糖化酶突变体的催化活性提高,在还原糖产以及...
佟毅李义陶进刘松宋伟艳陈坚
N-糖基化改造提高Aspergillus fumigatus淀粉糖化酶的催化效率被引量:2
2023年
淀粉糖化酶(raw starch glucoamylase,RSGA)可以直接作用于未糊化淀粉颗粒。该研究基于Aspergillus fumigatus来源RSGA氨基酸序列分析发现,Asn121、Asn422和Asn610位点均为Asn-Xaa-Ser形式的糖基化基序,具有将其突变为Asn-Xaa-Thr形式糖基化基序的潜力。首先,利用NetNGlyc 1.0 Server评估突变序列N-糖基化的可能性,并获得突变体S123T(Asn121-Pro122-Thr123)、S424T(Asn422-Gly423-Thr424)和S612T(Asn610-Arg611-Thr612)。突变体在Komagataella phaffii中表达并完成糖基化,利用去糖基化EndoH处理进一步验证突变体均成功被糖基化。在此基础上,以玉米淀粉为底物,在40℃,pH 4.6的条件下分析了突变体S123T、S424T和S612T的催化效率(k cat/K m),分别是RSGA的1.31、1.29和1.15倍,这主要是由于K m值降低导致突变体对底物的亲和力增加造成的。此外,蛋白浓度及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示突变体S123T表达量提高了9.3%,且糖基化效果显著。学性质分析结果显示,重组的最适反应温度从70℃降低到60℃。研究结果表明,N-糖基化基序改造是一种有效的提高RSGA的催化效率的策略。
宋伟艳佟毅李义陶进梁颖超刘松李江华
关键词:生淀粉糖化酶N-糖基化
重组草酸青霉淀粉糖化酶学特性鉴定
2017年
【目的】了解在毕赤酵母中表达的来源于草酸青霉(Penicillium oxalicum)GXU20的重组淀粉糖化酶学特性。【方法】用3,5-二硝基水杨酸法测定pH值、温度、金属离子和化学试剂对纯化的重组淀粉糖化酶的活力的影响,同时测定的底物特异性、淀粉的吸附能力以及对不同淀粉的水解效率等,用高效液相色谱法对该水解木薯淀粉的产物进行分析鉴定,用扫描电子显微镜观察重组对不同淀粉颗粒的水解方式。【结果】重组淀粉糖化酶rPoGA15A的最适pH值为4.5,最适温度为65℃,在pH值为2.0~10.0时,重组具有较好的pH耐受性,温度小于50℃时,的稳定性好。除Ag^+、Cu^(2+)和SDS之外,其他大部分金属离子和化学试剂对重组活力影响不大。重组淀粉糖化酶对大米和玉米淀粉的活性较高,对木薯和马铃薯淀粉的活性次之,重组淀粉糖化酶rPoGA15A对不同淀粉的吸附能力与其对相应不同淀粉的水解活性大小呈正相关。扫描电子显微镜观察表明重组淀粉糖化酶对不同淀粉颗粒的降解作用明显,水解方式各有特点。高效液相色谱分析表明该重组淀粉糖化酶水解木薯淀粉的产物仅有葡萄糖。重组淀粉糖化酶rPoGA15A在40℃下对大米和玉米淀粉水解72h后水解率分别达到86.5%和71.9%。【结论】重组淀粉糖化酶具有广泛的pH耐受性,对淀粉具有高水解活性,在淀粉的水解和料同步糖化发酵产酒精中有一定的应用潜力。
徐强胜闫语丝冯家勋
关键词:生淀粉糖化酶基因克隆与表达酶学性质
罗耳阿太菌源淀粉糖化酶发酵条件的优化及鉴定被引量:1
2017年
【目的】优化罗耳阿太菌源淀粉糖化酶的发酵条件,并对其结构进行鉴定。【方法】以玉米淀粉和玉米黄浆作为发酵培养基的主要组分,对罗耳阿太菌进行发酵培养。固定接种量为5%(体积比),以罗耳阿太菌淀粉糖化酶产量(U/mL)为评价指标,在单因素试验基础上,选择培养温度(℃)、培养时间(h)、摇床转速(r/min)为优化条件,采用响应面法对罗耳阿太菌源淀粉糖化酶的发酵条件进行优化。利用扫描电子显微镜观察所得对玉米、小麦、木薯、红薯、豌豆淀粉颗粒的水解效果,并用纳米级高效液相色谱与多级串联离子阱联用分析法(NanoLCESI-MS/MS),对所获得的蛋白()进行结构鉴定。【结果】罗耳阿太菌源淀粉糖化酶的最佳发酵条件为:培养温度38℃,培养时间81h,摇床转速215r/min,粗产量26.238 6U/mL。玉米、小麦、木薯、红薯、豌豆淀粉经所得水解后结构被破坏。NanoLC-ESI-MS/MS分析结果与非冗余蛋白质数据库比对可知,所得糖化酶,分子质量为61 966.69u。【结论】采用最优发酵条件获得的罗耳阿太菌淀粉糖化酶可以水解玉米、小麦、木薯、红薯、豌豆淀粉
景洁李鸿梅董金满吴洪峰
关键词:生淀粉糖化酶发酵条件优化
罗耳阿太菌源淀粉糖化酶发酵条件优化及性质表征
淀粉是一种具有淀粉水解能力的淀粉,其应用可为传统制糖工艺节约能源。但目前已报道的可产该类的微物多以蛋白胨为主要氮源进行培养,获得液化居多,鲜见直接水解淀粉糖化酶的报道[1]。本论文中,以廉价易得的玉米黄...
景洁
关键词:生淀粉糖化酶发酵条件优化
文献传递
淀粉糖化酶及其制备方法与其在淀粉水解和料同步糖化发酵产酒精中的应用
本发明公开了一种淀粉糖化酶的制备方法及其在淀粉水解和料同步糖化发酵产酒精中的应用。本发明提供一种经过密码子优化后的淀粉糖化酶基因,其核苷酸序列为如下A1)‑A5)中任一所示:A1)序列表中序列3;A2)序列表中...
冯家勋徐强胜闫语丝
文献传递

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