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猪胸膜肺炎放线杆菌通过Adh诱导猪肺泡巨噬细胞氧化应激: 2025年; 【背景】猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)可导致严重的肺脏炎性损伤。细胞氧化应激与肺脏炎性损伤密切相关,但是APP感染和细胞氧化应激之间的关系仍不清楚。【目的】明确APP感染和细胞氧化应激之间的关系并对其机制进行初步探索,从而为进一步阐明APP致病机理奠定基础。【方法】APP野生菌5b(5b WT)和Adh基因缺失菌(5bΔAdh)分别感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)后,荧光显微镜观察细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,RT-qPCR和Western blotting检测氧化应激相关分子的表达变化,利用NLRP3炎性体抑制剂MCC950处理细胞,分别感染5b WT和5bΔAdh后,生化反应法检测细胞内乳酸和丙酮酸含量,流式细胞术检测细胞内ROS水平及线粒体膜电位变化情况;采用tandem mass tag(TMT)标记定量蛋白质组学测序分析细胞蛋白表达变化并检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的释放情况。【结果】免疫荧光和流式细胞术检测结果均显示,5b WT组ROS水平明显高于5bΔAdh组,但经MCC950处理后可以逆转这一上升趋势;生化指标检测结果表明,相较于5bΔAdh组,5b WT组的丙酮酸和乳酸的含量下降更显著,而且经过MCC950抑制NLRP3活性后,细菌感染组的丙酮酸和乳酸的含量均有显著回升,与对照组无显著差异;5b WT和5bΔAdh感染后,猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)中氧化应激关键转录因子核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和GCLM均呈现出下降的趋势;Western blotting结果表明5b WT和5bΔAdh组烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(nicotinamide adenine dinucleotide oxidase 2,NOX2)含量增高,并且5b WT组含量升高更明显;蛋白质组学分析表明共有15个蛋白的表达出现显著变化,GO分析发现这些差异蛋白主要参与ATP代谢、嘌呤代谢、炎症等重要生物学过程,KEGG分析发现这些蛋白与炎�; 尹小丽文博王瑞彪胡建和张鑫赫白跃宇丁轲丁轲王艳辉王磊; 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌猪肺泡巨噬细胞 ADH 活性氧线粒体损伤

猪肺炎支原体感染猪肺泡巨噬细胞诱导氧化应激反应机制的初步研究: 2025年; 为了明确猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)体外感染猪肺泡巨噬细胞是否会诱导细胞发生氧化应激反应,并初步揭示相关机制,试验分别用5×10^(6),1×10^(7),2×10^(7),5×10^(7)CCU/mL Mhp感染猪肺泡巨噬细胞,以未感染Mhp的细胞为对照,并分别于第6,12,18,24,36小时收集细胞,检测氧化应激相关指标[活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、还原型一氧化氮合成酶(induciblenitric oxide synthase,iNOS)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性];根据氧化应激相关指标的测定结果,选择氧化应激水平最明显的感染浓度和时间点,采用荧光定量PCR方法检测氧化应激通路相关因子{核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor2,Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1[NAD(P)H:quinoneoxidoreductase-1,NQO1]、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)}的mRNA表达水平,并采用Western-blot方法检测上述因子的蛋白表达水平。结果表明:与正常细胞比较,4个浓度的Mhp感染细胞中ROS水平在第6,12,18,24,36小时均显著升高(P<0.05);5×10^(6)CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度仅在第24小时显著升高(P<0.05),1×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度在第6,12,18小时显著升高(P<0.05),2×10^(7)CCU/mL和5×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞的NO浓度在第6,12,18,24小时显著升高(P<0.05);5×10~(6)CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量仅在第36小时显著升高(P<0.05),1×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第24,36小时显著升高(P<0.05),2×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第6,12,18,36小时显著升高(P<0.05),5×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞的MDA含量在第6,18,24小时显著升高(P<0.05);5×10^(6)CCU/mL Mhp感染细胞的iNOS活性在第6,12,24,36小时显著升高(P<0.05),1×10^(7)CCU/mL Mhp感染细胞iNOS活性在第6,12,18; 周颖陈忠伟段群棚程珂林昌华许艺兰张胜斌覃国喜许心婷杨讯业秦毅斌赵硕秦毅斌陈婷婷徐悦何颖卢冰霞; 关键词：猪肺炎支原体核因子E2相关因子2 血红素加氧酶-1

桑叶多糖对猪肺泡巨噬细胞的免疫调节作用: 2024年; [目的]探究桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)对猪肺泡巨噬细胞免疫功能的影响及其作用机制。[方法]以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,通过CCK-8方法检测不同浓度MLP作用后猪肺泡巨噬细胞的增殖率,筛选MLP的适宜作用浓度。将细胞分成空白对照组(BC组)、阳性对照组(LPS组)和不同浓度MLP组,通过Griess法检测猪肺泡巨噬细胞中一氧化氮(NO)释放量;利用中性红吞噬试验检测猪肺泡巨噬细胞吞噬能力;使用ELISA法测定猪肺泡巨噬细胞中白细胞介素-10(IL-10)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;利用实时荧光定量PCR检测TNF-α、Toll样受体4(TLR4)、IL-6、IL-10以及核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量;通过Western blotting检测猪肺泡巨噬细胞中TLR4和p65蛋白表达量。[结果]与0μg/mL MLP组相比,MLP浓度为20、40和80μg/mL时猪肺泡巨噬细胞增殖率极显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性,后续选择20、40和80μg/mL MLP进行试验。与BC组相比,不同浓度MLP组猪肺泡巨噬细胞吞噬率和NO释放量极显著升高(P<0.01)。ELISA检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中IL-6和TNF-α含量显著或极显著高于BC组(P<0.05;P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,MLP浓度为40和80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中TNF-α、IL-6和TLR 4基因mRNA表达量均极显著高于BC组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示,MLP浓度为80μg/mL时,猪肺泡巨噬细胞中p65和TLR4蛋白表达量极显著高于BC组(P<0.01)。[结论]MLP能激活猪肺泡巨噬细胞,显著促进NO的释放以及IL-6、TNF-α的分泌,具有良好的免疫调节活性,其免疫调节机制与巨噬细胞表面TLR4的激活相关。; 韩辰淼王靖萱杨海峰陈晓兰卜仕金; 关键词：猪肺泡巨噬细胞免疫调节细胞因子

ASFV感染对猪肺泡巨噬细胞线粒体功能的影响: 非洲猪瘟(Afican swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(Afican swine fever virus)感染引起的猪的高热、急性和高死亡率的烈性传染病,自2018年爆发以来给我国养猪业和生猪产业带来了...; 张紫薇; 关键词：非洲猪瘟病毒猪肺泡巨噬细胞线粒体功能

猪肺泡巨噬细胞健康细胞系及构建方法与应用: 本发明公开了猪肺泡巨噬细胞健康细胞系及构建方法与应用，该猪肺泡巨噬细胞健康细胞系的保藏编号为：CGMCC No：21498。本发明的猪肺泡巨噬细胞健康细胞系采用特殊的细胞培养液结合自然驯化选择的方法筛选100％健康的猪肺...; 崔现兰崔楼明崔楼耀楼兵

一种靶向敲除STAT1基因的sgRNA、猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法和应用: 本发明提供了一种靶向敲除STAT1基因的sgRNA(short guided RNA)、猪肺泡巨噬细胞系及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向敲除STAT1基因的sgRNA，所述sgRNA的正义链如...; 罗廷荣张丽媛李晓宁梁东立

猪繁殖与呼吸综合征病毒促进猪链球菌2型感染猪肺泡巨噬细胞的初步研究被引量：12: 2024年; 为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)对不同毒力猪链球菌2型(SS2)感染巨噬细胞的影响,本研究建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染永生化猪肺泡巨噬细胞(iPAM)的模型,实验分为4组:HA单独感染组(HA组)、PRRSV-HA共感染组(PRRSV-HA组)、T1/5单独感染组(T1/5组)和PRRSV-T1/5共感染组(PRRSV-T1/5组),利用该模型通过黏附试验、侵入试验和细胞内存活试验检测PRRSV对HA和T1/5黏附、侵入iPAM细胞及对该细胞存活率的影响,进一步利用荧光定量PCR方法检测各感染组iPAM模型细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平。黏附试验结果显示,HA感染2 h后,PRRSV-HA组细菌对细胞的黏附水平极显著高于HA组(P<0.01或P<0.001);T1/5感染6 h后,PRRSV-T1/5组细菌对细胞的黏附水平极显著高于T1/5组(P<0.001),表明PRRSV与HA或T1/5共感染可以促进HA和T1/5对iPAM模型细胞的黏附,且HA对iPAM细胞的黏附水平高于T1/5。侵入试验结果显示,感染4 h后,共感染组细菌侵入iPAM细胞中的数量比单独感染组极显著增多(P<0.01或P<0.001)。细胞内存活试验结果显示,感染2 h后,共感染组细菌的存活率比单独感染组极显著升高(P<0.001)。荧光定量PCR试验结果显示,感染4 h时,共感染组iPAM细胞中细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IFN-β)的转录水平极显著高于单独感染组(P<0.001)。本研究首次建立了高致病性PRRSV Li11株和SS2强毒株HA或无毒菌株T1/5共感染i PAM的模型,基于该模型研究首次发现PRRSV感染不仅促进了不同毒力SS2对i PAM细胞的黏附、侵入及SS2在iPAM细胞内的存活,还可以协同SS2显著提高该细胞中细胞因子的转录水平。本研究为进一步探究PRRSV和SS混合感染的机制提供了参考依据。; 宋冬全映颖高树基申娅敏高梦霞王瑜欣魏颖汪洋; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪链球菌共感染

脂肪酸合酶在猪圆环病毒2型调控猪肺泡巨噬细胞M1型极化过程中的作用机制研究: 猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type 2,PCV2）是导致猪圆环病毒相关疾病（Porcine Circovirus associated disease,PCVAD）的重要病原,通过抑制宿主的免...; 张琪; 关键词：PCV2 脂肪酸合酶

呕吐毒素体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞对炎性因子和m^(6)A甲基化相关基因表达的影响: 2024年; 本实验构建了呕吐毒素(DON)体外刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞模型,研究DON刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞对炎性因子IL-6、IL-8和m^(6)A甲基化修饰相关基因METTL3、METTL14、FTO、WTAP和YTHDF2表达的影响。利用2μmol/L的DON刺激细胞24h和48h,收集不同时间点细胞样品的总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量PCR检测炎性因子和m^(6)A修饰相关基因表达水平的变化,并利用蛋白免疫印迹法(WB)检测METTL3和FTO蛋白的表达水平变化。结果表明:2μmol/L的DON刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞24 h和48 h后,炎性细胞因子IL-6、IL-8的相对表达量均上调(P<0.01);与对照组相比,METTL3基因的mRNA转录水平均上调(P<0.05),FTO基因的mRNA转录水平均下调(P<0.05),METTL14基因仅在24 h后上调(P<0.05),而WTAP和YTHDF2基因在DON刺激细胞24 h和48 h后均无显著变化。蛋白免疫印迹分析结果显示,METTL3蛋白在48 h后上调(P<0.05),而FTO蛋白在24 h和48 h均下调(P<0.05)。以上结果表明,DON刺激3D4/21猪肺泡巨噬细胞可引起细胞内炎性因子的表达增加,且m^(6)A甲基化修饰相关基因METTL3的上调和FTO的下调可能与细胞炎症相关。此外,对DON组小鼠腹腔注射5 mg/kg BW DON,对照组注射等体积的磷酸盐缓冲液。3 h后检测小鼠肺脏组织中m^(6)A甲基化修饰相关基因的表达情况,与对照组相比,肺脏组织中m^(6)A甲基化相关基因METTTL3、METTL14、WTAP、YTHDF2均无显著差异;FTO下调(P<0.001)。蛋白免疫印迹分析结果显示:在DON刺激小鼠3h后FTO蛋白下调(P<0.01),表明DON在动物体内也表现出相似的效应。; 丰伟丽薛智慧赵庆博周焕焕周傲刘玉兰张晶; 关键词：呕吐毒素

稳定表达猪BRD4-BD1/2蛋白的猪肺泡巨噬细胞传代细胞系的构建及其用于ASFV增殖的效果观察: 2024年; 前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域,利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系,分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先,以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标,构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选,成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平,并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明:成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比,BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料,并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。; 吴梦丽孙华林杨吉飞赵亚茹关贵全关贵全牛庆丽; 关键词：非洲猪瘟病毒

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