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毒害艾美耳球虫配子体抗原基因DNA疫苗的构建与免疫保护效果评价: 2025年; 旨在评估毒害艾美耳球虫配子体抗原基因DNA疫苗的抗球虫免疫保护效果。本研究构建了配子体抗原基因的DNA疫苗pVAX-Engam59,并添加CpG ODN2006佐剂免疫雏鸡,通过间接ELISA和qRT-PCR方法分析雏鸡特异性抗体效价和细胞因子(IL-4、IFN-γ和TGF-β4)转录情况;最后,每只雏鸡经嗉囊感染2.5×10^(4)个毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,观察各试验组的临床症状、血便排出情况,感染8 d后检测各试验组的卵囊排出量、增重、病变记分等,并计算抗球虫指数。结果表明,与空载体pVAX-1组、未免疫攻虫组、未免疫未攻虫组相比,pVAX-Engam59、pVAX-Engam59+CpG ODN2006免疫雏鸡后血清特异性抗体水平显著升高(P<0.05),细胞因子IFN-γ、IL-4、TGF-β4表达水平显著升高(P<0.05);卵囊减少率分别为64.65%与64.48%,血便数以及病变记分显著降低、相对增重率显著增加(P<0.05);ACI值分别为156.02与159.72。综上,本研究成功构建了毒害艾美耳球虫配子体抗原基因的DNA疫苗,且与pVAX-Engam59相比,pVAX-Engam59+CpG ODN2006佐剂组免疫保护效果较好,二者均接近抗球虫中效水平,有望成为抗球虫病的候选DNA疫苗。; 冯永翠Naing Htet Aung张馨尹汪飞燕王乐乐张露朱玉许金俊许金俊刘丹丹; 关键词：毒害艾美耳球虫 DNA疫苗免疫保护

鸡毒害艾美耳球虫ROP30蛋白的原核表达及其对鸡免疫保护效果的观察: 2025年; 旨在克隆表达鸡毒害艾美耳球虫棒状体En ROP 30基因,并用重组蛋白rEnROP30免疫雏鸡,评价其免疫保护效果。以毒害艾美耳球虫第二代裂殖子(MZ-2)的总RNA为模板,RT-PCR扩增En ROP 30基因,连接至pGEM-T-Easy载体,测序后构建pET28a(+)-EnROP30表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌经测序鉴定后诱导表达,并纯化重组蛋白。用重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗rEnROP30的多克隆抗体。利用多克隆抗体,分别用Western blot和间接免疫荧光试验检测子孢子(S Z)和MZ-2中的天然EnROP30蛋白及其定位。最后,应用荧光定量PCR分析En ROP 30基因在SZ和MZ-2中的转录水平。用重组蛋白按高剂量(200μg·羽-1)、中剂量(100μg·羽-1)和低剂量(50μg·羽-1)免疫雏鸡,同时设置未免疫攻虫组和未免疫未攻虫组为对照,以成活率、平均增重、相对增重率、卵囊减少率、病变记分和抗球虫指数(ACI)为指标,评价重组蛋白的免疫保护力。结果显示:该基因全长1605 bp,编码534个氨基酸,推导相对分子质量为55.55 ku;重组蛋白大小约为65 ku,以可溶形式存在,能被小鼠抗His标签单抗和鸡抗毒害艾美耳球虫阳性血清特异性识别;在S Z和MZ-2中均检测到天然EnROP30蛋白,其分子质量大约为62 ku;EnROP30蛋白定位在S Z和MZ-2的顶端;MZ-2中En ROP 30转录水平显著高于S Z(P<0.05)。各试验组的成活率均为100%;免疫组的平均增重增加,病变记分显著降低(P<0.05);中剂量组的相对增重率(92.96%)、卵囊减少率(66.87%)和ACI值(158.96)均为最高。综上:成功克隆表达了En ROP 30基因,重组蛋白rEnROP30对毒害艾美耳球虫具有一定的免疫保护力。; 李慧中张弛严丹丽宋鹏慧汪飞燕冯茜茜刘丹丹许金俊许金俊; 关键词：毒害艾美耳球虫克隆免疫保护力

一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用: 本发明公开了一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用。所述毒害艾美耳球虫亚单位疫苗包括毒害艾美耳球虫SAG13蛋白，所述毒害艾美耳球虫SAG13蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。本发明以毒害艾美...; 谭志坚周德荣蒋嘉豪林瑞庆翁亚彪刘丽丹王新秋黄仪娟刘叶萍

毒害艾美耳球虫疫苗ENYS株TaqMan qPCR检测方法的建立: 2024年; 为了对E.necatrix ENYS株在生产中进行质控及对临床应用效果的监测,该研究对ENYS株和ENGD株进行全基因组重测序,结合生物信息学分析建立了一种TaqMan qPCR检测技术。结果显示,En-marker5测序结果与预期相符,最优的引物浓度和探针浓度分别为500nM和250 nM,标准曲线的斜率为-3.249,相关系数为0.999,可以通过Ct值对模板浓度定量,该方法检测下线为290个拷贝/反应和50个卵囊/反应,灵敏度是传统PCR的10倍;该方法可以特异性检测EnYS株,不能扩增其他种的疫苗株和野毒株以及肠道病原菌;重复性检测的变异系数小于0.6%,重复性良好。本研究针对E.necatrix EnYS株开发了一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的TaqMan qPCR检测方法,为E.necatrix EnYS株的安全性评估及临床应用提供技术支持。; 靳浩展肖文婉廖申权戚南山李娟吕敏娜蔡海明胡俊菁林栩慧宋勇乐陈祥杰朱易斌尹理君张健騑张旭孙铭飞; 关键词：毒害艾美耳球虫减毒活疫苗分子标记

毒害艾美耳球虫SAG特异性扩增引物、重组蛋白及应用: 本发明提供毒害艾美耳球虫SAG特异性扩增引物、重组蛋白及应用，所述引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。本发明设计了毒害艾美耳球虫SAG特异性扩增引物，利用该特异性扩增引物构建了毒害艾美耳球虫SA...; 苏观志覃健萍张齐吕丽萍王占新周庆丰王定爱温家明方焕新

毒害艾美耳球虫MIC3蛋白的原核表达及其功能初析: 鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种重要禽病,对养鸡业危害严重。球虫是专性细胞内寄生虫,虫体成功入侵宿主细胞是建立感染的前提。因此,研究与入侵过程相关的蛋白分子及其功能,有助于筛选疫苗的潜在抗原和新的药物作用靶点。微线体蛋白...; 严丹丽; 关键词：毒害艾美耳球虫克隆表达免疫保护

鉴别毒害艾美耳球虫的野毒株和疫苗株的引物和方法: 本申请涉及鉴别毒害艾美耳球虫野毒株和疫苗株的引物和方法，该引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示；所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。利用所述引物对毒害艾美耳球...; 孙铭飞蔡海明肖文婉陈兵廖申权戚南山李娟吕敏娜林栩慧胡俊菁宋勇乐张小慧尹理君陈祥杰朱易斌张健騑

毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析被引量：1: 2024年; 旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。; 彭月梅叶状汪飞燕王礼跃冯永翠王乐乐候照峰许金俊许金俊刘丹丹; 关键词：毒害艾美耳球虫克隆表达反应原性免疫荧光定位

鸡毒害艾美耳球虫EnROP17和EnROP30的原核表达及其免疫保护效力分析: 鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠道引起的一种寄生虫病,其病原有7种,其中毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）主要危害8～18周龄的育成鸡,可引起鸡的急性小肠球虫病,导致育成鸡的大批死亡。迄今,防治鸡球虫病的...; 李慧中; 关键词：毒害艾美耳球虫原核表达免疫保护效力

毒害艾美耳球虫表面抗原SAG8与SAG36的原核表达与免疫保护效果评价: 鸡球虫病是由艾美耳属球虫寄生于鸡肠道引起的寄生虫病,给养禽业造成严重的危害。鸡球虫病的病原有7种,其中毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）主要侵害8-18周龄鸡,可导致鸡的大批发病甚至死亡。目前,鸡球虫病的...; 张弛; 关键词：毒害艾美耳球虫表面抗原克隆表达免疫保护

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