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昆明地区2019年HIV/HCV共感染患者HCV核衣壳蛋白基因分型被引量:3
2023年
目的 基于丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein)基因序列了解昆明地区人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)/HCV共感染患者中HCV基因型及基因亚型流行情况。方法 2019年3—8月在云南省传染病医院收集临床诊断为HIV/HCV共感染住院且户籍地为昆明所辖14个县级市、区及县的患者血清,从血清中提取病毒RNA,反转录合成第一链cDNA,采用HCV核衣壳蛋白基因特异性引物进行巢式PCR扩增。结果 共收集到临床诊断疑似HIV/HCV患者样本64例,采用HCV核衣壳蛋白基因特异性引物扩增,其中17例样品扩增阳性。序列分析结果显示,有9例病例的序列与HCV 3b基因亚型序列位于同一个进化分支,苷酸同源性为93.3%~95.2%;5例病例的序列与HCV 1b基因亚型序列位于同一个进化分支,苷酸同源性为96.8%~97.6%;1例病例序列与HCV 3a基因亚型序列位于同一个进化分支,苷酸同源性为95.2%;1例病例序列与HCV 6n基因亚型序列位于同一个进化分支,苷酸同源性为97.9%;1例病例与HCV 6u基因亚型序列位于同一个进化分支,苷酸同源性为98.4%。结论 昆明地区存在着HCV 1b、HCV 3a、HCV 3b、HCV 6n和HCV 6u等多个基因型/基因亚型HCV流行,以HCV 3b为主要流行的基因亚型。
朱燕涛刘俊仪张米张念李健健杨壁珲亢丽娟李雄君刘家法王佳丽
关键词:丙型肝炎病毒基因亚型核衣壳蛋白
许氏平鲉淋巴囊肿病毒核衣壳蛋白基因序列及基因型分析
许氏平鲉,属于鲉形目、平鲉科、平鲉属,又名黑鲪,俗称黑鱼,刺毛等,广泛分布于我国渤海、黄海和东海近海岩礁地带,日本和朝鲜沿岸也均有分布。本研究从许氏平鲉淋巴囊中病毒肿瘤中分离到该病毒基因组DNA,通过PCR扩增,克隆测序...
郑风荣郭湘云王波李华
关键词:许氏平鲉淋巴囊肿病基因序列基因型分析
犬瘟热病毒融合蛋白、血凝蛋白、基质蛋白核衣壳蛋白基因DNA联合免疫的研究被引量:4
2015年
为研究犬瘟热病毒(CDV)融合蛋白(F)、血凝蛋白(H)、基质膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)基因酸联合免疫的效力,本研究分别构建了表达经哺乳动物密码子优化的CDV F、H、M和N蛋白基因的真重组表达质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM和p CAGG-CDVN;将其分别转染BHK-21细胞后通过间接免疫荧光试验表明,目的蛋白均获得正确表达。此外,将等量混合的重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM(3组份DNA疫苗)或重组质粒p CAGG-CDVF、p CAGG-CDVH、p CAGG-CDVM、p CAGG-CDVN(4组份DNA疫苗),分别以500μg/只经肌肉注射途径免疫A组(6只)或B组(6只)比格犬,间隔4周以相同剂量、途径加强免疫一次,并于初次免疫前、后不同时间检测血清CDV中和抗体。中和试验结果显示,A组和B组免疫犬,二免4周时,CDV中和抗体滴度平均值达到峰值,分别为6 log2和5.64 log2;在初免54周时,CDV中和抗体滴度均仍然维持5 log2。因此,3组份DNA疫苗为具有良好应用前景的犬瘟热候选疫苗。
秦立得蒋伟王喜军帅磊葛金英步志高
关键词:犬瘟热犬瘟热病毒DNA疫苗
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)ZZ2004株核衣壳蛋白基因的克隆及原表达被引量:1
2014年
本研究旨在克隆并表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的核衣壳蛋白(N)。根据IBV ZZ2004株的N基因设计1对引物,提取IBV ZZ2004株的RNA,利用RT-PCR技术扩增大小约1.23kb的片段,将其插入克隆载体pGEM-T构建pGEMT-N。将pGEM-T-N用EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切,将酶切后的N基因片段克隆到表达载体pGEX-6P-1,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌中,经IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE电泳,结果显示外源基因获得了表达且为可溶性蛋白;Western blotting检测结果显示N蛋白可与相应的IBV ZZ2004阳性血清发生特异性反应,结果表明N蛋白有一定的生物活性。本研究为IBV诊断试剂盒及新型IBV重组亚单位疫苗研制奠定基础。
贺会利徐敏余娟魏小兵闫艺婷勾肖晶刘兴友
关键词:核衣壳蛋白可溶性表达
新城疫病毒核衣壳蛋白基因在大肠埃希菌中的表达、纯化及其活性分析被引量:2
2013年
构建新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的原表达载体,并将其在宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中表达。以NDV La Sota株NP基因序列为模板,设计特异性引物,通过PCR扩增获得NP蛋白全长基因片段,定向插入原表达载体pET-30a,构建重组质粒pET-NDV NP;将构建的重组质粒转化宿主菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,表达出目的蛋白,并采用亲和层析的方法纯化表达蛋白;表达蛋白采用Western blotting方法检测其反应原性。结果显示,成功克隆了新城疫病毒NP基因全长,片段序列1470bp;构建的pET-NDV NP载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误;转化表达宿主菌后经SDS-PAGE检测结果显示目的基因得到成功表达,且表达蛋白经Ni-NTA镍离子亲和层析法被成功纯化,蛋白质浓度为3mg/mL;Western blotting检测结果显示表达蛋白具有良好的反应原性。试验结果表明,成功构建了含有新城疫病毒核衣壳蛋白基因的原表达载体,成功表达、纯化得到了NDV NP蛋白
徐彦召王青杭柏林尚田田赵志雨胡建和
关键词:新城疫病毒NP蛋白纯化
新城疫病毒核衣壳蛋白基因在大肠埃希菌中的表达、纯化及其活性分析
构建新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的原表达载体,并将其在宿主菌BL21(DE3)感受细胞中表达。以NDV La So...
徐彦召王青杭柏林尚田田赵志雨胡建和
关键词:新城疫病毒NP蛋白纯化
牛副流感病毒3型核衣壳蛋白基因的真表达被引量:2
2012年
根据牛副流感病毒3型(BPIV-3)内蒙09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064)设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出牛副流感病毒3型分离株的核衣壳蛋白(N)基因,通过NheI和NotI限制性内切酶位点亚克隆至真表达载体pcDNA3.1/Zeo(+),获得真重组质粒pcDNA3.1-N。采用Superfect转染试剂将重组质粒转染至BSR细胞中,转染后的BSR细胞经间接免疫荧光试验和RT-PCR方法检测,重组质粒pcDNA3.1-N在BSR细胞中能正确表达N蛋白。本研究结果为BPIV-3新型疫苗的研制奠定基础。
师新川温永俊王凤雪王炜王建科程世鹏武华
关键词:真核表达N基因
改良菌落PCR法筛选、鉴定DHBV部分核衣壳蛋白基因的重组克隆被引量:1
2012年
目的优化并验证改良菌落PCR程序的有效性。方法经常规PCR扩增DHBV编码核衣壳蛋白与DNA多聚酶重叠区的部分苷酸片段(DHBc-dp),纯化特异性扩增产物并连入pMD 18-T载体,转化DH5α感受态细胞后涂布于Amp加倍的LB平板,记为亲代样品(PS),37℃培养12h,室温放置4h~8h。无菌操作挑取细菌转入优化的PCR反应液扩增、鉴定;余菌体室温放置完成二次生长。PS剩余PCR鉴定产物继代转化并涂布LB平板,记为继1代样品(F1S),同样进行菌落PCR鉴定。选取PS和F1S中PCR强阳性样品进行扩增及菌液PCR、质粒PCR、质粒酶切和测序鉴定。结果挑菌后的菌落二次生长成面积扩大的菌苔;优化菌落PCR反应体系保持、甚或提高了原有方法的高度特应性和稳定性;携外源目的片段的重组质粒在菌落PCR反应过程中能保持结构完整,并能在继代转化宿主细胞中忠实复制与扩增。结论改进的菌落PCR程序,继承了既有菌落PCR程序鉴定重组克隆的特异性和高效性,并能有效预防阳性转化子的丢失;同时,在增加优势抗性菌落生长量的前提下有效地抑制了卫星菌落的生长。
王玉于爱莲姜世金施鲁笛陈国敏高鹏
关键词:DHBV核蛋白基因菌落PCR
非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达
为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明...
关键词:犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因原核表达
非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达
为分析当地非典型犬瘟热病毒(cDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表cDv的N基因序列设计引物,用RT-PcR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明...
毕振威王永山范红结王智群吴晓悠马金荣欧阳伟张海彬
关键词:核衣壳蛋白基因序列分析原核表达大肠杆菌

相关作者

刘秀梵
作品数:876被引量:3,940H指数:29
供职机构:扬州大学兽医学院
研究主题:新城疫病毒 禽流感病毒 单克隆抗体 重组鸡痘病毒 免疫效力
许立华
作品数:169被引量:576H指数:12
供职机构:宁夏大学
研究主题:奶牛 猪繁殖与呼吸综合征病毒 牛病毒性腹泻病毒 猪繁殖与呼吸综合征 牛呼吸道合胞体病毒
王志亮
作品数:619被引量:2,539H指数:26
供职机构:中国动物卫生与流行病学中心
研究主题:新城疫病毒 非洲猪瘟 小反刍兽疫病毒 小反刍兽疫 新城疫
文明
作品数:733被引量:2,025H指数:18
供职机构:贵州大学动物科学学院
研究主题:鸭肠炎病毒 鸭病毒性肠炎病毒 山羊痘病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 克隆
刘德立
作品数:197被引量:916H指数:17
供职机构:华中师范大学
研究主题:基因克隆 克隆表达 好氧反硝化 生物降解 真菌