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李坏死环斑病毒诱导的桃PpPDS沉默体系的优化及验证被引量：2: 2023年; 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是在桃(Prunus persica)上进行基因沉默的主要手段,现有VIGS体系效率较低,亟待开发针对桃的高效沉默体系。以桃八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因PpPDS为指示基因,探究不同侵染方式、病毒载体、温度、接种苗龄和菌液浓度对桃叶片VIGS效率的影响。结果表明,在侵染方式上,叶片注射是有效的方式;李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)载体(pCaRNA1/2和pCaRNA3)优于烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)改造后的TRV载体(pTRV1和pTRV2);温度为22℃左右PpPDS的沉默效率较高;苗龄为5~6片完全展开叶的桃苗沉默效率较高,达到85%;菌液浓度为OD600=1.0时沉默效率较高。以优化好的VIGS体系参数,选择桃叶绿素合成基因(PpGluTR和PpPOR)为目标基因进行验证,结果显示PpGluTR和PpPOR的表达均被显著抑制,叶片颜色变化明显。这些结果表明优化的VIGS体系稳定性好且沉默效率高,可用于桃基因功能的研究。; 潘佳佳张东梅孟建高苏南朱凯杰刘军伟李国怀; 关键词：李坏死环斑病毒八氢番茄红素脱氢酶

李坏死环斑病毒LAMP引物、试剂盒及检测方法: 本发明公开了李坏死环斑病毒LAMP引物、试剂盒及检测方法，其中所述引物包括：正向外引物F3，反向外引物B3，正向内引物FIP，和反向内引物BIP。本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种李坏死环斑病毒LAMP...; 陈定虎管维

李坏死环斑病毒外壳蛋白基因表达方法及抗血清和试剂盒: 本发明公开了李坏死环斑病毒外壳蛋白基因表达方法及抗血清和试剂盒，该表达方法：从PNRSV感病材料中提取李坏死环斑病毒的RNA；采用RT-PCR扩增的方法克隆李属坏死环斑病毒的外壳蛋白基因；将得到的壳蛋白基因连接到pGEM...; 陈定虎刘恭源杨雷亮王勇刘军

李坏死环斑病毒外壳蛋白基因表达方法及抗血清和试剂盒: 本发明公开了李坏死环斑病毒外壳蛋白基因表达方法及抗血清和试剂盒，该表达方法：从PNRSV感病材料中提取李坏死环斑病毒的RNA；采用RT-PCR扩增的方法克隆李属坏死环斑病毒的外壳蛋白基因；将得到的壳蛋白基因连接到pGEM...; 陈定虎刘恭源杨雷亮王勇刘军

建立基于TaqMan探针的李坏死环斑病毒实时荧光RT-PCR检测方法被引量：4: 2011年; 李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)是世界部分范围内分布的有害生物,亦是我国重点关注的检疫对象。根据PNRSV各株系衣壳蛋白基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan荧光探针,进行了探针、引物和Mg2+浓度等反应体系和条件的优化实验,确定最佳的引物浓度为400 nmol/L、探针浓度为333 nmol/L、Mg2+离子浓度为5 mmol/L和dNTPs浓度为0.43 mmol/L时,其灵敏度达23个拷贝数。利用建立的实时荧光RT-PCR检测方法对PNRSV樱桃分离物进行了成功检测。这个方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点,适合于李坏死环斑病毒的检测和鉴定。; 朱建裕黄秋霞高必达朱水芳; 关键词：李坏死环斑病毒分子检测实时荧光RT-PCR

核果类果树上李坏死环斑病毒和李矮缩病毒的血清学及RT-PCR检测: 核果类果树是一类种植较为广泛的果树,在我国南方以桃、李、杏、油桃等为主。李坏死环斑病毒/(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV/)和李矮缩病毒/(Prunedwarfvirus,PDV...; 阙勇; 关键词：核果类果树病毒李坏死环斑病毒

李坏死环斑病毒检测方法的比较研究被引量：2: 2008年; 针对感染李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)植株病毒的特异性检测,将DAS- ELISA、RT-PCR方法综合改进、优化,建立了免疫捕获反转录PCR(IC-RT-PCR)检测PNRSV的方法.该方法采用PNRSV抗体特异性免疫捕获病毒,并根据GenBank中PNRSV序列设计的特异性引物对PN5/PN3进行PCR扩增,得到约760 bp大小的特异性基因片段.扩增产物经克隆测序后,结果表明:产物序列与PNRSV的外壳蛋白编码基因存在94%～98%的同源性.检测广泛性以及灵敏度比较研究显示.IC-RT-PCR方法能从含量很低的受病样品中检出PNRSV,检测灵敏度与RT-PCR相近,但所检测样品的范围更广,适用于从植物各部位检测低含量的病毒.IC-RT-PCR检测灵敏度比DAS-ELISA方法高出1000倍.; 郭俊陈精兰李凡黄扬尹朝先陈海如; 关键词：月季李坏死环斑病毒

侵染昆明玫瑰的李坏死环斑病毒的鉴定及其分子检测被引量：2: 2007年; 采集昆明地区种植的花叶症状明显的玫瑰样品,运用现代分子生物学技术与常规技术相结合的方法,初步鉴定引起玫瑰花叶病的主要病毒病原为李坏死环斑病毒。该病毒引起玫瑰植株的系统花叶、畸形和皱缩等症状;电镜下病毒粒体为球形,直径为22～23nm;ELISA检测发现该病毒在植株芽、花粉和顶部叶片的浓度最高;同时,根据外壳蛋白的保守区利用Primer5.0设计该病毒的特异引物,对该病毒进行分子检测,得到450bp的预期DNA片断,并在此基础上,进行了巢式RT-PCR的分子检测,表明巢式RT-PCR的检测能力最强。并通过序列的同源性分析得知该病毒的外壳蛋白与已知PNRSV的同源性为98.0%,进一步证明了该病毒为李坏死环斑病毒。; 李春艳丁元明何月秋赵明富秦绍钊; 关键词：玫瑰巢式RT-PCR

侵染月季的李坏死环斑病毒的检测及CP基因序列分析被引量：4: 2007年; Rose leaves with virus symptoms(mosaic,ring spot and line pattern) were detected by DAS-ELISA and RT-PCR.The results showed Prunus necrotic ring spot virus(PNRSV) infection in the leaves.CP gene of PNRSV isolated from Yunnan province was cloned and sequenced.Analysis of sequence showed that CP gene of PNRSV-yunnan contained 683 nucleotides encoding 165 aminoacids(EMBL accession number: AY684271).Nucleotide similarity of CP gene was more than 98% between PNRSV-yunnan and group I isolates,and less than 95% between PNRSV-yunnan and group II and III isolates.According to the results,PNRSV-yunnan was identified as a member of group I.; 王继华王丽花杨秀梅苏艳张颢唐开学; 关键词：李坏死环斑病毒基因序列分析切花月季侵染 VIRUS PNRSV

用二重PCR方法检测李痘病毒和李坏死环斑病毒被引量：12: 2006年; 以我国两种重要的检疫性木本植物病毒李痘病毒和李坏死环斑病毒为对象,研究了二重PCR的检测方法,为我国口岸对这两种病毒的检疫提供了一条更为灵敏有效的新方法。; 周灼标郑雷青管维王章根姜开明陈定虎; 关键词：李痘病毒李坏死环斑病毒二重PCR

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