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有限稀释法制备RecQ解旋酶单克隆抗体1C1及鉴定被引量：2: 2019年; 目的:通过有限稀释法制备抗RecQ单克隆抗体(m Ab),鉴定其生物学特性。方法:以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫Balb/c小鼠,融合免疫小鼠的脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞,有限稀释法筛选杂交瘤细胞,制备m Ab;使用间接ELISA法鉴定单克隆抗体亚型、效价,Western-Blot法测定单克隆抗体特异性;将m Ab与RecQ解旋酶结合后,观察m Ab对RecQ解旋酶活性的阻断作用。结果:获得1株能稳定分泌抗RecQ解旋酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株1C1,该杂交瘤细胞染色体数目在94～104; 1C1分泌的单克隆抗体类型为Ig G1型,1C1株所得上清液和腹水中抗体效价分别为1×10-3和1×10-5,该单克隆抗体可特异性结合RecQ,并可抑制RecQ解旋酶的结合DNA活性。结论:成功制备1株抗RecQ m Ab,效价高、特异性强。; 张荣红贾铁文何志旭刘杰麟; 关键词：单克隆抗体有限稀释法

有限稀释法分离鼠髓核间充质干细胞及对细胞活性的影响: 椎间盘退行性疾病(degenerative disc disease，DDD)是腰痛的主要原因，给患者带来巨大痛苦，也给家庭和社会造成巨大的经济负担，而目前仍缺乏有效的治疗手段。随着细胞治疗的发展，干细胞移植成为治疗椎间...; 林凌翰; 关键词：椎间盘退行性疾病有限稀释法生物学活性

有限稀释法分选人骨肉瘤143-B干细胞及鉴定: 2015年; 目的:探索人骨肉瘤143-B干细胞的分选及鉴定方法。方法:采用有限稀释法对143-B细胞进行干细胞的分选,并检测所获取细胞表面干细胞标志物Nanog和OCT4的表达水平;对所获取的细胞进行成骨及成脂诱导分化,以检测其是否具有多向分化的潜能;动物成瘤实验鉴定细胞的成瘤能力,耐药实验检测顺铂对细胞半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)的影响。结果:分选获得的单克隆143-L细胞具有较高的成球能力;143-L细胞表面Nanog和OCT4 m RNA和蛋白的表达水平均明显高于亲代143-B细胞;对其进行成骨及成脂多向诱导分化成功。143-L细胞的成瘤能力及耐药能力(顺铂对143-B及143-L细胞的IC50值分别为0.83和2.51μg/m L)均明显高于143-B细胞。结论:有限稀释法可以用于143-B细胞干细胞的分选。; 毛德举胡旭张莹沈伟伟陈武桂陈培何建荣卓云云张超初同伟; 关键词：骨肉瘤肿瘤干细胞

疟原虫乳酸脱氢酶活性检测法和有限稀释法在筛选和建立恶性疟原虫克隆株时的应用被引量：4: 2000年; 董莹李菊曰升高白荷; 关键词：疟原虫乳酸脱氢酶活性检测

有限稀释法筛选重组AcNPV病毒: 1998年; 有限稀释法筛选重组ＡｃＮＰＶ病毒钟劲胡美浩１）（北京大学生命科学学院，北京，１００８７１）关键词重组病毒；梯度稀释；筛选；测活中图分类号Ｑ３３２０引言昆虫杆状病毒表达系统是一高效表达外源基因的表达系统。用于基因工程表达外源基因的ＡｃＮＰＶ（ａｕｔｏｇ...; 钟劲胡美浩; 关键词：重组病毒昆虫有限稀释法

有限稀释法定量分析脐血中异基因特异的辅助性T细胞: 1997年; 目的：探讨脐血移植是否会发生同成人骨髓移植一样强烈的移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）。方法：用有限稀释法检测了１７例脐血及１４例成人外周血中异基因特异的分泌白细胞介素２的辅助性Ｔ细胞（ＡＩＨＴＬ）。结果：脐血中ＡＩＨＴＬ频数与成人外周血相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：脐血的异基因反应性不比成人外周血差，故脐血移植尚需ＨＬＡ配型及移植后的免疫抑制治疗，以减少ＧＶＨＤ的发生。; 江勤谢毅谢弘; 关键词：辅助细胞胎血脐血移植

用有限稀释法在昆虫培养细胞中克隆家蚕微粒子(Nosema bombycis): 1992年; 数株家蚕微粒子(Nosema bombycis)NIS001株的克隆株,是用有限稀释法,在桉大蚕蛾(Antheraea eucalypti)培养细胞系中接种该株孢子的孢原体(sporoplasm)而获得的。稀释感染的桉大蚕蛾培养细胞,并转移到96孔的细胞培养板小孔内,以分离出单个的感染细胞。随机选取一定数目的含单个细胞小孔,这是因为此时还不可能用相差显微镜检查孔内分离的单个细胞是否感染。在这些小孔内加入另一些未被感染的家蚕(Bombyx mori)S.P.C.Bm36或桉大蚕蛾细胞,则孔内可能被单个孢原体寄生的单细胞就会产生家蚕微粒子(Nosema bombycis)NIS001的克隆株来。用此方法分离的数株家蚕微粒子(Nosema bomobycis)NIS001克隆株中,形态差异的孢子可分别观察到。经数次离体培养继代后,孢子的形态特征得以保持下来。胶乳凝集试验结果表明七株克隆的孢子表面抗原具同源性。; 早坂昭二河原畑吴钢; 关键词：昆虫细胞培养

基于微流控芯片和细胞检测的单细胞分离方法: 2025年; 为了实现高通量、高准确性和高克隆活性的单细胞分离。提出了一种基于微流控芯片和单细胞检测的新型单细胞分离方法。并对该方法在检测仓鼠卵巢细胞亚株(CHO-K1)细胞的准确性以及分离后的单细胞克隆活性进行了研究。首先,以CMOS-MEMS微流控芯片为核心,设计了识别640个喷嘴轮廓并定位喷嘴号的图像算法,将单细胞图像送入训练好的卷积神经网络(CNN)中,检测轮廓清晰、形状合适的单个细胞。然后,微流控芯片上的加热电阻通过解码数据通电,利用热发泡喷墨打印原理将单个细胞瞬间喷射到指定位点,将识别到的单细胞连续打印。实验结果表明:CHO-K1单细胞检测平均精度可以达到94.03%,单克隆存活率可以达到87.18%。与有限稀释法(单细胞率提高70.42%,单克隆率提高66.68%)相比,该方法的性能显著提高。; 梁权伟关一民; 关键词：微流控芯片有限稀释法

猪脂肪前体细胞系的建立及褐变能力研究: 具有连续传代和成脂分化能力的猪脂肪前体细胞系可以为猪脂肪沉积及代谢相关的研究带来极大的便利。但目前国内并没有一株这样的细胞系被建立起来,这给猪脂肪细胞相关的研究带来了诸多不便。本研究将以本课题组前期已经建立的一株永生化的...; 洪鹏程; 关键词：有限稀释法 RNASEQ

稳定表达抗HER2单克隆抗体的FUT8基因敲除细胞株的建立: 2020年; 本研究在实验室前期构建的敲除α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株(FUT8-/--CHO-S)基础上,建立了稳定表达IgG1型抗HER2单克隆抗体的稳转细胞株。以曲妥珠单抗为模式蛋白,构建了带有嘌呤霉素抗性基因的表达载体pIRES-HC和pIRES-LC,并用电穿孔法共转染入FUT8-/--CHO-S细胞,通过嘌呤霉素加压培养、Dot Blot和WesternBlot等检测方法,经过两轮有限稀释筛选出了高表达的稳转细胞株Tru-FUT8-/--CHO-S。该细胞株在批次培养(Batch)中最高生长密度达每毫升6.05×106个,抗体产量为168 mg/L。在补料培养(Fed-Batch)中,通过补料CHO Feed4的添加,最高生长密度提高到每毫升17.1×106个,抗体产量达到437 mg/L,试验结果表明改造的FUT8-/--CHO-S细胞株具有开发成工业细胞株的潜力。; 袁瑗边延林张宝红朱建伟; 关键词：稳定转染有限稀释法

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