搜索到2450篇“ 昆虫杆状病毒表达系统“的相关文章
- 鸭IFN-α昆虫杆状病毒表达系统的建立及其抗新型鸭呼肠孤病毒活性研究
- 2025年
- 为利用昆虫杆状病毒表达系统表达鸭干扰素α(inteferon-α,IFN-α),并研究其对新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus,NDRV)的抗病毒活性,针对鸭IFN-α序列构建重组质粒PFastBac-DuIFN-α,转化DH10Bac细胞后提取重组杆粒B acmid-DuIFN-α,然后将其转染Sf9昆虫细胞并收集上清,盲传3代后收集病变细胞,经超声纯化获得重组鸭IFN-α蛋白。Western blot鉴定结果显示,鸭IFN-α在细胞质中表达,大小约为23 kDa。经测定,重组鸭IFN-α蛋白效价为2.14×10^(5)U/mL,以其处理鸭胚成纤维细胞(DEF)后,可极显著刺激蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)、抗黏病毒蛋白(myxovirus resistant,Mx)和寡腺苷酸合成酶(oligadenylate syntase,OAS)编码基因的表达(P<0.01)。进一步将鸭IFN-α蛋白接种5日龄樱桃谷鸭(2.14×10^(3) U/mL,0.2mL/只),2 d后再进行NDRV攻毒试验(1000 TCID_(50)/0.1 mL,0.2 mL/只),同时设置阴性对照组和仅NDRV攻毒组。组织病理学检测显示,仅肌注NDRV的攻毒组雏鸭脾出现大量淋巴细胞崩解坏死,数量减少;而先肌注鸭IFN-α蛋白后攻毒NDRV的试验组雏鸭病变较轻,仅有少量淋巴细胞坏死。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测发现,试验组雏鸭的排毒量极显著低于攻毒组(P<0.01),且其肝和脾中NDRV载量也极显著低于攻毒组(P<0.01),同时试验组Mx和OAS表达量极显著升高(P<0.01)。结果表明,本研究通过昆虫杆状病毒系统成功表达出了重组鸭IFN-α蛋白,其具有较好的抗NDRV活性。本研究为进一步探索鸭IFN-α对NDRV感染等鸭病毒性疾病的防治机制提供了技术支持。
- 孔雨心柳美玲于鲁娜鹿益豪张兆鹏傅绩李宁
- 关键词：干扰素Α昆虫杆状病毒表达系统新型鸭呼肠孤病毒抗病毒活性
- 人Cyr61蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及纯化研究
- Cyr61是哺乳动物CCN家族分泌基质细胞蛋白的一员,由4个结构域构成,可以与多种信号因子产生特异性结合,在不同的生理、病理条件下拥有多种生物学功能。但由于该蛋白富含半胱氨酸,极易形成包涵体,目前关于Cyr61蛋白的纯化...
- 黄浩
- 关键词：昆虫杆状病毒表达系统昆虫细胞系蚕蛹蛋白纯化
- ENO1蛋白及其相关活性位点缺失突变蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
- 2024年
- 目的:利用昆虫杆状病毒表达系统(昆虫BEVS)表达糖酵解酶α-烯醇化酶(ENO1)及其3种酶活性位点缺失突变的ENO1蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法:利用分子克隆技术将优化后ENO1序列插入pFastBacTM1载体,获得含有目的基因的重组质粒pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活性位点,进行优化后将其插入pFastBacTM1载体,获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3,利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结果:成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3,获得大小约2000 bp的基因片段,与预期大小相符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,其分子量约为52000,与预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论:通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3,这些蛋白具有反应原性,为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。
- 代鹏钰杨蕊章婷婷马昕芸刘会玲
- 关键词：昆虫杆状病毒表达系统蛋白表达
- 非洲猪瘟病毒p72蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及抗原表位鉴定
- 非洲猪瘟（ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（ASFV）感染引起的猪和野猪的急性、发热和高度传染性疾病,为目前影响我国养猪业的重大疫病。迄今为止,尚无针对ASF的有效疫苗和治疗药物,因此早期监测是预防和控制ASF的最重要解决方...
- 王安铖
- 关键词：非洲猪瘟病毒杆状病毒表达系统单克隆抗体抗原表位
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
- 2024年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白是病毒主要囊膜结构蛋白和中和抗体主要靶蛋白,广泛应用于PRRS新型疫苗和诊断技术的研究。为获得具有与天然构象相近的PRRSV GP5蛋白,本研究根据草地贪夜蛾(Spdopterafrugiperda)密码子偏好性,优化PRRSV ORF5基因编码密码子,并克隆至杆状病毒载体后转染Sf9昆虫细胞,构建了重组杆状病毒rBac-PRRSV-GP5。经Western blot证实GP5蛋白在Sf9细胞中获得高效表达,且具有良好的免疫反应原性。经镍离子亲和层析纯化后,获得高纯度的重组GP5蛋白,为开展PRRSV诊断技术研发、生物学功能研究等奠定了抗原基础。
- 黄袁慧马静王乃迪张昕张莹兰冰洁刘玉良倪建强周智李义平王传彬
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因GP5蛋白蛋白纯化
- 重组非洲马瘟VP7抗原在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
- 2023年
- 为重组合成具有类似天然结构的非洲马瘟病毒VP7抗原,通过优化抗原的密码子序列并使用杆状病毒表达系统表达与鉴定了真核重组非洲马瘟病毒的VP7抗原。结果表明,通过化学合成与扩增非洲马瘟病毒VP7基因,将合成后的核酸序列插入相应真核表达载体中并转座构建穿梭质粒,然后通过瞬时转染方式转染至昆虫细胞成功构建杆状病毒并表达获得相应目的抗原。表达的抗原经过标签纯化及相应免疫印迹试验验证后表现出较好的免疫原性与反应原性。
- 田国宁李晓霞孙航王润清孙雨宋晓晖
- 关键词：非洲马瘟杆状病毒真核表达蛋白纯化
- 烯醇化酶1单链抗体在昆虫杆状病毒表达系统的初步构建与表达
- 目的通过构建昆虫杆状病毒表达载体系统,在昆虫细胞表达ENO1单链抗体,为宫颈癌代谢治疗提供新的参考方向。方法1.在实验室前期基础上,得到ENO1单克隆抗体H1的可变区基因序列,初步构建昆虫杆状病毒表达载体系统（Insec...
- 李娜
- 关键词：宫颈癌单链抗体糖酵解
- 重组牛IFN-γ蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化和鉴定被引量：5
- 2021年
- 为合成与天然构象相似的干扰素γ蛋白,通过优化干扰素序列的密码子序列,利用杆状病毒表达系统合成真核重组牛IFN-γ蛋白。实验化学合成牛IFN-γ基因,并将该基因克隆至真核表达载体pFastBacHTA中,将构建成功的重组载体与DH10Bac感受态大肠杆菌进行转座形成穿梭载体,穿梭载体质粒瞬时转染至SF9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒,最后利用SF9昆虫细胞悬浮培养大量表达目的蛋白。蛋白纯化后经Western Blotting和BOVIGAM牛分枝杆菌IFN-γELISA检测试剂盒检测分析,具有较好的免疫原性和反应原性。研究结果为牛IFN-γ的单克隆抗体制备以及牛结核病临床诊断奠定了基础。
- 王睿男蒋菲刘亚涛宋晓晖刘永生王文储岳峰曹小安王传彬孙雨
- 关键词：杆状病毒真核表达蛋白纯化
- 流感病毒HA球状头部结构域在昆虫杆状病毒表达系统的表达及鉴定被引量：1
- 2021年
- 目的通过昆虫杆状病毒表达系统获得具有良好免疫原性的流感病毒蛋白。方法将Hemagglutinin[Influenza A virus A/California/09/2009(H1N1)]进行截短,取57-271球状头部结构域氨基酸序列,在前面加Igκleader信号肽(METDTLLLWVLLLWVPGSTGD),设计H1HAHead基因。将基因序列按照昆虫细胞密码子偏好性进行优化、合成,通过EcoRI和HindIII双酶切克隆至pFastBAC HTA载体上,获得含有目的基因的重组质粒pFastBAC HTA-H1HAHead。利用热激法将重组质粒转化至大肠埃希菌DH10 Bac^(^(TM) ) 感受态细胞,蓝白斑筛选获得重组杆状质粒rBacmid-H1HAHead。在脂质体的介导下,将重组杆状质粒转染至SF9细胞,对病毒进行拯救,转染后120 h,收取上清病毒液,盲传3代,获得SF9细胞,运用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot检测目的蛋白的表达。结果经双酶切鉴定成功插入长度为762 bp的目的基因H1HAHead,通过脂质体介导长度为3192 bp的重组杆状质粒rBacmid-H1HAHead构建成功。杆状病毒系统可表达目的蛋白,其分子质量单位28.25 ku,与预期一致。Western blot鉴定该蛋白能与特异性标签His-tag发生反应,IFA鉴定感染重组病毒的SF9细胞外源蛋白表达。结论通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达目的蛋白,该蛋白有反应性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础。
- 曾博宇李凯张桐于潼庄忻雨陈璐儿陈振海田明尧金宁一
- 关键词：流感病毒昆虫杆状病毒
- 鸡传染性支气管炎病毒GX-YL5株S蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达及其免疫原性被引量：3
- 2021年
- 为了对鸡传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV)广西优势血清型代表株GX-YL5的S蛋白进行真核表达并研究其免疫原性,设计GX-YL5毒株S基因特异引物,扩增出目的片段后,构建重组表达载体pFastBacTM/HBM-TOPO-S,转化DH10Bac细胞获得重组杆状病毒rHBM-S;重组S蛋白鉴定正确后,大量表达、纯化并免疫新西兰大白兔制备兔抗血清,应用IFA、Western blot以及间接ELISA、气管环(TOC)中和试验对该重组蛋白的反应原性及免疫原性进行分析。结果显示,成功获得重组S蛋白;制备的抗S蛋白多抗血清具有良好的特异性,ELISA效价可达1∶25600,TOC中和试验滴度为1∶512。结果表明,应用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了具有很好免疫原性的GX-YL5株的S蛋白。本试验为研究IBV S蛋白的生物学功能、研发诊断试剂和制备新型疫苗等奠定了基础,为利用昆虫杆状病毒表达系统进行IBV或其他冠状病毒结构蛋白的表达及多抗的制备提供了借鉴和参考。
- 张愉袁园苏艳静廖健淇张韬张丽娟范文胜韦平磨美兰
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S蛋白昆虫杆状病毒表达系统免疫原性
