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马铃薯斑纹片病菌含扩增内标的双重实时荧光PCR检测: 2021年; 马铃薯斑纹片病菌(Candidatus Liberibacter solanacearum)是一种主要为害伞形花科和茄科植物的重要有害生物,目前无法人工培养且可随种子远距离传播。准确灵敏的PCR检测方法对病害预警和防止扩散具有重要意义。本文通过复合引物法构建扩增内标(internal amplification control,IAC),建立了马铃薯斑纹片病菌含扩增内标的双重实时荧光PCR检测体系,有效指示了PCR检测过程中的假阴性现象。试验结果表明:双重与单重实时荧光PCR的检测灵敏度一致,当扩增内标添加量为3.4×10^(-5)ng时,样品DNA的检测低限为0.4 ng。40个样品的检测结果显示,与单重实时荧光PCR相比,双重荧光PCR方法的阳性检出率由25.00%提高到27.50%,提高了检测结果的准确性。; 丁钿魏霜林晓红李献锋陈晓路乾义柯田茜赵文军; 关键词：扩增内标实时荧光假阴性

利用添加扩增内标的重组酶聚合酶法检测霍乱弧菌被引量：1: 2019年; 本文根据霍乱弧菌的ompW基因的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,构建添加β-action基因为扩增内标的霍乱弧菌RPA-IAC检测方法。从扩增中可得到280 bp的目标基因片段和337 bp的扩增内标片段,该方法特异性良好,检测限与普通PCR一致,灵敏度均可达到0.1 ng/μL。该方法应用测试效果与传统培养方法相当,恒温37℃,40 min即可完成反应,检测效率高,适用于基层及现场检测。; 庄濠宇李伟李窕妍张峥嵘温尔英陈冬娥周广彪; 关键词：霍乱弧菌扩增内标

添加扩增内标的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-IAC)检测创伤弧菌被引量：7: 2019年; 根据编码创伤弧菌的基因保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,以β-actin基因为内标基因,创伤弧菌gryB基因为目标基因的RPA-IAC的检测方法。37℃,恒温40min,扩增得到234bp的特异性条带及334bp的扩增内标片段,检测限可达到0.1ng/μL。方法特异性及应用测试结果均与普通PCR方法相当,特别适用于基层和现场检测。; 李伟庄濠宇温尔英张峥嵘黄琦容周广彪; 关键词：创伤弧菌扩增内标

一种扩增内标及细菌多重PCR的检测方法: 本发明涉及一种扩增内标及细菌多重PCR的检测方法。所述的扩增内标的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该检测方法包括如下步骤：(1)提取待检测样品的基因组DNA，制得DNA溶液；(2)以基因组DNA为模板，PCR扩增...; 高迎春杨林魏秀丽薄永恒

一种含扩增内标的犬巴贝斯虫PCR检测试剂盒及使用方法: 本发明提供一种检测患病犬是否感染巴贝斯虫的检测试剂盒，特别是含扩增内标的犬巴贝斯虫PCR检测试剂盒。该检测试剂盒包括上下游引物SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，扩增内标质粒pMD‑IAC，标准阳性模板质粒p...; 姚大伟杨伦杨德吉赵艳兵肖霞许家荣洪玉方

一种扩增内标及细菌多重PCR的检测方法: 本发明涉及一种扩增内标及细菌多重PCR的检测方法。所述的扩增内标的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。该检测方法包括如下步骤：(1)提取待检测样品的基因组DNA，制得DNA溶液；(2)以基因组DNA为模板，PCR扩增...; 高迎春杨林魏秀丽薄永恒

添加扩增内标的食源性致病菌多重PCR检测方法的建立: 沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7、志贺氏菌、单增李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、阪崎克罗诺杆菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌是常见的8种食源性致病菌。本文以上述8种致病菌为研究对象,设计了6对引物,并结合文献报道的2对引物,分别...; 付绪磊; 关键词：多重PCR 扩增内标食源性致病菌

含扩增内标的犬巴贝斯虫PCR检测方法的建立被引量：2: 2016年; 为了提高犬巴贝斯虫的PCR检测方法准确性,采用复合引物重组方法构建两端含有检测巴贝斯虫18S r RN A基因的PCR检测引物的扩增内标质粒(含鸡特异性基因片段),通过优化扩增内标质粒的添加量,建立了一种新的检测犬巴贝斯虫PCR方法。结果显示,在25 L的PCR反应体系中加入1×106copies的扩增内标的可有效地检测犬巴贝斯虫基因组D NA,该PCR方法最低检测限为1×105copies。本试验建立的含扩增内标的PCR检测方法能快速、准确、简便的检测犬巴贝斯虫感染,同时能有效的避免假阴性现象的产生。; 贺卫华杨伦姜敏谈明霞姚大伟; 关键词：PCR 扩增内标假阴性

添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用被引量：4: 2016年; 以单增李斯特菌inl A基因为靶基因,设计一对特异性引物,以16S rRNA为扩增内标对照,建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法。优化了PCR反应体系,并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试。对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测,结果显示,只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段,其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段。灵敏度实验结果显示,基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×10~2fg/μL和1.21×10~2CFU/m L。当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/m L时,经8 h增菌培养后可被该方法检出。采用该研究建立的检测方法对36种食品样品进行检测,证实了该检测方法可以指示检测过程中出现的假阴性现象。综上所述,该研究建立的PCR检测方法能特异性的检测单增李斯特菌,并可有效排除检测过程中出现的假阴性现象,提高检测的准确性。; 张德福赵禹宗付绪磊张明仪淑敏徐永霞殷喆李春励建荣; 关键词：单增李斯特菌聚合酶链式反应扩增内标

检测花生过敏原用扩增内标、其构建方法及其应用: 本发明涉及一种检测花生过敏原用扩增内标、其构建方法及其应用。该扩增内标基因的序列为SEQIDNO.1所示的碱基序列。这预示了在DNA水平检测已深加工食品中所含的过敏原物质是可能的。采用本发明的扩增内标进行花生过敏原的PC...; 蔡琴陈沁张文举关潇邓志瑞

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