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一种热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 及其应用 本发明公开了一种热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 及其应用,所述热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,编码所述热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的热敏感尿嘧啶 DNA ... 卢辰 罗志丹 许恒皓 张雅琪 任宏杰 黄庆媛 陈科奇 徐喆一种热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 及其应用 本发明公开了一种热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 及其应用,所述热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,编码所述热敏感尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的热敏感尿嘧啶 DNA ... 卢辰 罗志丹 许恒皓 张雅琪 任宏杰 黄庆媛 陈科奇 徐喆冰岛硫化叶菌尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的生化性质及催化机理研究 尿嘧啶 (Uracil,U)由胞嘧啶 脱氨基形成,是一种常见的损伤碱基,具有引起G/C→A/T突变的诱变性。因此,一旦细胞DNA 中产生U,就需要被及时地修复。高温会加快碱基脱氨基的速率,为维持其基因组在高温环境中的稳定性,极... 吴迈关键词:极端嗜热古菌 尿嘧啶DNA糖苷酶 生化性质 碱基切除修复 水稻尿嘧啶 DNA 糖苷酶 及其在基因编辑诱导植物单碱基多样性中的应用 本发明公开了一种水稻尿嘧啶 DNA 糖苷酶 及其在基因编辑诱导植物单碱基多样性中的应用。该水稻尿嘧啶 DNA 糖苷酶 ,是由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白;或将SEQ IDNO.2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残... 朱健康 陆钰明 田益夫 沈润东极端嗜热古菌尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的研究进展 2020年 高温会加快碱基脱氨基反应形成损伤碱基的速率,进一步对脱氨基的碱基进行复制会导致突变。因此,极端嗜热古菌基因组的稳定性面临着其生存高温环境的挑战。胞嘧啶 脱氨基形成尿嘧啶 ,是常见的脱碱基类型,复制DNA 中尿嘧啶 会造成GC→AT的突变。尿嘧啶 DNA 糖苷酶 (Uracil DNA glycosylase,UDG)是修复DNA 中尿嘧啶 的关键酶 。基于识别底物的特异性,UDG分为6个家族,广泛分布在细菌、古菌、真核生物以及一些病毒中。基因组序列显示,极端嗜热古菌至少编码一种UDG。目前,对于细菌和真核生物的UDG已进行了大量的研究,但是关于极端嗜热古菌UDG的研究相对较少,尚处于初期阶段。本文综述了极端嗜热古菌UDG的研究进展,并对今后的研究提出了展望。 甘琪 姜董豪 张立奎关键词:极端嗜热古菌 尿嘧啶DNA糖苷酶 碱基切除修复 深海极端嗜热嗜压古菌Thermococcus barophilus Ch5尿嘧啶 DNA 糖苷酶 生化性质及催化机理的研究 极端嗜热古菌主要生存于深海热液口、火山口、陆地热泉等高温环境,其最适生长温度在80℃以上。高温会增加DNA 中碱基脱氨基的速率,造成碱基损伤,而对这些损伤碱基在被修复之前进一步复制会引起基因突变的发生。胞嘧啶 脱氨基形成尿 嘧... 史昊强关键词:极端嗜热古菌 生化性质 文献传递 一种来源于大菱鲆的热敏型尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的克隆表达及酶 学性质鉴定 2019年 目的尿嘧啶 DNA 糖苷酶 UDGase是一种广泛应用于qPCR、二代测序等领域的工具酶 ,由于其应用特性,只有热敏性UDGase才具有较大开发利用潜力。目前全球热敏性UDGase工具酶 仅有2个物种来源,均有专利保护且价格昂贵,亟待开发新来源且具有优良热敏特性的UDGase。方法根据前人研究及序列分析推测大菱鲆(Scophthalmus maximus)具有热敏性UDGase。经验证,大菱鲆肝脏匀浆呈现UDGase活性。从大菱鲆肝脏匀浆克隆得到大菱鲆UDGase基因SmUDGase,并使用大肠杆菌工程菌株实现重组表达,分离纯化后进行活力表征检测。结果序列比对结果表明,SmUDGase基因克隆成功。重组表达并经亲和层析、离子交换层析分离纯化,获得纯酶 纯度约95%,产率1.51mg/L,比活力2295.08U/mg。SmUDGase具有热敏性,在40℃时酶 活即开始迅速降低。其他酶 学性质,如pH适应范围、金属离子依赖性和对抑制剂的敏感性均与当前商业化UDGase一致。结论成功克隆并鉴定来自大菱鲆的新来源SmUDGase,该酶 具有热敏感性,酶 学特性接近目前商业化UDGase。并探索该酶 的重组表达和纯化工艺,所得纯酶 基本达到商业化生产水平,为该类型生物工具酶 的开发提供了理论参考和技术储备。 韩挺翰 龚雪梅 郦娟 丁亚芳 卢辰 张坤晓 高嵩 许恒皓关键词:尿嘧啶DNA糖苷酶 大菱鲆 热敏性 一种低温尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的制备方法 本发明公开了一种低温尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的制备方法,包括以下步骤:1)设计合成嗜冷细菌Colwellia psychrerythraea尿嘧啶 DNA 糖苷酶 基因,并插入pET28表达载体,构建DNA 连接酶 的重组表达质粒;2)... 刘喜朋文献传递 一种尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的制备方法及其应用 本发明公开了一种尿嘧啶 DNA 糖苷酶 的制备方法及其应用,本发明中制备的尿嘧啶 DNA 糖苷酶 能够在20‑37度高效水解DNA 中的尿嘧啶 碱基与脱氧核糖之间的糖苷 键;同时其具有良好的热敏感性,当温度高于60度时其迅速失活,达到60... 刘喜朋文献传递 过表达尿嘧啶 DNA 糖苷酶 2(UNG2)可增强HepG2细胞的抗氧化作用 2017年 目的检测尿嘧啶 DNA 糖苷酶 2(UNG2)的糖苷酶 活性,研究UNG2在肝癌细胞HepG2抗氧化损伤过程中的作用。方法构建UNG2的过表达载体,利用Western blot法检测UNG2过表达效果。在HepG2细胞过表达UNG2,免疫荧光细胞化学染色观察UNG2在细胞中的表达和定位,利用含脱氧尿 苷的寡核苷酸为底物测定UNG2的DNA 糖苷酶 活性,利用H_2O_2毒性实验研究UNG2在HepG2肝癌细胞抗氧化存活中的作用。结果在HEK293FT细胞中成功表达了UNG2,并发现UNG2主要定位在HepG2细胞核中。酶 活性实验表明UNG2可以有效地切割寡核苷酸中的脱氧尿 苷位点。H_2O_2毒性实验表明过表达UNG2可以显著提高HepG2肝癌细胞在H_2O_2处理后的存活率。结论 UNG2具有特异的尿嘧啶 糖苷酶 活性,并且UNG2能够保护HepG2肝癌细胞抵抗氧化应激损伤。 曹丽妍 成姗 杜娟 郭晏海 黄晓峰关键词:酶活性 氧化应激
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