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- 嘧啶核苷磷酸化酶突变体及2'-氟代核苷的制备方法
- 本发明提供了一种嘧啶核苷磷酸化酶突变体及2'‑氟代核苷的制备方法。其中,该嘧啶核苷磷酸化酶突变体包括:(a)以SEQ ID NO:1所示的嘧啶核苷磷酸化酶野生型酶TtPyNP为基础发生突变的蛋白,突变选自如下任意一种或多...
- 洪浩詹姆斯·盖吉张娜焦学成李明记李瑞崔毅程逸冰张海彬丁是卯米佳黎高秋月代洪倩
- 嘌呤核苷磷酸化酶/嘧啶核苷磷酸化酶共表达及固定化催化合成阿糖核苷
- 2024年
- 将嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和尿苷磷酸化酶(UP)进行共表达和双酶固定化,提高生物法合成阿糖核苷过程中底物转化率和催化剂稳定性。首先,构建大肠杆菌内源(PNP)和(UP)过表达工程菌,考察工程菌催化不同阿糖核苷之间转化的效率。将PNP和UP双酶固定化,并对固定化双酶进行回收利用,考察重复使用过程中固定化双酶的催化效率。结果表明:工程菌催化阿糖尿苷和腺嘌呤生成阿糖腺苷的反应最高转化率可达93.6%。固定化双酶催化合成阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷的最高转化率可达99.8%。重复回收使用固定化双酶19次后对底物的转化率达到60.6%,累计有效催化时长可达684 h。PNP和UP的双酶耦合体系能高效催化阿糖核苷之间的转化,固定化修饰有利于延长酶的使用寿命,为生物法生产核苷类似物提供重要科学参考。
- 刘玉雪张震胡晓静王振宇刘国生
- 关键词:嘌呤核苷磷酸化酶嘧啶核苷磷酸化酶固定化酶生物催化
- 嘧啶核苷磷酸化酶突变体及2'-氟代核苷的制备方法
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- 一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用
- 本发明公开了一种嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌及应用,将嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶基因导入宿主大肠杆菌中进行串联表达获得嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌,并将该嘌呤/嘧啶核苷磷酸化酶串联表达工程菌应用于核苷类似物的...
- 王振宇张震刘玉雪王海磊刘国生
- 嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶的融合表达及酶法合成嘌呤核苷类产物被引量:3
- 2021年
- 将嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶进行融合,提高生物酶法催化合成克拉屈滨等嘌呤核苷类产物的产率。设计不同的刚性、柔性连接短肽(Linker),将嘧啶核苷磷酸化酶EcUP与嘌呤核苷磷酸化酶AmPNP连接融合,考察酶融合蛋白的可溶性表达与活性情况。使用EEEEEEKKK短肽连接的融合蛋白EcUP-L4-AmPNP可溶性表达水平较高,并对嘌呤核苷与嘧啶核苷均具有反应活性,对嘌呤核苷的水解率远小于嘧啶核苷。研究发现:融合酶EcUP-L4-AmPNP催化合成克拉屈滨等嘌呤核苷类产物的产率70.4%~98.3%,合成产率比分别加入酶EcUP和酶AmPNP的游离双酶体系提高了约1.5~2.0倍。核苷磷酸化酶的融合蛋白有利于实现高效催化合成嘌呤核苷产物,生物催化合成克拉屈滨等几种嘌呤核苷类产物的产率显著提高。
- 徐玲玲康丽峰刘高飞何冰芳储建林
- 关键词:嘌呤核苷磷酸化酶嘧啶核苷磷酸化酶融合蛋白生物催化
- 一种嘧啶核苷磷酸化酶基因及其应用
- 本发明涉及生物技术及生物医药领域,具体涉及一种嘧啶核苷磷酸化酶基因及其应用。一种嘧啶核苷磷酸化酶基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,该基因编码的嘧啶核苷磷酸化酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。将该基因导...
- 陈峻青石利平尹晓龙
- 一种嘧啶核苷磷酸化酶基因及其应用
- 本发明涉及生物技术及生物医药领域,具体涉及一种嘧啶核苷磷酸化酶基因及其应用。一种嘧啶核苷磷酸化酶基因,核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示,该基因编码的嘧啶核苷磷酸化酶氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。将该基因导...
- 陈峻青石利平尹晓龙
- 原发性肝癌癌旁组织胸腺嘧啶核苷磷酸化酶表达与微血管密度的关系被引量:2
- 2013年
- 目的探讨原发性肝癌癌旁组织胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)与微血管密度(MVD)的关系。方法选取海南医学院附属医院普外科切除的肝癌标本40例,采用免疫组织化学方法检测原发性肝癌癌旁组织蜡块中的TP和MVD的表达水平,并在高倍镜下计数微血管数。结果 TP阳性原发性肝癌癌旁组织的MVD明显高于TP阴性原发性肝癌癌旁组织。结论原发性肝癌癌旁组织中TP具有促进组织中血管增生作用,TP阳性原发性肝癌患者术后可选用卡培他滨化疗。
- 李军黄明文崔海宁闫庆峰严平雄
- 关键词:原发性肝癌微血管密度
- 乳腺癌中嘧啶核苷磷酸化酶与淋巴结转移和预后的关系
- 2010年
- 目的:研究在有无腋窝淋巴结转移的乳腺癌细胞中嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)的表达,阐明嘧啶核苷磷化酶的表达与淋巴结转移和乳腺癌患者预后的关系。方法:应用免疫组化标记的嘧啶核苷磷酸化酶抗体,测定46例乳腺癌患者的癌组织中嘧啶核苷磷酸化酶的表达情况,分析嘧啶核苷磷酸化酶的表达与腋窝淋巴结转移和患者生存预后的关系。结果:嘧啶核苷磷酸化酶的表达被分为+和++、+++,观察嘧啶核苷磷酸化酶在有淋巴结转移的癌细胞和无淋巴结转移的癌细胞阳性表达的关系,有淋巴结转移5年预后差的患者明显高表达于无淋巴结转移5年预后较好的患者(P=0.0069)。结论:嘧啶核苷磷酸化酶与乳腺癌患者有无淋巴结转移和预后有相关性。
- 张都民郭彦辉赵军
- 关键词:乳腺癌嘧啶核苷磷酸化酶淋巴结转移
- 一种Exiguobacterium sp.MY02菌株的嘧啶核苷磷酸化酶基因及其制备方法
- 一种嘧啶核苷磷酸化酶的结构基因,其特征在于它是编码Exiguobacterium sp.MY02菌株的嘧啶核苷磷酸化酶的结构基因。制备该基因时,首先使用PCR法筛选Exiguobacterium sp.MY02菌株的基因...
- 阮期平韩文君古静燕赵丽
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- 阮期平

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