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绵羊清道夫受体A启动子活性分析: 2025年; 旨在初步分析绵羊清道夫受体A(SRA)启动子活性调节机理,为进一步探究SRA转录调控机制奠定基础。使用同源重组的方法构建SRA启动子报告质粒,XhoⅠ酶切验证,进一步测序比对;将构建的SRA启动子报告质粒与海肾荧光素酶载体共转染至HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因试验检测SRA启动子活性。利用化学合成技术合成肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)真核表达载体,将SRA报告基因载体分别与干扰素调节因子1(IRF1)、TNF-α和IL-6的表达载体共转染于HEK293T细胞,分析IRF1、TNF-α和IL-6对SRA启动子活性的影响。结果显示,XhoⅠ酶切pGL3-SRA出现预期目的条带和载体片段,测序比对正确,成功构建pGL3-SRA启动子报告基因载体;双荧光素酶报告基因试验证实SRA启动子具有较强的活性,IRF1、TNF-α和IL-6过表达能显著激活SRA的启动子活性(P<0.05,P<0.01)。研究结果为进一步探究IRF1、TNF-α和IL-6对SRA表达调控机制提供了基础资料。; 曹鑫艳王钢张秦川范文雨顾兰英盛金良贺笋孙延鸣张彦兵; 关键词：绵羊清道夫受体A 转录调控启动子活性

牡丹花青素苷合成关键基因PsDFR启动子活性分析被引量：1: 2024年; [目的]分析牡丹花青素苷合成关键基因PsDFR启动子的顺式作用元件及活性,为进一步研究PsDFR启动子的功能及其在牡丹花色形成中的调控机制奠定基础。[方法]以‘黑花魁’牡丹花瓣中提取的基因组DNA为模板,通过染色体步移法克隆PsDFR的启动子序列。利用生物信息在线软件预测分析启动子序列的顺式作用元件。构建5个不同长度缺失启动子与GUS基因融合的表达载体,并瞬时转化烟草叶片,通过GUS组织化学染色和酶活性检测分析缺失启动子的活性,及其对脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、光照等不同胁迫处理的响应。[结果]克隆得到PsDFR上游1687 bp的启动子序列。生物信息学分析发现PsDFR启动子含有多个光信号、激素响应、逆境响应及组织特异表达等顺式作用元件,这暗示PsDFR的表达可能受光信号、激素和胁迫等多种信号的共同调节。GUS组织化学染色和酶活性检测表明,随启动子片段的缩短,启动子活性逐渐下降,-1623至-916区段对于启动子活性具有重要作用。MeJA和黑暗处理对各启动子片段活性均有显著抑制作用,恢复光照可促使启动子活性明显回升,而参与ABA响应的核心调控区域位于-443至-76 bp。[结论]PsDFR启动子含有多个光信号、激素响应、逆境响应及组织特异表达等顺式作用元件,其活性受光的正调控以及MeJA的负调控;-1623至-916 bp间的区域对于启动子活性具有重要作用,-443至-76 bp是响应ABA处理的核心区域。该研究为进一步揭示PsDFR应答环境信号参与牡丹花色形成的分子调控机制提供参考。; 周琳袁梦齐宇张梦杰王雁; 关键词：花青素苷启动子顺式作用元件启动子活性

报告基因结合叶绿素荧光参数NPQ的启动子活性分析方法: 本发明提供了一种将植物VDE或PsbS基因作为报告基因结合叶绿素荧光参数NPQ分析启动子活性的检测方法；通过以PsbS和VDE基因中至少一种作为报告基因构建待测启动子载体，通过瞬时表达或遗传转化，并结合叶绿素荧光成像仪对...; 娄永峰肖复明宋晓琛冷春晖陈兴彬

水稻不同器官寡肽运输基因家族启动子活性分析: 2024年; 【目的】分析寡肽运输基因在水稻不同器官中的表达特异性,以加深对水稻营养物质的吸收、运输与分配调节的了解。【方法】以粳稻日本晴基因组为模板,分别克隆水稻寡肽运输基因家族PT亚家族9个基因的启动子序列,并将其插入到pCAMBIA1301载体的葡糖醛酸酶(GUS)蛋白编码区前,形成启动子诱导GUS蛋白表达载体,通过农杆菌,制备9个水稻寡肽运输基因启动子分别诱导GUS蛋白表达的转基因水稻,在自然生长季进行田间试验,于抽穗开花期,分别剪取水稻根、茎、叶、小穗等器官样品,浸泡在GUS染色液中进行组织化学染色,体视镜观察、拍照。分析水稻基因表达数据库RiceXPro中9个水稻寡肽运输基因在不同器官的表达谱,采用PlantCare数据库对9个水稻寡肽运输基因的启动子序列的顺式作用元件进行分析。【结果】9个水稻寡肽运输基因家族启动子均可以诱导GUS蛋白在水稻节的部位强烈表达,其中7个可以诱导GUS蛋白在水稻内稃和外稃表达,分别是OsOPT1、OsOPT2、OsOPT4、OsOPT5、OsOPT7、OsOPT8和OsOPT9。RiceXPro水稻基因表达数据库中的表达谱显示OsOPT5和OsOPT6的表达具有很强的特异性,这两个基因都是只在花药强烈表达,在其它器官中未检测到表达。另外,在水稻寡肽运输基因家族启动子中发现多个赤霉素和脱落酸响应元件。【结论】水稻寡肽运输基因家族基因的启动子活性具有强烈的器官特异性,9个水稻寡肽运输基因的启动子均在水稻茎节的部位强烈诱导GUS蛋白表达,说明这些基因参与了水稻不同器官间营养物质的交换和分配,并且在赤霉素和脱落酸信号响应中发挥作用。; 刘滔卢其能; 关键词：水稻启动子活性

鸡BMP15基因克隆、表达模式及启动子活性分析: 2023年; 为了解鸡骨形态生成蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因的功能、结构及启动子活性区域,探究该基因的转录调控机制。通过RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术克隆鸡BMP15基因cDNA全长序列,生物信息学分析其编码蛋白的性质及结构。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测鸡BMP15基因在不同组织中的表达情况,双荧光素酶报告系统确定该基因的核心启动子区。结果表明,鸡BMP15基因存在一个长度为1865 bp的转录本,编码350个氨基酸,其遗传距离与火鸡最近。该蛋白为水溶性蛋白,其结构主要由无规则卷曲构成;存在信号肽区域,无跨膜结构域。构建的组织表达谱结果表明,BMP15基因在鸡的卵巢组织和颗粒细胞中表达极显著(P<0.01)。双荧光报告结果显示,BMP15基因启动子-153--1 bp为核心区域。为进一步确定BMP15基因功能及探究其转录调控机制奠定基础。; 杨岚张晨曦樊学伟王阳光王春秀李文婷; 关键词：BMP15基因生物信息学启动子活性

大豆GmGolS基因高温胁迫应答及启动子活性分析被引量：1: 2023年; 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉子糖系列寡糖(RFOs)生物合成途径中的关键酶。为探究大豆GmGolS基因的高温胁迫调控机制,通过实时荧光定量PCR检测GmGolS在高温胁迫下的表达量,通过PCR从大豆基因组DNA中扩增GmGolS基因启动子序列,将其连接到植物表达载体pCAMBIA1301上并转化烟草,通过GUS组织化学染色和实时荧光定量PCR检测GmGolS启动子的高温诱导启动活性。结果表明:高温胁迫可以强烈诱导GmGolS的表达。1 739 bp的GmGolS启动子序列中含1个生长素响应元件、1个干旱诱导的MYB转录因子结合位点、2个厌氧诱导元件、1个防御和胁迫响应元件、1个脱落酸响应元件、1个茉莉酸响应元件和1个缺氧诱导元件。成功获得3棵GmGolSP转基因烟草植株。GmGolS启动子的活性可以被高温胁迫诱导。; 张军翟莹邱爽尹珺伊张艳金振华张勇王丽坤; 关键词：大豆诱导型启动子高温胁迫

葡萄细胞分裂素响应调节因子VlRRA1的克隆、表达及启动子活性分析被引量：2: 2023年; 在‘巨峰’葡萄中克隆获得细胞分裂素响应调节因子VlRRA1及其启动子,分析了VlRRA1的表达特征,并对其启动子进行活性分析。结果显示,VlRRA1的cDNA全长为666 bp,编码221个氨基酸;保守结构域预测结果显示该基因仅含有1个磷酸接受结构域(REC),属于A型RR基因;系统进化关系表明VlRRA1与其他物种中的A型RR亲缘关系较近。酵母自激活试验说明VlRRA1不具有转录激活活性,符合A型RR基因的典型特征。qRT-PCR结果表明VlRRA1具有组织表达特异性,主要在茎、叶以及幼果中表达;外源细胞分裂素氯吡苯脲(CPPU)可以促进VlRRA1的表达,而细胞分裂素生物合成抑制剂洛伐他汀(lovastatin,LOV)则抑制VlRRA1的转录。VlRRA1启动子上有多种与非生物胁迫和激素响应相关的元件。GUS组织染色的结果表明,VlRRA1启动子具有活性,可以响应多种激素信号,包括与坐果相关的细胞分裂素、生长素和赤霉素。以上结果表明VlRRA1在细胞分裂素介导的葡萄坐果与幼果发育中具有重要作用。; 李松琦李旭飞李敏刘海楠裴茂松韦同路郭大龙余义和; 关键词：葡萄细胞分裂素启动子活性

甘蓝型油菜BnaC04P5CS1苗期抗旱功能验证及其启动子活性分析: 甘蓝型油菜是我国重要的芸薹属油料作物,随着社会的发展,油菜在各方面的潜能不断被开发利用,油菜生产在我国国民经济中扮演着重要角色。但油菜在生长发育各个时期极易受到干旱的影响,导致产量下降,影响经济效益。脯氨酸是响应环境胁迫...; 张国瑞; 关键词：甘蓝型油菜干旱胁迫启动子活性分析酵母单杂交

西瓜ClPsy1启动子活性分析及CRISPR/Cas9系统靶位点的检测: 西瓜（Citrullus lanatus）是重要的葫芦科经济作物,果肉中含有多种类胡萝卜素,赋予了西瓜丰富的果肉颜色。Psy（Phytoene Synthase）编码类胡萝卜素合成过程中的限速酶:八氢番茄红素合成酶,是类...; 曹玥; 关键词：西瓜 MYB转录因子启动子

花鲈NF-κB家族基因克隆、表达模式及启动子活性分析: NF-κB是一种控制DNA转录的蛋白复合体,是先天免疫系统中重要的转录因子。目前鉴别出RelA(p65)、RelB、C-Rel、NF-κB1(p105/p50)和NF-κB2(p100/p52)五个家族成员。NF-κB几...; 刘丹洁; 关键词：NF-ΚB 基因表达启动子活性亚细胞定位

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