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一种FHV-1和FCV的双重荧光定量PCR检测引物及其应用: 本发明公开了一种FHV‑1和FCV的双重荧光定量PCR检测引物及其应用，所述的引物对和探针组合中包含有：1)用于检测猫疱疹病毒病株FHV的引物对和探针，其上游引物的序列为SEQ ID NO:1，下游引物的序列为SEQ I...; 静争

鹅星状病毒Ⅰ型与Ⅱ型双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用: 2025年; 为建立一种快速检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)Ⅰ型(GAstV-1)与Ⅱ型(GAstV-2)的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法,试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物,将PCR扩增的两个片段分别克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性质粒标准品,建立检测并鉴别GAstV-1与GAstV-2的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行评估,并运用该方法对28份疑似痛风雏鹅临床样品进行检测。结果显示:建立的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法检测GAstV-1、GAstV-2的标准曲线相关系数均在0.99以上,批间、批内重复变异系数均小于0.7%,最低检测限度均为10 copies/μL;该方法对鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒均无特异性扩增,同时检测GAstV-1与GAstV-2未出现交叉反应;该方法检测28份临床样品的GAstV阳性率为92.8%,其中GAstV-1和GAstV-2均为阳性的有6份,仅GAstV-2阳性的有18份,仅GAstV-1阳性的有2份。研究表明,建立的荧光定量PCR检测方法可用于GAstV-1与GAstV-2的鉴别检测,并且当前引发GAstV感染的主要病原依然是GAstV-2,GAstV-1和GAstV-2混合感染情况也同时存在。; 姚展杏王超林寅盛赵丹张嘉家伍辉吉朱婉君张济培陈济铛; 关键词：雏鹅痛风

蛙病毒3型类和桑蒂库帕蛙病毒类双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用: 2025年; 为建立一种可快速鉴别检测蛙病毒3型(FV3)类和桑蒂库帕蛙病毒(SCRV)类的双重荧光定量PCR(qPCR)方法,本研究根据FV3类和SCRV类的主要衣壳蛋白(MCP)基因序列,设计一对特异性引物和两种不同荧光标记的探针,采用特异性引物扩增虎纹蛙病毒(TFV)和大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)的目的基因,构建重组质粒标准品pMD19-T-TFV和pMD19-T-LMBV。采用矩阵法优化各反应条件后,初步建立了检测这两类蛙病毒的双重qPCR方法。标准曲线结果显示两个重组质粒标准品混合物与各自的Ct值均呈良好的线性关系。采用本研究建立的方法分别检测TFV、LMBV、伯勒虹彩病毒(BCV)、蛙病毒3型、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、锦鲤疱疹病毒、罗非鱼湖病毒、病毒性神经坏死病毒、斑点叉尾鮰病毒、鲤浮肿病毒、传染性造血器官坏死病毒、传染性脾肾坏死病毒、呼肠孤病毒Ⅱ型、疱疹病毒Ⅱ型,评估该方法的特异;以100~108稀释的重组质粒标准混合物为模板采用建立的双重qPCR方法检测,评估该方法的敏感性;以10^(2)~10^(8)稀释的重组质粒标准混合物为模板采用该双重qPCR方法分别进行组内和组间的重复性试验。结果显示,该方法仅能扩增出FV3类的TFV、BIV、FV3及EHNV和SCRV类的LMBV,其他病毒均无扩增曲线;对pMD19-T-TFV和pMD19-T-LMBV的检测限分别为1拷贝/µL和10拷贝/µL;组内变异系数和组间变异系数均小于2%。利用建立的双重qPCR方法和WOAH推荐的常规PCR方法分别对298份临床样品分别进行检测,结果显示,双重qPCR方法检出21份SCRV类,2份FV3类,普通PCR方法检出15份SCRV类,2份FV3类,双重PCR方法与常规PCR方法对FV3类和SCRV类的检测结果的阳性符合率均达100%。本研究建立的双重qPCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,对于多种蛙病毒属成员的鉴别检测和早期预警具有重要意义。; 邓艳柏建山徐浩季新成黄燕琼何淑华曾伟伟蒋茗; 关键词：TAQMAN探针

基因Ⅰ型和Ⅱ型鹅源呼肠孤病毒双重荧光定量PCR引物及试剂盒: 本发明涉及一种基因Ⅰ型和Ⅱ型鹅源呼肠孤病毒双重荧光定量PCR引物及试剂盒。所述引物包括第一引物对，和第二引物对，所述第一引物对的上游引物Ⅰ‑F序列如SEQ ID No：1所示，所述第一引物对的下游引物Ⅰ‑R序列如SEQ ...; 梅堃李文君黄淑坚刘莹莹陆泳锟李雨泽尹政浩徐杭

一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用: 本发明公开了一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用；所述AIE阴道分泌物双重荧光染色液包括荧光剂；所述荧光剂包括第一荧光剂和第二荧光剂；第一荧光剂与第二荧光剂的摩尔比为1：（1‑6）。本发明AIE阴道分泌物双重荧光染...; 唐本忠何柳赵雪健王志明刘勇龚晚君

一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用: 本发明公开了一种AIE阴道分泌物双重荧光染色液及其应用；所述AIE阴道分泌物双重荧光染色液包括荧光剂；所述荧光剂包括第一荧光剂和第二荧光剂；第一荧光剂与第二荧光剂的摩尔比为1：（1‑6）。本发明AIE阴道分泌物双重荧光染...; 唐本忠何柳赵雪健王志明刘勇龚晚君

人源TREM2蛋白的双重荧光标记活细胞样品及其制备方法和应用: 本发明提出一种人源TREM2蛋白的双重荧光标记活细胞样品及其制备方法和应用，涉及生物标记技术领域，其中，制备方法包括以下步骤：S1、基因扩展和融合：将红色荧光蛋白序列、TREM2基因编码序列及绿色荧光蛋白序列依次相连，得...; 徐亚廷张国良夏章伍静李卓家李银凤

具有双重荧光特性的不对称螺旋型荧光染料及其合成方法和应用: 本发明提供了一类具有双重荧光特性的不对称螺旋型荧光染料及其合成方法，该系列材料不仅结构简单，而且合成便利，并且能够利用其TICT和AIE性质，用作检测有机溶剂种类或极性的荧光探针，或温度传感荧光探针或有机溶剂中水分含量检...; 高鹏许剑斌

PEDV与TGEV双重荧光RT-LAMP检测方法的建立与评价: 2024年; 为建立可快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的双重荧光RT-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,从GenBank下载PEDV和TGEV不同毒株M基因序列进行比对后,针对高度保守区设计合成内、外引物对和探针,在PEDV探针5′端标记FAM基团,3′端标记BHQ1基团,在TGEV探针5′端标记CY5.5基团,3′端标记BHQ2基团,对反应条件和体系优化后建立了一种快速鉴别PEDV和TGEV的双重荧光RT-LAMP检测方法。采用建立的方法在63℃水浴锅中反应60 min,然后再85℃作用10 min结束反应,将反应管置于多色荧光成像仪,在520、690 nm双通道下即可观察结果。用该方法检测其他猪常见病毒性病原均无交叉反应;以10倍稀释的重组质粒为模板评价该方法的灵敏度,结果最低检测限为10^(2)拷贝/μL重组质粒,是常规RT-PCR方法敏感度的10倍。从175份有腹泻症状仔猪的肛拭子样品中采用建立的方法共检出PEDV阳性样品72份,TGEV阳性样品49份,PEDV和TGEV混合感染样品40份,均比采用常规RT-PCR方法的检出率高。本研究建立的双重荧光RT-LAMP方法采用普通水浴锅即可进行扩增反应,而无需对反应产物进行凝胶电泳,为快速方便的进行PED与TGE的鉴别诊断和PEDV与TGEV混合感染的同步检测提供了技术支撑。; 臧冉徐飞飞郑丹阳赵治钤赵谜王慧高洁穆杨; 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒

用于检测猫疱疹病毒Ⅰ型以及猫杯状病毒的一步法双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用: 本发明公开了一种用于检测猫疱疹病毒Ⅰ型以及猫杯状病毒的一步法双重荧光定量PCR检测试剂盒及其应用。本发明根据FHV‑1CIRC基因、FCV ORF1基因和ORF2基因序列分别设计引物与探针，经反应体系和反应条件优化后，建...; 刘家森贾洪林康洪涛姜骞梁雨萌郭焕平

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