搜索到16238篇“ 双抗体夹心ELISA“的相关文章
- 重组猪胰蛋白酶双抗体夹心ELISA的建立及验证
- 2025年
- 目的建立定量检测重组猪胰蛋白酶(recombinant porcine trypsin,RPT)的双抗体夹心ELISA,并进行方法学验证及初步应用。方法通过抗体筛选获得可配对的抗RPT鼠源单克隆抗体对,并确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度、封闭液种类和浓度,建立可定量检测RPT含量的双抗体夹心ELISA,确定该方法的线性范围、灵敏度、准确度、精密度和特异性。用建立的方法检测疫苗制品生产过程中病毒背景液中RPT含量,并验证该方法对不同品牌的天然提取猪胰蛋白酶的检出效率。结果确定了包被抗体(RPT-5C2D12)最佳工作浓度为6.000μg/mL、酶标抗体(RPT-1E10A5)最佳稀释比为1∶5000;封闭液为质量分数1%牛血清白蛋白;四参数逻辑拟合的标准曲线决定系数≥0.990,检测范围为0.156~40.000 ng/mL;定量限为0.156 ng/mL;准确度加标回收率为92.3%~106.7%;精密度验证批间变异系数≤6.7%,批内变异系数≤5.9%;除RPT外,与其他对照品蛋白均无交叉反应;3批次疫苗病毒背景液样品的加标回收率在87.4%~98.2%。2种品牌天然提取猪胰蛋白酶相对RPT的平均检出效率分别为59%和68%。结论成功建立了RPT双抗体夹心ELISA,该方法具有良好的线性关系、灵敏度、准确度、精密度及特异性,可用于疫苗类生物制品的猪胰蛋白酶残留量评估。
- 张婷婷徐然赵海玉安少朋任丽刘朝阳张芹王鹏
- 关键词：胰蛋白酶双抗体夹心法酶联免疫吸附试验
- 检测ENTV与JSRV的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种检测ENTV与JSRV的双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用，属于生物技术领域。所述的双抗体夹心ELISA试剂盒中含有抗山羊地方性鼻内肿瘤病毒p27蛋白单克隆抗体包被的酶标板、抗山羊地方性鼻内肿瘤病毒p27...
- 王晓钧王雪峰
- 结核分枝杆菌PPE18蛋白的双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用
- 本发明适用于基因工程领域，提供了一种结核分枝杆菌PPE18蛋白的双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用，其中，该检测试剂盒包括PPE18鼠单克隆抗体1H14以及HRP标记的PPE18鼠单克隆抗体3L24；所述PPE18蛋...
- 李勇王璞张刚高蔚丰
- 抗BHV-1的重组兔单克隆抗体及双抗体夹心ELISA试剂和应用
- 本发明适用于免疫检测领域，提供了一种抗BHV‑1的重组兔单克隆抗体及双抗体夹心ELISA试剂和应用，其中，抗BHV‑1的重组兔单克隆抗体为兔单抗D1、兔单抗D2和兔单抗D3中的任一种；兔单抗D1的氨基酸序列如序列表SEQ...
- 李勇刘强牛小霞张刚王璞姜玲玲张思浓
- 重组肺炎球菌蛋白疫苗抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立、优化及验证
- 2025年
- 目的建立基于肺炎球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,PspA)的重组肺炎球菌蛋白疫苗中P3296、P5668和PRX13种抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行优化、验证和初步应用,以期为该疫苗的质量监测提供可靠的检测方法。方法用P5668、P3296和PRX1纯化蛋白免疫雄性新西兰大白兔,免疫血清经Protein A-Sephaorse 4B亲和层析纯化后,获得P5668、P3296和PRX1多克隆抗体,以其为包被抗体,HRP标记的相应单克隆抗体为酶标抗体建立抗原双抗体夹心ELISA检测方法。优化包被抗体浓度(3种多克隆抗体均稀释为2、4、8μg/mL)及酶标抗体稀释度(HRP标记的P5668单克隆抗体按1∶4000和1∶8000稀释、HRP标记的P3296单克隆抗体按1∶40000和1∶60000稀释、HRP标记的PRX1单克隆抗体按1∶12000和1∶24000稀释)、封闭液种类(1%BSA、1%鱼皮明胶、1%脱脂乳粉和1%酪蛋白)、稀释液种类(纯化水、1×PBS、2×PBS)、稀释液pH(6.4、7.4、8.4),并验证方法的线性范围、特异性、准确性、精密性、耐用性。分别采用建立的方法及Lowry法检测P5668、P3296、PRX1纯化蛋白(各20批),并分析2种方法检测结果的相关性。将3批P5668、P3296和PRX1混合疫苗经丙磺酸内盐解吸附后,采用建立的方法检测P3296、P5668和PRX1抗原含量。结果纯化的P5668、P3296和PRX1多克隆抗体蛋白浓度分别为1.27、2.20和1.53 mg/mL。P3296、P5668、PRX1多克隆抗体最佳包被浓度均为4μg/mL,HRP标记的P5668、P3296、PRX1单克隆抗体最佳稀释度分别为1∶4000、1∶60000、1∶12000;最佳封闭液为1%BSA,稀释液为1×PBS,稀释液pH为7.4。P5668、P3296和PRX13种参考品在3.125~100 ng/mL范围内,与A_(450)呈良好的线性关系,且R^(2)均>0.99;3种抗原高、中、低浓度加标样本回收率均在80%~120%范围内;3种抗原检测方法均可检出相应的特异性抗原,对其他2种抗原检测结果远低于实际含量或未检出;重复性及中间精密性验证CV�
- 沙芳芳隋秀文周朝东朱婉玉徐丽爽韩强朱涛
- 关键词：双抗体夹心ELISA法抗原含量
- 人A组轮状病毒VP6单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立和验证
- 2025年
- 目的制备人A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)VP6单克隆抗体(简称单抗),建立双抗体夹心ELISA检测方法,并对方法进行验证及初步应用,为我国RVA的快速诊断、流行病学调查及病毒监测提供更多选择。方法利用杆状病毒系统表达纯化人RVA G9P[8]株VP6蛋白,免疫5只雌性BALB/c小鼠,制备单抗,间接ELISA法测定单抗的半数效应浓度(EC_(50)),Western blot和间接免疫荧光试验测定单抗与RVA的结合活性。利用单抗配对,其中1株用于包被,另1株进行HRP标记用于检测,建立双抗体夹心ELISA检测方法,并进行灵敏性、特异性和精密性验证。取RV临床粪便样本,分别利用Oxoid ProSpecT商品化试剂盒和建立的双抗体夹心ELISA法进行检测,比较检测结果的符合率。结果纯化得到可溶的VP6蛋白,纯度达90%以上,表达量约为4.5 mg/L。筛选获得2株RVA VP6单抗,命名为1L3和4F22,与VP6蛋白结合的EC_(50)分别为1.777和3.748 ng/mL,2株单抗与RVA可很好的结合。以1L3单抗为捕获抗体,HRP标记的4F22单抗为检测抗体,建立了人RVA双抗体夹心ELISA检测方法。该方法对RVA VP6蛋白的最低检出量为156.25 ng/mL;2株单抗与人诺如病毒(Norovirus,NoV)、札如病毒(Sapovirus,SaV)、腺病毒(adenovirus,AdV)均无交叉反应;批内和批间精密性验证的变异系数(CV)均<10%。该方法检测192份RV临床粪便样本,与商品化试剂盒检测结果比较,阳性符合率为99%,阴性符合率为98%。结论建立的人RVA双抗体夹心ELISA方法具有良好的灵敏性、特异性和精密性,可用于人RVA的检测。
- 赵颖苏韫曦刘晓钰欧阳瑄泽章青庞立丽李金松李丹地孙晓曼孙晓曼
- 关键词：真核表达单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 双抗体夹心ELISA检检测仁过敏原Amandin
- 2025年
- 本研究以提取纯化的甜杏仁主要过敏原amandin为目标物,制备高亲和力的抗amandin单克隆抗体。以鼠单克隆抗体为捕获抗体、兔多克隆抗体为检测抗体,通过优化封闭液以及缓冲液pH等条件,建立双抗体夹心ELISA方法检测amandin。该方法的检出限为(0.88±0.08)ng/mL,线性范围为5.86~187.5 ng/mL。该方法与芝麻全蛋白、花生全蛋白、核桃全蛋白以及β-乳球蛋白均无交叉反应,表明特异性良好。添加回收实验中面包、饼干、巧克力回收率的范围为82.16%~112.04%,实际样品的检出限分别为(9.07±0.23)ng/mL、(7.78±0.18)ng/mL和(327.37±0.25)ng/mL,说明能够用于实际样品中amandin的准确定量分析。
- 李明新巴巨伟刘俊伟陆旸
- 一种检测裂谷热病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒
- 本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种检测裂谷热病毒的双抗体夹心ELISA检测试剂盒；所述抗体为抗RVFV NP的单克隆抗体，抗体名称为MAb 5D8；由杂交瘤细胞株分泌获得，所述的杂交瘤细胞株命名为RVFV NP‑5D8...
- 钟功勋步志高陶丽红
- 裂谷热病毒NP蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立
- 2024年
- 为建立裂谷热病毒(RVFV)的快速检测方法,本研究选取RVFV高度保守的核蛋白(NP)基因,采用哺乳动物真核表达系统表达并纯化重组NP蛋白(r NP),经SDS-PAGE检测无误后将其分别免疫小鼠和大白兔,按常规实验方法制备RVFV鼠源NP单克隆抗体(MAb)5D8和兔源NP多克隆抗体(PAb)rab NP-1,经ELISA检测二者效价均为1:51200。以rab NP-1 PAb作为捕获抗体,5D8 MAb经HRP标记后作为检测抗体,经条件优化后结果显示,该检测方法捕获抗体浓度为1.56 mg/mL,0.2μg/孔;检测抗体浓度为1.17 mg/mL,2.24 ng/孔,初步建立RVFV双抗体夹心ELISA抗原检测方法。利用该方法分别对克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)、拉沙病毒(LSV)、新冠病毒(SARS-CoV-2)和RVFV的NP以及RVFV Gn蛋白样品进行检测,结果显示,仅RVFV NP蛋白检测结果呈阳性,其余几种病毒蛋白均为阴性,无交叉反应;利用该方法检测2倍倍比稀释(2^(1)~2^(16))的RVFV复制缺陷型灭活病毒样品,结果显示经214倍稀释后的RVFV检测结果仍为阳性,该方法对RVFV检测限为6.1×10^(-1)FFU/mL;利用同一批次和不同批次包被的ELISA板进行批内和批间重复性检测,结果显示批内和批间变异系数均小于8%。使用RVFV灭活病毒对建立的双抗体夹心ELISA检测方法进行验证,结果符合预期。本研究建立的RVFV双抗体夹心ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于RVFV的快速检测,也可为NP蛋白功能的研究提供技术支撑。
- 郭瑶单逢缘陆阳陶丽红王欣慧蒋永伦步志高钟功勋
- 关键词：核蛋白双抗体夹心ELISA
- 马血清淀粉样蛋白A双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种马血清淀粉样蛋白A双抗体夹心ELISA试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有抗马SAA单克隆抗体6F1包被的酶标板以及HRP标记的抗马SAA单克隆抗体3H5；所述的抗马SAA单克隆抗体6F1由杂交瘤细胞株SA...
- 胡哲王晓钧郭巍郭奎
