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一种土壤中拟南芥卡那霉素抗性筛选的方法: 本发明提供一种土壤中拟南芥卡那霉素抗性筛选的方法，属于基因工程技术领域，具体涉及到转基因拟南芥在花絮法侵染后（含卡那霉素抗性载体），播种到土里面用卡那霉素进行筛选的流程。包括种植条件、筛选时机、筛选方式以及筛选浓度，实现...; 祝艺懿先志强谭婷婷

一种卡那霉素抗性肿瘤坏死因子重组表达载体、重组菌和应用: 本发明公开了一种卡那霉素抗性肿瘤坏死因子重组表达载体、重组菌和应用，重组表达载体以缺乏抗性基因的大肠杆菌温度敏感型表达载体为骨架，插入人肿瘤坏死因子基因或重组人肿瘤坏死因子基因，以及带有启动子的卡那霉素基因。本发明的肿瘤...; 李平王灿珍于广海

重组人白细胞介素-1受体拮抗剂卡那霉素抗性菌种的构建、表达、纯化及质量鉴定: 2024年; 目的构建卡那霉素抗性的重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1Ra)菌种,并进行rhIL-1Ra蛋白的表达、纯化及质量鉴定,以降低β-内酰胺抗生素带来的风险。方法分别以氨苄抗性的质粒rhIL-1Ra(A-rhIL-1Ra)、pET-28a为模板,进行PCR扩增,获得线性化载体和卡那霉素基因片段,经同源重组构建卡那霉素抗性的质粒rhIL-1Ra(K-rhIL-1Ra),测序正确后转化E.coli BL21(DE3),构建重组工程菌,经IPTG诱导表达后,进行CM Bestarose Fast Flow、DEAE Bestarose Fast Flow两步柱层析纯化。收集纯化产物,15%SDSPAGE、分子排阻高效液相色谱法(size-exclusion high-performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)检测纯度,串联质谱法检测质谱相对分子质量,Western blot法鉴定特异性,报告基因法检测生物学活性,液相色谱-质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)法分析比对产品相关杂质。结果经菌落PCR及测序鉴定证明质粒K-rhIL-1Ra构建正确。表达的K-rhIL-1Ra蛋白相对分子质量约17000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%以上;两步纯化的K-rhIL-1Ra蛋白纯度分别为97%和99%,单体含量分别为99.33%和100%,色谱纯度分别为91.86%和96.96%,质谱相对分子质量与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致,可与小鼠抗人IL-1Ra单抗发生特异性反应;纯化的K-rhIL-1Ra蛋白生物学活性为1.29×10^(5)U/mg,相关蛋白化学修饰类型与标准品(A-rhIL-1Ra蛋白)一致。结论成功构建了K-rhIL-1Ra菌种,表达并纯化后的蛋白符合rhIL-1Ra的特征和质量标准,为rhIL-1Ra菌种变更及可比性研究奠定了基础。; 殷婷婷朱秋媚张宇王江林王明军曲玲玲朱翯顾笑宇刘景会富锐丽刘玉林; 关键词：同源重组抗性基因

基于卡那霉素抗性系统的内含肽定向进化及应用: 内含肽是一种内部蛋白序列,它在翻译后自我切除并将侧翼外显肽序列剪接在一起。天然存在和人工构建的内含肽在蛋白质工程领域已有广泛的应用。然而,当放置在非天然宿主蛋白中时,内含肽通常效率降低甚至无活性。其对两侧临近的氨基酸种类...; 詹琴; 关键词：定向进化

利用卡那霉素抗性基因作为筛选标记对麻疯树进行基因转化的方法: 本发明涉及一种利用卡那霉素抗性基因作为筛选标记对麻疯树进行基因转化的方法，包括以下步骤：制备麻疯树外植体以及农杆菌液，外植体经农杆菌浸染后进行共培养；共培养后的外植体经脱菌后接入筛选培养基C13KC进行培养，从而获得抗性...; 王梅珍孙怀娟许文钊潘文欢李耿光

卡那霉素抗性标记的转基因茎瘤芥筛选方法: 本发明公开了一种卡那霉素抗性标记的转基因茎瘤芥筛选方法，所述方法通过切取茎瘤芥叶片并放入含6-苄氨基腺嘌呤和卡那霉素的水溶液的检测液中观察叶片是否黄化死亡来判断转基因与否，实验成本低，方法简单；当筛选的植株量大时，该方法...; 向浏欣蔡应繁付于银刘吉军冉燕子王秋娟王小艳

具有卡那霉素抗性的重组pUC57载体及其构建方法: 本发明属于基因工程领域，公开了具有卡那霉素抗性的重组pUC57载体及其构建方法。具有卡那霉素抗性的重组pUC57载体，其特征在于其序列如SEQ ID NO.1所示。将克隆得到的pUC57载体骨架与含有卡那霉素抗性基因的片...; 董亢陈文柱徐士军卢圣东王珠银

利用卡那霉素抗性基因启动子表达的重组克雷伯氏菌及其应用: 利用卡那霉素抗性基因启动子表达的重组克雷伯氏菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明提供一株提高1，3-丙二醇产量的重组克雷伯氏杆菌，其分类命名为克雷伯氏杆菌(Klebsiella sp.)pETPkan-dhaT，已保...; 饶志明马正杨套伟诸葛斌方慧英诸葛健

利用卡那霉素抗性基因作为筛选标记对麻疯树进行基因转化的方法: 本发明涉及一种利用卡那霉素抗性基因作为筛选标记对麻疯树进行基因转化的方法，包括以下步骤：制备麻疯树外植体以及农杆菌液，外植体经农杆菌浸染后进行共培养；共培养后的外植体经脱菌后接入筛选培养基C13KC进行培养，从而获得抗性...; 王梅珍孙怀娟许文钊潘文欢李耿光

自身启动子控制的卡那霉素抗性基因在哺乳动物细胞中表达的检测被引量：1: 2012年; 为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白;用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好;分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-1细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物;将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan抗性蛋白表达;以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达;将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达。这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白。; 翁玉根吉玉辉孙怀昌张鑫宇朱建国易明梅袁耀明; 关键词：大肠杆菌卡那霉素抗性基因细胞表达奶牛

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