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猪多杀性巴氏杆菌5个抗原蛋白的免疫保护效力比较研究: 2025年; 为筛选多杀性巴氏杆菌(PM)的优势保护性抗原,本研究利用原核表达系统表达了PM 5个重组蛋白rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化该5个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果;采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rTorA主要以包涵体的形式表达,重组蛋白rPlpE以可溶性和包涵体两种形式表达,重组蛋白rThiB、rPGAM和rPrX主要以可溶性形式表达。纯化后分别在91 ku、45 ku、41 ku、32 ku和25 ku处出现单一目的条带,纯化效果较好;western blot结果显示,5个重组蛋白均可与猪PM阳性血清发生特异性反应,表明5个重组蛋白的反应原性均较强;采用超微量核酸蛋白浓度测定仪测定这5个重组蛋白的浓度分别0.7 mg/mL、2.0 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL和0.5 mg/mL。将这5个重组蛋白分别与ISA201佐剂混合制成疫苗后以皮下注射方式免疫小鼠2次,间隔21 d。利用间接ELISA方法检测各组小鼠免疫后不同时间的抗体水平。二免后15 d,分别从各组随机取一半小鼠,以约4 LD50(210 cfu)A型PM A7强毒株第一次经腹腔注射攻毒;7 d后,将各组剩余的小鼠再以相同剂量的PM A7株攻毒。间接ELISA检测结果显示,5个重组蛋白疫苗均能诱导免疫小鼠产生较高水平的IgG抗体。攻毒结果显示,对照组小鼠全部死亡,各蛋白疫苗组(除rPlpE组外)也出现不同程度的发病死亡情况,死亡小鼠剖检均呈典型的败血症性病理变化,从死亡小鼠的心、肺、肝等组织脏器中均能分离到PM;在第一次攻毒试验中,rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX疫苗对小鼠提供的免疫保护率分别为60%(6/10)、100%(10/10)、90%(9/10)、70%(7/10)、20%(2/10);在第二次重复攻毒试验中rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX疫苗分别对小鼠提供60%(6/10)、100%(10/10)、80%(8/10)、60%(6/10)、40%(4/10)的免疫保护率。两次攻毒试验结果基本一致。; 孙贺洁孙鑫妍申慧媛张俊峰关丽君董发明董发明薛云; 关键词：多杀性巴氏杆菌抗原免疫保护

鸡毒害艾美耳球虫EnROP17和EnROP30的原核表达及其免疫保护效力分析: 鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠道引起的一种寄生虫病,其病原有7种,其中毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）主要危害8～18周龄的育成鸡,可引起鸡的急性小肠球虫病,导致育成鸡的大批死亡。迄今,防治鸡球虫病的...; 李慧中; 关键词：毒害艾美耳球虫原核表达免疫保护效力

副猪格拉瑟菌两种重要抗原蛋白的串联表达及其免疫保护效力的研究: 2024年; 为获得副猪格拉瑟菌(GPS)亚单位疫苗的高效保护性抗原,本研究利用原核表达系统对GPS重要保护性抗原Hps06257与HbpB及其C端片段(HbpB2)进行了融合表达,获得4个重组蛋白rHps06257-HbpB、rHbpBHps06257、rHps06257-HbpB2和rHbpB2-Hps06257。采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化该4个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果。采用超微量核酸蛋白浓度测定仪测定这4个串联重组蛋白以及实验室前期保存的两个重组蛋白(rHps06257和rHbpB)的浓度后,分别与ISA201佐剂混合制成亚单位疫苗,对小鼠经皮下注射方式免疫2次,分别在小鼠免疫前、首免后21 d和二免后14 d采血,采用间接ELISA方法检测各组小鼠的抗体水平;二免后15 d分别以5 LD50(8.40×10^(8)cfu)和10 LD50(1.68×10^(9)cfu)的GPS 5型H5L3株菌液对小鼠经腹腔攻毒,统计各重组蛋白疫苗对小鼠的攻毒保护率。SDS-PAGE检测结果显示,4个重组蛋白分别在约92.4 ku、92.5 ku、63.6 ku和63.6 ku处出现目的条带,均以包涵体形式表达,其表达量占菌体总蛋白的11.2%~28.3%。4个重组蛋白的纯化效果均较好,浓度介于1.2 mg/mL~3.0 mg/mL。Western blot结果显示,4个重组蛋白均能够与GPS阳性血清发生特异性反应。ELISA结果显示,各重组蛋白疫苗免疫组小鼠血清中IgG抗体水平随免疫次数的增加而升高,且均与PBS对照组差异极显著(P<0.01),其中rHps06257-HbpB组小鼠血清中的IgG抗体水平最高。攻毒试验结果显示,采用5 LD50H5L3株攻毒后,重组蛋白疫苗rHps06257-HbpB、rHbpB-Hps06257、rHps06257-HbpB2和rHbpB2-Hps06257对小鼠的免疫保护率均为100%(6/6),重组蛋白疫苗rHps06257和rHbpB对小鼠的免疫保护率分别为67%(4/6)和50%(3/6)(对照组存活率为0);采用10 LD50H5L3株攻毒后,6个重组蛋白疫苗对小鼠的免疫保护率分别为83%(5/6)、0、67%(4/6)、33%(3/6)、0和0。本研究对GPS重要保护性抗原Hps06257与HbpB及其C端片段(HbpB2)进行了4种�; 杨金钱董玉岗丁略烜史琳琪杨梦娟张俊峰关丽君司丽芳司丽芳薛云; 关键词：小鼠保护效力亚单位疫苗

表达2.3.4.4b分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建及其免疫保护效力的研究: 2024年; 近年来,2.3.4.4b分支H5亚型禽流感病毒(AIV)引起的禽流感疫情在全球多国暴发,切断水禽作为AIV传播媒介的途径对于禽流感的防控意义重大。为研制针对当前H5亚型AIV流行株和鸭瘟病毒(DEV)感染均具有免疫保护作用的疫苗,本研究经PCR扩增2.3.4.4b分支H5亚型AIV HA基因,按照文献方法构建以DEV疫苗株为载体,表达2.3.4.4b分支H5亚型AIV代表株A/whooper swan/Shanxi/4-1/2020(H5N8)HA基因的重组DEV,命名为rDEV-14株。将rDEV-14株在CEF中连续传代后,经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测,并检测各培养时间rDEV-14株的TCID_(50),分析其生长特性。结果显示,在10、15代rDEV-14的PCR产物中检测到HA基因,IFA和western blot检测结果显示HA基因可在rDEV-14株各代中稳定遗传和表达。生长曲线测定结果显示rDEV-14株在CEF中的生长曲线与亲本病毒DEV疫苗株趋势一致。以不同剂量rDEV-14株免疫4月龄SPF鸭14 d后,采用DEV强毒AV1221株攻毒,结果显示,各剂量rDEV-14株均可诱导SPF鸭对DEV感染的完全免疫保护。以不同剂量rDEV-14株免疫2周龄SPF鸭后,分别利用同源和2021年~2022年分离的H5亚型异源高致病性AIV(HPAIV)(H5N6及两株H5N1 AIV)攻毒后记录各组鸭发病和死亡情况、检测排毒情况和HI抗体,结果显示,10^(4)TCID_(50)和10~5TCID_(50)免疫组鸭在攻毒后两周内无发病、无死亡、不排毒,并可诱导鸭产生良好且持久的HI抗体。上述结果表明本研究制备的重组病毒r DEV-14可对DEV强毒、同源H5亚型AIV强毒以及2021年~2022年分离的H5N1和H5N6异源HPAIV攻毒鸭产生完全的免疫保护力。本研究为我国水禽禽流感和鸭瘟的防控提供了新的候选疫苗株。; 张小雨刘静赵玉博焦晨晨麻琦陈普泽谢艳陈普成姜永萍陈化兰柳金雄; 关键词：鸭瘟 H5亚型禽流感病毒活载体疫苗

表达猪附红细胞体ENO蛋白的重组腺病毒对仔猪的免疫保护效力研究被引量：1: 2024年; 为评估表达猪附红细胞体α-烯醇化酶(ENO)蛋白的重组腺病毒对猪的免疫保护作用,本研究选取12头断奶仔猪均分为3组,A组经颈部肌肉注射1×1010pfu/mL的重组腺病毒2.5 mL,B组经颈部肌肉注射1×1010pfu/mL的重组空载体腺病毒2.5 mL,C组经颈部肌肉注射等量的PBS作为阴性对照组。共免疫两次,间隔21 d。在一免后每7 d收集仔猪血清,利用间接ELISA方法检测每组仔猪的抗体水平,为期49 d。二免后14 d,无菌摘取仔猪脾脏,制备脾淋巴细胞悬液,利用流式细胞术检测每组仔猪脾脏中的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞的含量及CD4^(+)/CD8^(+)、CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞的比值。在摘脾7 d后利用纯化后的猪附红细胞体对仔猪攻毒并记录各组仔猪的临床症状。攻毒后14 d对所有仔猪经颈静脉采血,检测各组仔猪的血常规及血液生化指标。于攻毒后不同时间经颈静脉采血,采用PCR检测猪附红细胞体,确定感染时间及携带病原的持续时间,共观察49 d。结果显示,与B、C组相比,自免疫后28 d起,A组猪附红细胞体特异性抗体水平极显著升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,A组仔猪脾脏的CD3^(+)、CD4^(+)及CD8^(+)T淋巴细胞含量均极显著高于B、C组(P<0.01);A组仔猪CD4^(+)/CD8^(+)、CD3^(+)/CD4^(+)T淋巴细胞的比值均显著高于B、C组(P<0.05)。攻毒结果显示,B、C组仔猪出现相应发病症状且体温、体重、血液指标变化异常,A组仔猪未出现临床症状且各血液指标均在正常范围内。PCR结果显示,A组仔猪攻毒后携带病原持续时间为2d,B、C组仔猪攻毒后在整个实验周期49 d持续携带病原。综上所述,表达猪附红细胞体ENO蛋白的重组腺病毒能够对仔猪提供较强的抵抗强毒攻击的作用,对当前流行的猪附红细胞体病有良好的免疫保护效力。本研究为开发安全、高效的猪附红细胞体病疫苗提供了科学依据,并为深入了解ENO蛋白的免疫保护机�; 刘喆韩金成王金琦殷国璐徐颖薛书江韩贞珍; 关键词：猪附红细胞体重组腺病毒仔猪 ENO 免疫保护

副猪格拉瑟菌4个抗原蛋白的小鼠免疫保护效力比较: 2024年; 为筛选可用于副猪格拉瑟菌(GPS)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究利用原核表达系统表达GPS的CyaY、SmpA、AfuA和OppA14个抗原的重组蛋白,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化这4个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果,采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,4个重组蛋白r CyaY、r SmpA、rAfuA和rOppA1的分子量分别约为12 ku、16 ku、41 ku和62 ku,均主要以可溶性形式表达,其表达量占菌体总蛋白的16.50%~26.50%。4个重组蛋白的纯化效果均较好,其浓度介于1.00 mg/mL~4.00 mg/mL。Western blot结果显示,rOppA1和rAfuA与GPS猪阳性血清的反应原性最强,rCyaY的反应原性中等,rSmpA的反应原性最弱。采用超微量核酸蛋白浓度测定仪测定4个重组蛋白的浓度后分别与ISA 201佐剂混合制成疫苗,对小鼠经皮下注射方式免疫2次,分别在小鼠免疫前、首免后21 d和二免后14 d采血,采用间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的抗体水平;二免后14 d分别以5 LD_(50)(8.40×10^(8)cfu)和10 LD_(50)(1.68×10^(9)cfu)的5型GPS H5L3株对小鼠经腹腔攻毒,统计各重组蛋白疫苗对小鼠的免疫攻毒保护率。ELISA结果显示,各重组蛋白疫苗免疫组小鼠血清中IgG抗体水平随免疫次数的增加而升高,且均与PBS对照组抗体水平差异极显著(P<0.01)。小鼠攻毒试验结果显示,采用5 LD_(50)H5L3株攻毒后,rCyaY、rSmpA、rAfuA和rOppA1蛋白疫苗对小鼠的免疫保护率分别为83.3%(5/6)、83.3%(5/6)、33.3%(2/6)和100%(6/6);采用10 LD_(50)H5L3株攻毒后,rCyaY、r SmpA和rOppA1蛋白疫苗仍能对小鼠提供33.3%(2/6)、16.7%(1/6)和50%(3/6)的免疫保护率,但rAfuA蛋白疫苗不能为小鼠提供有效的免疫保护力(0/6)。本研究首次在相同条件下表达了GPS的4个重要保护性重组抗原蛋白rCyaY、rSmpA、r AfuA和r OppA1,并评价了它们对小鼠的免疫保护效力,证实rOppA1具有成为亚单位疫苗候�; 董玉岗杨金钱丁略烜史琳琪杨梦娟张俊峰关丽君司丽芳司丽芳薛云; 关键词：抗原小鼠保护效力亚单位疫苗

表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价被引量：1: 2024年; 为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM^(+)HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10^(5) TCID_(50)/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10^(5) TCID_(50)/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10_(5) TCID_(50)/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由流式细胞术分析体内免疫细胞亚群比例可知,疫苗组同疫苗对照组相比,疫苗组的重组疫苗株能够引起免疫记忆细胞亚群CD4^(+)CD8^(+)T在免疫后28 d显著升高,以及引发攻毒后其抗原递呈细胞显著增多,进而促进CD4-CD8^(+)T的增殖以发挥抗病毒免疫应答。本研究筛选出了一株具有改善HuN4-F112弱毒疫苗株免疫效果的重组病毒rPRRSV-GM-CSF,为进一步研发广谱通用的新型疫苗奠定基础。; 虞凌雪姜一峰姜一峰杨莘于海周艳君童武高飞李国新刘长龙郑浩单同领李丽薇孔宁; 关键词：杀伤性T淋巴细胞

羊快疫、猝狙、羔羊痢疾和肠毒血症亚单位疫苗对绵羊的免疫保护效力研究: 由腐败梭菌及B、C、D型产气荚膜梭菌引起的羊快疫、羔羊痢疾、猝疽和羊肠毒血症,可迅速致死患病动物,死亡率高且药物难以及时有效治疗,其防控以疫苗预防为主,传统羊梭菌病三联四防疫苗由发酵培养细菌灭活制成,毒素产量不稳定,生产...; 马清龙; 关键词：亚单位疫苗

新型结核杆菌融合菌株灭活疫苗的免疫保护效力和免疫记忆研究: 结核病,是由结核分枝杆菌作为病原体感染引起的,世界范围内具有重大公共卫生威胁的传染性疾病。当今,结核病在全球的流行呈现高发态势,耐药结核病发病率亦与日俱增。目前,临床上唯一应用于结核病预防的疫苗:卡介苗,问世已过百年,其...; 丰启盈; 关键词：结核病疫苗免疫保护免疫记忆

猪多杀性巴氏杆菌4个重组蛋白的小鼠免疫保护效力比较被引量：4: 2023年; 为筛选多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据GenBank中登录的Pm基因序列,设计相应引物,经PCR扩增Pm torA、prX、gpmA和thiB基因片段,分别克隆于原核表达载体pET28a中,构建各重组表达质粒,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化获得4个重组蛋白rTorA、rPrX、rPGAM和rThiB,同时利用透析膜制备rTorA的粗提蛋白(rTorA-C)。SDS-PAGE检测结果显示,分别在91 ku、25 ku、32 ku及41 ku处出现目的条带,表明4个重组蛋白均正确表达,其中rTorA主要以包涵体形式表达,少量表达在上清中;rPrX、rPGAM和rThiB主要以可溶性形式表达;各重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的7.44%~61.46%,各重组蛋白纯化后的纯度为76%~98.15%,浓度为0.15 mg/mL~4.56 mg/mL。Western blot检测结果显示,分别在上述4个位置处出现特异性条带。将4个纯化蛋白和rTorA-C分别与MontanideTM ISA 201 VG佐剂混合制成亚单位疫苗,免疫小鼠后分别于首免前、首免后14 d、二免后14 d(首免后28 d)采血,分离血清,通过间接ELISA方法检测各组小鼠抗体水平;二免后15 d采用4倍半数致死剂量(LD50)A型Pm强毒A5株菌液进行腹腔注射攻毒,观察并记录小鼠死亡及发病情况至21 d。ELISA检测结果显示,各重组蛋白免疫组小鼠的IgG抗体水平均随免疫次数的增加而升高,与PBS对照组相比差异均极显著(P<0.01)。攻毒试验结果显示,PBS对照组小鼠攻毒后24 h内开始发病,10 d内全部死亡(10/10);发病小鼠主要症状为精神萎靡、食欲减退或废绝,被毛凌乱,对外界刺激无明显反应等;对死亡小鼠剖检,各组织器官主要表现为出血为特征的败血症的剖检变化。各重组蛋白免疫组小鼠中,也出现了不同程度的发病或死亡。rTorA、rTorA-C、rPGAM、rThiB和rPrX免疫组小鼠的免疫保护率分别为60%、40%、100%、20%和0。本研究首�; 孙鑫妍王怡涤关丽君史琳琪薛云司丽芳赵战勤; 关键词：多杀性巴氏杆菌小鼠免疫保护效力亚单位疫苗

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