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马蓝中双功能糖基转移酶ScUGT基因的克隆表达与应用: 本发明提供了马蓝双功能糖基转移酶ScUGT编码的基因以及蛋白质和应用，属于生物技术领域。所述的糖基转移酶ScUGT的核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明揭示了马蓝吲哚酚的储存...; 谭何新刘畅程梦雅张丹凤

烟草肠杆菌芳香族氨基酸转氨酶的结构预测、克隆表达及酶学性质研究: 2025年; 为提升芳香族氨基酸转氨酶(AAT)在合成生长素、促进作物生长方面的潜在应用价值,采用生物信息学方法对烟草肠杆菌β7(Enterobacter tabaci strainβ7)AAT的结构进行分析和预测,利用大肠杆菌对该酶进行异源克隆表达和纯化,并测定重组AAT的酶学性质。结果表明:AAT含有396个氨基酸,该酶活性中心关键氨基酸残基为Lys246;由大肠杆菌异源表达的重组AAT的分子质量约为43 kDa,其最适底物为色氨酸,最适反应温度为50℃、pH值为8.0;重组AAT对乙醇具有较好的耐受性,且Cu^(2+)对该酶活性有一定的促进作用。该研究结果可为烟草肠杆菌AAT的酶分子改造和高产生长素工程菌的构建提供理论基础。; 徐瑞敏邵化李晨飞单明明魏涛; 关键词：生长素克隆表达酶学性质

噬菌体VB_SauM_Lm44穿孔素HolLm44的克隆表达及其抑菌效果研究: 2025年; 本试验旨在克隆表达金黄色葡萄球菌噬菌体VB_SauM_Lm44穿孔素并研究其抑菌效果。首先,通过分析VB_SauM_Lm44基因组,获得穿孔素基因序列,并利用PCR扩增穿孔素基因(命名为HolLm44,其表达的穿孔素蛋白命名为HolLm44);然后,将目的基因片段与双酶切处理后的线性pET-28a(+)质粒连接、转化入大肠杆菌DH5α克隆感受态细胞,提取重组质粒并转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)及BL21(DE3)plysS,进行目的蛋白诱导表达和纯化;最后,通过平板抑菌法及刃天青染色法验证穿孔素的抑菌效果,探究穿孔素HolLm44发挥其活性的最适作用条件。结果显示:穿孔素HolLm44具有2个跨膜区,其N-端和C-端都分布于细胞质内,属于Ⅱ类穿孔素。穿孔素HolLm44最适作用温度为37℃,最适作用pH为5.2。在作为指示菌的20株金黄色葡萄球菌中,只有1株为对穿孔素HolLm44表现出敏感性。本研究成功克隆表达出了噬菌体VB_SauM_Lm44中具有活性的穿孔素HolLm44,并证实其具有良好的抑制金黄色葡萄球菌的效果。; 张欣然廖毅婷熊东炜李鹏杨淑华龙淼; 关键词：穿孔素克隆表达抑菌金黄色葡萄球菌

扁桃SBP基因家族鉴定及PsdSBP1克隆表达分析: 2025年; S-RNase binding protein是与S-RNase蛋白质相互作用的一类蛋白,而SBP1在配子体植物中属于自交不亲和性基因,起SSK1和Rbx1作用,并形成一个SCF^(SLF/SFB)复合体,用于非自身S-RNase的泛素化进程,调控配子体植物自交不亲和反应进程。本研究利用生物信息学技术筛选扁桃基因组中SBP家族成员并进行表达模式分析,同时克隆PsdSBP1基因进行RT-qPCR分析。从扁桃中筛选到13个PsdSBPs家族蛋白成员,均为亲水性蛋白;系统进化树划分4个亚簇,分别具有2对片段复制和串联重复基因。PsdSBPs大部分成员主要在扁桃花组织中表达显著,而受冷冻胁迫后在花药和子房中的表达被抑制。克隆得到PsdSBP1和PsdSBP-4序列一致,扁桃自交异交授粉表达模式表明PsdSBP-4在异交中的表达量比花粉和自交高出一倍,表达活性增强,并且荧光定量结果表明PsdSBP1在花粉和花柱中均有表达活性,进而可以说明PsdSBP1在异交授粉后活性会增强。蛋白质关联网络结果表明PsdSBP-4(PsdSBP1)与CUL1蛋白具有互作关系,参与SCF复合体。综上所述,扁桃中存在SBP1基因并与CUL1互作,极大可能参与扁桃自交不亲和反应进程。本次研究为深入探究SBP1基因在扁桃中调控自交不亲和性提供理论依据。; 张冬冬杨佳惠曾斌余镇藩高雯雯马昕彤; 关键词：扁桃 S-RNASE 生物信息学分析

短乳杆菌NM-1谷氨酸脱羧酶基因的克隆表达及其酶活力: 2025年; 谷氨酸脱羧酶(GAD)能将底物L-谷氨酸(L-Glu)转化成γ-氨基丁酸(GABA),谷氨酸脱羧酶的酶活力是影响GABA合成效率的关键因素。为了提高GABA的产量,本实验从自然界中筛选出一株产谷氨酸脱羧酶的乳酸菌,初步鉴定为短乳杆菌,命名为短乳杆菌NM-1。分别克隆短乳杆菌NM-1中编码GAD的基因gadA和gadB,连接到pET-30a(+)表达质粒,构建重组质粒,并将重组质粒通过热激法转入E.coli BL21(DE3),构建得到基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-gadA和E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-gadB(分别简称GadA-30a和GadB-30a)。结果表明,在相同培养条件下,GadB-30a全细胞催化能力远高于GadA-30a,提示短乳杆菌NM-1的GAD活性依赖于gadB基因。GadB-30a的GAD酶活力为6.52 U/mL,比活为9.59 U/mg。; 李文杰谭琛刘昊张春枝; 关键词：谷氨酸脱羧酶短乳杆菌 L-谷氨酸 Γ-氨基丁酸

圆锥节丛孢菌AC-XJ株几丁质酶AC-chi6195基因的克隆表达及生物学活性研究: 2025年; 旨在探究圆锥节丛孢菌几丁质酶的生物学功能。在圆锥节丛孢菌新疆株AC-XJ全基因组测序基础上,选取几丁质酶基因AC-chi6195为研究对象,对其进行克隆与分子特征分析并原核表达获得重组蛋白,采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定该重组蛋白的酶活性,分析该重组蛋白在不同pH值、温度、底物、金属离子及化学试剂条件下的酶学特性,将其作用于秀丽隐杆线虫及马圆形线虫三期幼虫并分析其生物学功能。结果:AC-chi6195基因全长1453 bp,有2个内含子序列,共编码398个氨基酸,AC-chi6195属于糖基水解酶18家族且三级结构为典型的几丁质酶三磷酸异构酶桶形结构;遗传进化分析显示其与少孢节丛孢菌XJ-A1株几丁质酶AO-379亲缘关系相对最近;SDS-PAGE分析显示,重组蛋白AC-chi6195分子质量约为42 kDa;采用Ni柱层析法结合Western blot检测显示,获得了纯化的目的蛋白;DNS还原糖法检测显示,该重组几丁质酶活性为102 U/mg;酶学特性分析显示,该酶的最适反应条件为pH=7,40℃,1,4-二硫代苏糖醇(DTT)、SDS、Cu^(2+)对其有抑制作用,该酶可降解胶体几丁质和少量壳聚糖;用重组几丁质酶AC-chi6195分别处理秀丽隐杆线虫和马圆形线虫三期幼虫12、24、36 h后,秀丽隐杆线虫死亡率分别为65%、93%、100%,马圆形线虫三期幼虫死亡率分别为75%、97%、100%。本研究结果为捕食性真菌高效杀线虫酶制剂的研发提供了依据。; 王水怡刘丹丹杜少磊刘雨桐姜冰冰朱慧茹巴音查汗张杨张杨张伟; 关键词：几丁质酶酶学特性生物学活性

百香果PYL4基因克隆表达及其功能研究: 百香果(Passiflora edulis Sims)是西番莲科西番莲属多年生常绿草质藤本植物,其汁独特鲜美,其根、茎叶、花均可入药,具有极高的营养价值、食用价值及药用价值,近年来作为一种经济投资在中国迅速发展,深受大众...; 巫天丽; 关键词：百香果原核表达真核表达

边缘革蜱水通道蛋白（AQPs）的原核克隆表达及其免疫效果分析: 边缘革蜱(Dermacentor marginatus,D.marginatus)属硬蜱科,革蜱属,广泛的分布于亚欧大陆,在我国主要分布于新疆,是地方优势蜱种。寄生于牛、羊、马及啮齿类动物,并传播森林脑炎、巴贝斯虫病、泰...; 伍军; 关键词：水通道蛋白克隆表达多克隆抗体免疫保护效果

Thermococcus siculi HJ21高温普鲁兰酶基因的克隆表达及其热稳定性保护剂研究: 2024年; 普鲁兰酶是水解α-1,6糖苷键的淀粉脱支酶,可提高淀粉制糖的糖化率。该研究将古菌Thermococcus siculi HJ21的超嗜热普鲁兰酶Pul-HJΔ782基因克隆在冷休克启动子cspA的质粒pColdⅠ,在宿主大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中诱导表达,研究其酶学性质,通过单因素和响应面试验优化该酶的热稳定性保护剂,并考察保护剂对酶水解马铃薯淀粉的影响。结果表明,该酶的最适作用温度和pH分别为90℃和6.5,在温度80~100℃及pH 4.0~9.0范围稳定性良好。最佳热稳定性保护剂配方为Ca^(2+)添加量0.15 mol/L、甘油添加量5.4%、Tween 20添加量3.8 mL/L、明胶添加量4.0 g/L。在该优化条件下,90℃保温12 h后,酶活保留率为97.43%,比对照组提高了34.94%。该酶的糖化率显著提高,对马铃薯淀粉糖化40 h葡萄糖当量(DE)值为58.35%,比对照组比提高了11.78%。; 倪豪郝悦于轶群薛陆州郝青芳亢新鑫王淑军; 关键词：普鲁兰酶基因克隆表达热稳定性保护剂

耐热微泡菌Microbulbifer thermotolerans YLW106几丁质酶的基因克隆表达及酶学性质分析: 2024年; 为促进几丁质废弃物的高值化利用,本研究从耐热微泡菌Microbulbifer thermotolerans YLW106菌株中克隆、表达几丁质酶基因,并探究重组酶的酶学性质。实验结果表明,成功克隆了几丁质酶基因Chi2375,并在大肠杆菌中诱导表达重组酶Chi2375。以胶体几丁质为底物,重组酶Chi2375的最适反应温度为55℃,在50、55℃的半衰期(t_(1/2))分别为60和2 h;最适pH值为8.0,在pH值为3.5-12.0条件下,4℃保温24 h后重组酶Chi2375的相对酶活力保持在85%以上,酶活力较为稳定;5 mmol·L^(-1)的Cu^(2+)、1%的Triton X-100和1%的DTT对重组酶Chi2375具有促进作用,相对酶活力分别约为140%、130%和180%;最适底物为β几丁质,以胶体几丁质为底物,重组酶Chi2375的V_(max)和K_(m)分别为(7.49±0.25)U·mg^(-1)、(33.75±1.24)mg·mL^(-1);重组酶Chi2375与胶体几丁质反应的产物为纯度90%以上的几丁二糖,在医药和食品领域具有潜在的应用前景。; 欧阳玉滢林梅王巧贞卢波吕心悦黄俊周蓉梁士颉覃秋容王青艳黄庶识廖思明; 关键词：几丁质酶克隆表达酶学性质

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